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ASE-HPLC法同时测定壮骨伸筋胶囊中4个成分的含量
目的:建立快速溶剂萃取(ASE)-高效液相色谱法(HPLC)同时测定壮骨伸筋胶囊中葛根素、松果菊苷、柚皮苷和淫羊藿苷的含量.方法:利用正交试验优化快速溶剂萃取仪参数,得到优提取条件,再采用HPLC法同时测定壮骨伸筋胶囊中葛根素、松果菊苷、柚皮苷和淫羊藿苷的含量.采用Phenomenex Kintex C18(4.6 mm× 100 mm,2.6 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1;检测波长为290nm;柱温为30℃.结果:采用甲醇为萃取溶剂,萃取温度为100℃、静态萃取时间为3 min以及循环次数2次的方法优,葛根素、松果菊苷、柚皮苷和淫羊藿苷进样量分别在4.4～109.7 μg(r=0.999 8)、7.5～187.8μg(r=0.999 7)、2.4～58.9μg(r=0.999 8)和4.2～104.8 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均回收率在96.3％～101.3％之间,均符合含量测定的要求,测定样品10批,葛根素、松果菊苷、柚皮苷、淫羊藿苷含量范围分别在1.392～1.520、1.892～2.146、0.335～0.381、0.887～0.925 mg·g-1之间,ASE与药典方法结果无显著差异.结论:本文建立的测定方法具有准确、快速、简便等特点,提升了壮骨伸筋胶囊的质量标准.
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HPLC波长切换法同时测定麝香心脑乐片中7种成分
目的:建立HPLC波长切换法同时测定麝香心脑乐片中羟基红花黄色素A、3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、丹参素、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的含量,为麝香心脑乐片质量的全面评价提供科学依据.方法:该药物70％甲醇提取液采用Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 um),以乙腈(A)-0.4％磷酸溶液(B)为流动相,梯度洗脱.结果:羟基红花黄色素A、3'-羟基葛根素、葛根素、3'-甲氧基葛根素、丹参素、丹酚酸B和丹参酮ⅡA的线性范围分别在1.98～39.60、2.86～57.20、6.14～122.80、2.17～43.40、2.05～41.00、10.68～213.60、2.12～42.40 μg·mL-1内,与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.0％～99.8％,RSD均≤1.8％(n=6).结论:本文建立的样品处理简便,测定结果准确,重复性好,可用于麝香心脑乐片质量评价.
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儿童回春颗粒HPLC特征图谱研究
目的:建立儿童回春颗粒HPLC特征图谱及多指标成分含量测定方法,评价该制剂质量.方法:采用HPLC建立儿童回春颗粒特征图谱及多指标成分含量测定方法,并对6个特征峰进行指认.色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.05 moL· L-1磷酸二氢钾溶液(B)系统,梯度洗脱;流速:1.0 mL· min-1;检测波长:280 nm;柱温25℃.结果:建立了以黄芩苷为参照峰的HPLC特征图谱,并指认了葛根素、芍药苷、异阿魏酸、黄芩苷、牛蒡苷、盐酸小檗碱6个特征峰;分析的10批儿童回春颗粒与共有模式之间有良好的相似性,相似度在0.990以上;6个指标成分葛根素、芍药苷、异阿魏酸、黄芩苷、牛蒡苷、盐酸小檗碱的线性范围分别为2.86～57.2、0.248～4.95、0.021～0.421、2.16～43.2、2.03～40.6和0.780～15.6μg·mL-1;平均加样回收率在98.3％～101.6％范围内.葛根素、芍药苷、异阿魏酸、黄芩苷、牛蒡苷、盐酸小檗碱的含量分别为0.128～0.153、0.031～0.039、0.002～0.003、0.230～0.251、0.210～0.228和0.084～0.098 mg· g-1.结论:本研究所建立的特征图谱及多指标成分含量测定方法能较好地评价儿童回春颗粒的质量,并可为提高该制剂的质量标准,保证产品质量奠定基础.
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基于多元数据分析研究葛根素化学对照品定值准确性与其影响因素的相关性
目的:模拟评估葛根素化学对照品定值过程中原料纯度与有机杂质对于定值的影响,为化学对照品质量平衡法定值提供有效的技术要求.方法:在化学对照品质量平衡法定值的基础上,选择葛根素化学对照品作为主成分,同时选择其结构类似物异黄酮及黄酮类化学对照品作为相关模拟的杂质,测定相应的校正因子后,定量混合,模拟制成两类考察物:一类为主成分自99.0％、98.0％…90％纯度递减的系列考察物,另一类为不同校正因子比杂质的系列考察物,两系列模拟考察物分别进行HPLC纯度测定.结果:采用析因分析方法,确定主成分纯度在99.0％ ～ 97.0％范围内,有机杂质校正因子在0.90 ～ 1.10范围内,此两项因素对定值无显著性影响,且两者间无交互效应.结论:本试验结果对于化学对照品原料的筛选及定值具有一定的指导和参考意义.
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愈风宁心片HPLC特征图谱研究
目的:建立愈风宁心片的特征图谱,提高其质量控制水平.方法:以葛根素为参照峰,采用CAPCELL PAK(R)MGⅡ、Agilent(R)ZORBAX SB或Kromasil(R) 100-5 C18色谱柱,以甲醇(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0～ 35 min,15％～30％A;35～60 min,30％ ～ 90％ A)；流速1.0mL· min-1;检测波长:250 nm.结果:愈风宁心片特征图谱有9个共有峰,方法学考察结果良好,该方法已推广至系列品种.结论:采用HPLC特征图谱可实现全面和整体的评价,为有效提高愈风宁心片质量控制水平提供依据.
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眼络通颗粒剂的质量控制项目研究
目的:研究眼络通颗粒剂的质量控制方法.方法:采用硅胶G薄层色谱法对颗粒剂中2种主要成分川芎和三棱进行定性鉴别;用RP-HPLC法对葛根素进行含量测定,采用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇-水(30:70)作流动相,检测波长为250 nm.结果:葛根素进样量在0.06～0.65μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,日内、日间精密度RSD分别为0.85%和0.48%(n=5),高、中、低3个浓度平均加样回收率(n=3)分别为101.2%,101.1%,101.4%,RSD分别为1.1%,0.94%,0.41%.结论:本法操作简便,重复性好,结果准确可靠.
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HPLC-MS/MS法同时测定小鼠生物样品中葛根素和梓醇的浓度
目的:建立同时检测小鼠血浆、脑匀浆中葛根素和梓醇浓度的HPLC-MS/MS法,为梓葛制剂的药动学研究提供检测方法.方法:分别以对羟基苯甲醛和桃叶珊瑚苷为葛根素、梓醇的内标物,血浆或脑匀浆沉淀蛋白后,采用HPLC-MS/MS法同时检测各物质.色谱条件:采用Eclipse plus C18(100 mm×4.6 mm,3.5 μm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L-1乙酸胺(含0.1％甲酸)(80∶20)为流动相,流速0.6 mL·min-1,柱温30℃;质谱条件:电喷雾离子化源,多重反应监测,葛根素和对羟基苯甲醛采用负离子方式(选择监测离子反应分别为m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8),梓醇和桃叶珊瑚苷采用正离子方式(选择监测离子反应分别为m/z380.4→183.0和m/z 364.2→167.0).按中国药典规定进行相应的方法学考察.结果:血浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.056 3～11.3 μg·mL-1(r=0.993 6)、0.398～25.5 μg·mL-1(r=0.995 9),定量下限(LLOQ)分别为0.0563 μg·mL-1、0.0398 μg·mL-1;脑匀浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.0282～225 μg·mL-1(r=0.9964)、0.019 9～2.25 μg·mL-1(r=0.998 5),LLOQ分别为0.0282 μg·mL-1、0.019 9μg·mL-1.葛根素和梓醇日内、日间精密度均小于15％,准确度为81.7％～110.0％,相对提取回收率为81.3％～105.0％,基质效应的RSD均小于15％.小鼠灌胃梓葛纳米晶混悬液后,小鼠血浆中葛根素和梓醇的t1/2分别为(2.14±1.13)h和(1.70±0.41)h,脑匀浆中的t1/2分别为(4.30±1.63)h和(3.88±1.09)h;血浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为(7.40±3.05)mg·L-1·h-1和(32.13±5.29)mg·L-1·h-1,脑匀浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为(1.29±0.42) mg·L-1·h-1和(0.54±0.16)mg· L-1·h-1.结论:该法专属性强,灵敏、准确、快捷,适用于梓葛配伍制剂的药动学研究.
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UPLC快速测定葛根芩连汤肠外翻囊样品中6个黄酮类成分含量
目的:建立UPLC法同时测定葛根芩连汤肠外翻囊样品中6个黄酮类成分(葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷)的含量.方法:样品用甲醇提取,采用Agilent Proshell 120 EC-C18(4.6 mm ×50mm,2.7 μm)色谱柱,以0.2％醋酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1mL·min-1,紫外检测波长270nm,柱温30℃.结果:葛根素、大豆苷、甘草苷、野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷质量浓度分别在0.1870 ～93.50 μg·mL-1(r =0.9999),0.02730 ～13.65μg·mL-1(r=0.9999),0.02550～12.75 μg·mL-1(r =0.9999),0.05580～27.90μg·mL-1(r =0.9998),0.2124 ～ 106.2 μg·mL-1(r=0.9999),0.09140～45.70μg·mL-1(r=0.9999)范围内有良好的线性关系；日间、日内精密度变异均小于2％；平均回收率(n=9)分别为101.4％,97.88％,99.15％,99.72％,98.50％,101.4％；稳定性良好.结论:所建立的分析方法操作简便、快速、灵敏,结果准确,重复性好,所需样品少,并已成功应用于葛根芩连汤大鼠肠吸收动力学的研究.
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葛属植物中3种异黄酮成分分析
目的:测定7种葛属植物根中异黄酮成分的含量.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为Hypersil ODS2(150 mm×4.6 mm,5 μm);检测波长250 nm;葛根素、大豆苷、大豆苷元的加样回收率±RSD分别为(105.7±4.6)%,(105.4±6.9)%,(104.5±9.2)%.结果:葛属植物中3种异黄酮成分含量差异较大,野葛、粉葛和峨嵋葛中含有的葛根素和大豆苷比其它几种葛属植物高,野葛中葛根素的含量高;从液相色谱图中观察到不同产地野葛的图谱与其它种的葛属植物有明显区别.结论:异黄酮成分可作为评价葛属植物质量的参考依据.
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HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量
目的:HPLC法同时测定小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量.方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～5 min,93％B;5～ 20 min,93％ B→89％B;20 ～ 23 min,89％ B→85％B;23 ～ 30 min,85％ B→83％B;30 ～ 35 min,83％ B→77％B;35 ～ 50min,77％B→52％B;50 ～ 53 min,52％ B→15％ B;53 ～55 min,15％B),流速1.0 mL·min-1,检测波长250 nm(0 ～35 min,测定葛根素和大豆苷)、270 nm(35 ～48min,测定黄芩苷和大豆苷元)、290 nm(48 ～50.5 min,测定桂皮醛)、278 nm(50.5 ～ 55 min,测定黄芩素),柱温40℃.结果:葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素进样量分别在0.01240～2.480、0.004208 ～0.8416、0.005503 ～1.101,0.002132 ～0.4264、0.0007120 ～0.1424、0.0007980 ～0.1597μg范围内与峰面积均有较好的线性关系,平均加样回收率均在99.0％ ～101.2％范围内,RSD均小于1.3％.结论:经方法学验证,本法可用于小儿柴桂退热颗粒中葛根素、大豆苷、黄芩苷、大豆苷元、桂皮醛、黄芩素的含量测定,为小儿柴桂退热颗粒全面的质量控制提供科学依据.
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多指标正交试验优选养心颗粒制备工艺
目的:筛选、优化养心颗粒的佳制备工艺.方法:以溶剂量(6、8、10倍量水)、煎煮时间(0.5、1、1.5 h)、煎煮次数(1、2、3次)为正交试验考察因素和水平,以养心颗粒高效液相色谱图中葛根素、阿魏酸、橙皮苷、丹酚酸B、甘草酸铵、五味子醇甲6种活性成分含量为指标进行综合评价,优选养心颗粒制备工艺.结果:由正交试验直观分析可知,各因素对提取工艺的影响顺序为溶剂体积＞提取次数＞提取时间;由方差分析可知,溶剂体积、提取次数因素对制备工艺有显著性影响.根据直观分析K值确定佳制备工艺条件为A2B2C2.结论:筛选出佳提取工艺条件为以8倍量水100℃回流2次,每次1h.
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葛根素对成年大鼠创伤性脑损伤神经细胞的保护作用
目的 探讨葛根素对成年大鼠创伤性脑损伤神经细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 不同浓度葛根素作用于创伤性脑损伤神经细胞,通过病理学检查、Tunel法及免疫组织化学法检测神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 葛根素作用脑损伤神经细胞7天后,以浓度效应关系改善创伤性脑损伤神经细胞的病理改变,减轻细胞凋亡程度,增加Bcl-2的表达,降低Bax/Bcl-2比率,但不影响Bax的表达.结论 葛根素对创伤性脑损伤神经细胞具有保护作用,且呈剂量依赖性,其机制可能与葛根素抗细胞凋亡,增加Bcl-2的表达有关.
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葛根素D-半乳糖诱导的小鼠记忆障碍的影响
目的:探讨葛根素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆的影响及其作用机制.方法:用开场行为和Y-迷宫分别检测腹腔注射葛根素后D-半乳糖衰老模型小鼠自发活动和学习记忆行为的变化,然后用紫外分光光度计和荧光分光光度计分别检测衰老小鼠脑组织SOD、MDA以及脂褐素等生化指标.结果:葛根素60mg/kg可显著增加D-半乳糖致衰老小鼠在新异环境中的自发活动和探究行为,显著提高其学习记忆能力(记忆保持率从69%±9%提高到79%±6%);葛根素60mg/kg和30mg/kg均可以显著提高脑组织SOD的活性,从(12.1±2.9)提高到(14.9±2.1)和(15.5±2.7)U/g脑湿重,并使衰老小鼠脑内脂褐素含量明显下降,从(27±5)降到(20±4)和(20±4)μg/g脑湿重.结论:葛根素对D-半乳糖致衰老小鼠学习记忆减退有改善作用,这可能与其提高衰老小鼠脑组织抗氧化能力有关.
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葛根素抑制小鼠海马CA1区神经元瞬间外向钾电流和延迟整流钾电流
研究葛根素对小鼠海马CA1区神经元瞬间外向钾电流(IA)和延迟整流钾电流(IK)的作用。方法：膜片箝全细胞记录技术。结果：葛根素明显抑制IA和IK，呈浓度依赖性，IC50分别为461μmol/L和215μmol/L，没有使用或频率依赖性。葛根素0.5mmol/L显著影响稳态激活曲线，分别使IA的Vh右移，IK的Vh左移，但不影响IA的失活曲线，表明其电压依赖性地影响激活过程。结论：葛根素抑制小鼠海马CA1区锥体细胞IA和IK，且对IK的作用大于IA。
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葛根素抑制大鼠背根神经节细胞河豚毒素不敏感性钠电流
测定葛根素(Pue)对大鼠背根神经节(DRG)细胞河豚毒素不敏感性(TTXr)钠电流的作用.方法:采用全细胞钳制技术,记录成年Wistar大鼠DRG神经元中TTXr钠电流.结果:Pue在0.01-2 mmol·L-1浓度范围内,对TTXr钠电流的抑制率为9.5%-83.2%.该抑制作用为浓度依赖性,可部分洗脱,但非频率依赖性或电压依赖性.Pue不影响失活曲线,但使1/2大激活电压由-26 mV升至-16 mV,说明抑制了激活过程.结论:Pue抑制大鼠DRG细胞中TTXr钠电流.
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葛根素治疗急性脑梗死患者的临床研究
目的:探讨葛根素治疗急性脑梗死的效果.方法:选择发病6～72h的急性脑梗死患者240例,随机分为葛根素治疗组120例和低分子右旋糖酐对照组120例,两组治疗前后测定血液流变学指标,并对比研究其疗效.结果:治疗组基本痊愈72例(60%),显著进步36例(30%),总显效(基本痊愈+显著进步)108例(90%),对照组基本痊愈16例(13.3%),显著进步18例(15%),总显效(基本痊愈+显著进步)34例(28.3%).治疗组的疗效明显优于对照组.血液流变学改变,与治疗前比也有显著改善,治疗组优于对照组.结论:葛根素治疗急性脑梗死患者效果显著,且并无严重毒副作用.
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葛根素治疗视网膜静脉阻塞的临床疗效观察
目的 观察探讨葛根素治疗视网膜静脉阻塞的临床疗效,总结其临床应用价值.方法 选取我院2009年4月至2011年4月视网膜静脉阻塞的患者164例,随机分为观察组82例(89眼)和对照组82例(94眼),观察组使用葛根素注射液治疗,对照组采取复发丹参注射液治疗,观察比较两组治疗效果.结果 观察组总有效率为89.9％(80/89),对照组总有效率为76.6％(72/94),两组疗效比较差异显著(P＜0.05),具有统计学意义.观察组临床症状缓解时间明显比对照组缩短(P＜0.05),具有统计学意义.两组均无明显不良反应.结论 葛根素治疗视网膜静脉阻塞的临床疗效显著,优于复发丹参注射液治疗,能够明显提高治愈率,缩短治疗疗程,无明显不良反应,安全可靠,值得临床合理推广.
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葛根素治疗骨骼肌失神经萎缩机制与Cdk5相关性的实验研究
目的 探索葛根素在治疗大鼠周围神经损伤中的作用机制.方法 对28只体重在230~250 g的雄性大鼠制作失神经骨骼肌模型.实验动物随机分为四组.在葛根素治疗组中,对再灌注后-坐骨神经切断的大鼠给予50 mg/kg葛根素进行腹腔内注射,随后两天每24小时以同样的剂量注射.在抑制剂预处理组中,对大鼠制作失神经骨骼肌模型60 min之前给予30 mg/kg抑制剂进行静脉注射.失神经60 min后进行48 h的再灌注-注射,然后检测其细胞凋亡指数及Cdk5和p25的活性.结果 骨骼肌失神经,导致Cdk5和p25的活性升高、凋亡细胞数增多.葛根素可以降低细胞凋亡数及Cdk5和p25的活性.结论 失神经骨骼肌萎缩的缓解与Cdk5及p25受抑制相关,在失神经骨骼肌模型大鼠的治疗过程中,葛根素对Cdk5及p25的抑制作用是其神经保护性机制之一.
关键词： 葛根素 失神经骨骼肌 Cdk5 抑制剂 细胞周期蛋白B激酶抑制剂 -
依达拉奉联合葛根素治疗急性脑梗死45例
2010 年7 月至2012 年7 月, 笔者用依达拉奉联合葛根素治疗急性脑梗死45 例,疗效满意,总结如下.1 临床资料共90 例,均符合1995 年全国第4 届脑血管会议脑梗死诊断标准,且经头颅CT 确诊,随机分为两组.治疗组45例,男26例,女19例;年龄42~81岁,平均(61.4±3.5)岁;病程短6h,长48h.对照组45 例,男25例,女20例;年龄43~79岁,平均(60.8±3.4)岁;病程短6h,长48h.两组性别、年龄、既往史、治疗前神经功能缺损评分等比较无显著性差异(P ＞ 0.05) .
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葛根素联合胺碘酮转复慢性房颤30例临床研究
慢性房颤是一种常见的心率失常,易形成附壁血栓,导致动脉栓塞,通常需要转复治疗.目前临床多用西药转复及维持,但其转复成功率低,且毒副作用明显.我们用葛根素联合胺碘酮治疗慢性房颤30例效果较好,报告如下.
