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高效液相色谱-电化学检测法测定尿中8-羟基脱氧鸟苷含量
活性氧引起的DNA氧化损伤与衰老和一些疾病有关.DNA 中碱基鸟嘌呤C8位易受羟自由基攻击,形成碱基修饰产物8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG).8-OHdG是DNA氧化损伤的特异产物,是公认的内源性及外源性因素对DNA氧化损伤的生物标志物[1].当机体修复机制正常时,8-OHdG可在酶的作用下从DNA链上切除并重新掺入正常的鸟嘌呤碱基,而切下的8-OHdG则经尿液排出体外.8-OHdG在体内稳定存在,一旦形成不再被机体进一步代谢,尿中8-OHdG含量与细胞内DNA氧化损伤有关,且尿样标本易得,可实现无创伤检测,测定尿中8-OHdG含量可作为DNA氧化损伤的标志物[2,3] .
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应用基因表达谱芯片技术克隆甘草甜素诱导Jurkat细胞后的差异表达基因
目的:应用基因芯片技术,阐明甘草甜素作用于T淋巴细胞之后,甘草甜素对于T淋巴细胞基因表达谱的影响.方法:应用基因表达谱芯片技术,对甘草甜素诱导的Jurkat细胞和以生理盐水处理的相同细胞的mRNA进行差异显示分析,研究甘草甜素诱导人T淋巴细胞系Jurkat细胞后的差异表达基因.结果:Jurkat细胞经甘草甜素诱导后,所检测的1152条目的基因中有30条产生差异表达,其中12条基因表达增强,18条基因表达降低.表达增强的基因主要有:胸腺素及促胸腺生成素蛋白编码基因;白介素-18(IL-18);细胞代谢相关酶类.表达降低的基因主要有:细胞信号转导相关基因(如血清/糖皮质激素调节激酶、丝裂素活化的蛋白激酶激酶激酶2、磷脂酶2调节亚基β、鸟嘌呤核苷结合蛋白、神经营养的酪氨酸激酶3型受体等);La自身抗原.结论:应用基因表达谱芯片成功筛选了甘草甜素诱导T淋巴细胞后差异表达基因,为进一步阐明甘草甜素的免疫调节机制及深入了解甘草甜素用于防治病毒性肝炎的药理作用机制提供依据.
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卵巢上皮性癌患者尿8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷的检测及意义
卵巢上皮性癌占卵巢恶性肿瘤的85%~90%,也是致死率高的恶性肿瘤.虽然卵巢上皮性癌发生的确切机制目前还不清楚,但公认环境因素是卵巢癌发病的因素之一[1].8-羟基-2′脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)是DNA氧化性损伤主要的产物[1].本研究通过检测卵巢上皮性癌患者尿8-OHdG的含量,探讨8-OHdG可作为一种检测卵巢上皮性癌的指标.
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Rho激酶在中枢神经系统疾病中的作用
Rho激酶是一群小分子单体的Ras(an abbreviation of RAt Sarcoma)相关蛋白[1].Rho蛋白根据其结构域和功能的不同可以分为6个亚家族,其中主要包括Rac(Ras -related C3 botulinum toxin substrate)、RhoA(Ras homolog gene family member A)和Cdc42( cell division control protein 42 homolog)这3个亚家族.在哺乳动物体内,Rac又可以分为Rac1(Ras - related C3 botulinum toxin substrate 1),Rac2(Ras -related C3 botulinum toxin substrate 2),Rac3( Ras - related C3 botulinum toxin substrate 3)3种同工酶的形式.其中Rac1和Rac3在人体内分布比较广泛,Rac2则特异性地存在于造血细胞中[2].Rac有二种存在形式:即有活性的三磷酸鸟嘌呤核苷(guanosine triphosphate)结合形式与无活性的二磷酸鸟嘌呤核苷(guanosine diphosphate)结合形式.Rac和其他小G蛋白一样,可被鸟嘌呤核苷酸交换因子(guanine nucleotide exchange factor)、鸟嘌呤核苷酸释放抑制因子(guanine nucleotide release inhibition factor)以及鸟嘌呤-5'-三磷酸酶激活蛋白(GTPase - activating protein)调节.Rac是Rho激酶的一个重要成员,它在许多信号通路中发挥了非常关键的作用.早期对于Rac蛋白的研究主要集中于它对细胞骨架的调控上.后来随着研究的深入,发现了许多其他方面的功能,包括对囊泡转运,细胞极性和细胞周期的调控等[3].近10年发现,Rac在学习与记忆中也发挥了许多作用.
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加倍体半夏与野生半夏中有效成分的比较测定
目的 以鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷和麻黄碱3种生物碱类物质为指标,从药效物质基础方面对加倍体(十六倍体)半夏中这3种成分的绝对含量及它们与三者总量的相对比率进行测定,并与八倍体半夏及野生半夏进行比较.方法 利用HPLC测定半夏中鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷和麻黄碱的含量,比较3种半夏中这3种成分的绝对含量以及它们之间相对比率的差异.结果 与八倍体半夏和野生半夏相比,十六倍体半夏中鸟嘌呤核苷含量分别提高了82.3%和28.6%,腺嘌呤核苷含量分别提高了71.9%和22.9%,麻黄碱含量分别提高了42.6%和15.9%.3种成分相对于其总量的比率分别为:十六倍体半夏:34.18%、12.7%、53.12%;八倍体半夏:26.9%、10.2%、62.9%;野生半夏:30.89%、12%、57.12%.结论 十六倍体半夏块茎中鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷与麻黄碱的绝对含量均显著高于八倍体半夏与野生半夏;而这3种成分相对于其总量的比率稳定,说明十六倍体半夏在染色体数目倍增后,所含有效药用成分的增加是同步的.因此,十六倍体半夏可作为培育半夏新品种的优良材料.
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半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠学习记忆的影响
目的 采用跳台和Morris水迷宫检测半夏泻心汤和鸟嘌呤核苷对6月龄APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠学习记忆的影响.方法 将APPswe/PS1 dE9双转基因小鼠随机分为模型组5%羧甲基纤维素钠(CMC)灌胃、西药对照组盐酸多奈哌齐0.92 mg/(kg·d)灌胃、半夏泻心汤组650 mg/(kg·d)灌胃、中药对照组姜黄素200 mg/(kg·d)灌胃、鸟嘌呤核苷组0.5% CMC灌胃,除鸟嘌呤核苷组腹腔注射鸟嘌呤核苷16 mg/(kg·d),其他各组腹腔注射等体积的生理盐水,每组15只.正常组0.5% CMC灌胃和等体积的生理盐水腹腔注射为同窝野生型C57BL/6J小鼠.于3月龄时开始对各组小鼠分别实施对应的干预,给药3个月后,应用跳台和Morris水迷宫对小鼠进行行为学检测.结果 跳台实验结果显示,模型组小鼠比正常组潜伏期时间明显缩短(P<0.01);与模型组比,各干预组小鼠潜伏期时间均显著增加(P<0.01).Morris水迷宫结果显示,随着天数的增加,各组小鼠逃避潜伏期的时间缩短,游泳距离也呈递减趋势,中间有小幅波动.Morris水迷宫结果显示,空间探索实验即撤台实验中,模型组小鼠目标象限停留时间显著少于正常组(P<0.01),西药对照组、中药对照组以及半夏泻心汤组小鼠的目标象限停留时间均比模型组延长(P<0.05).结论 半夏泻心汤对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠的早期学习记忆障碍具有改善作用,鸟嘌呤核苷可提高小鼠的记忆保持能力.
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夏秋采收荆半夏中鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷的含量比较
目的 建立RP-HPLC含量测定方法,比较夏、秋两季采收荆半夏有效成分鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷含量,为荆半夏药材选择佳采收季节提供参考依据.方法 选择HypersilC18色谱柱(250×4.6mm,5μm),以甲醇-水-0.4%磷酸水为流动相梯度洗脱,流速0.5mL/min,检测波长λ=254nm,柱温30℃等色谱条件,测定荆半夏中鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷含量.结果 鸟嘌呤核苷在3.84~30.72μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999;次黄嘌呤核苷在3.6~28.8μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999;平均加样回收率(n=9):鸟嘌呤核苷为103.71%,次黄嘌呤核苷为98.19%,表明该方法可靠性强.结论 夏季采收荆半夏所含鸟嘌呤核苷和次黄嘌呤核苷的含量明显高于秋季采收荆半夏.
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蒙古黄芪的化学成分研究
目的 研究蒙古黄芪Astragalus membranaceus var,mongholicus的化学成分.方法 利用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、大孔树脂柱色谱、ODS柱色谱及制备高效液相等色谱技术对蒙古黄芪70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化数据和波谱数据鉴定化合物的结构.结果 共分离得到16个化合物,分别鉴定为芒柄花素(1)、毛蕊异黄酮(2)、(6aR,11aR)-3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷(3)、染料木素(4)、芒柄花苷(5)、毛蕊异黄酮苷(6)、7,2'-二羟基-3',4'-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷(7)、(6aR,11aR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(8)、红车轴草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(9)、黄芪甲苷(10)、异黄芪皂苷Ⅱ (11)、黄芪皂苷Ⅷ (12)、腺嘌呤(13)、鸟嘌呤核苷(14)、尿嘧啶核苷(15)、胡萝卜苷(16).结论 化合物13、14为首次从该属植物中分离得到.
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新型免疫抑制剂霉酚酸酯在风湿科的应用前景
霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF),商品名骁悉,是一种选择性抑制T、B淋巴细胞增生的新型免疫抑制剂.MMF 为一种前体药物,在体内被迅速水解成霉酚酸,后者能可逆性、非竞争性地抑制次黄嘌呤核苷一磷酸脱氢酶,抑制鸟嘌呤核苷的从头合成途径(经典途径)[1].此嘌呤合成途径对T、B淋巴细胞的增生是关键性的,而其他血细胞具有嘌呤合成的补救途径.因此,MMF的这种抗细胞增生作用对其他细胞影响不大,而对淋巴细胞而言则,具有相对选择性.
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抗乙肝病毒新药--恩替卡韦的临床应用
恩替卡韦(Entecavir)为环戊基鸟嘌呤核苷类似物,是一种选择性抗HBV的口服抗乙肝病毒类药物,它能够选择性地抑制乙肝病毒(HBV)在肝脏中的复制.用于病毒复制活跃、血清转氨酶(ALT)持续升高或有肝脏组织学显示活动性病变的成人慢性乙型肝炎患者.
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鸟苷产生菌TA208发酵工艺优化
鸟嘌呤核苷(guanosine,1),又名9-β-D-呋喃核糖基鸟嘌呤,可用于合成阿昔洛韦、利巴韦林、5'-鸟苷酸(5'-GMP)、三磷酸鸟苷(GTP)等药物[1].随着1工业用途及国内市场的扩大,1的发酵生产也得到重视[2].
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慢性丙型肝炎治疗药Viramidine盐酸盐
Valeant公司研发的Viramidine盐酸盐是一种鸟嘌呤核苷类似物,为一种口服、肝靶向的病毒唑(ribavirin)前体药物,可与聚乙二醇化干扰素联合使用以治疗慢性丙型肝炎.Viramidine具有吸收迅速,能被肝脏大量吸收的特点,而且能在肝中转化为活性代谢物.该药2003年底进入Ⅲ期临床,实验使用的剂量为600 mg,每天两次.
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UPLC法同时测定彝药多星韭中四种核苷类成分的含量
目的:建立UPLC同时测定彝医药食同源植物多星韭不同部位腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷的方法,比较不同采收期不同部位4种核苷类成分的含量.方法:采用UPLC法,色谱柱为ACQUITY UPLCHSS T3(100 mm ×2.1mm,1.8 μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温30℃,体积流量0.2 mL/min,进样量2μL,检测波长为260 nm.结果:腺嘌呤、鸟嘌呤核苷、胸腺嘧啶核苷、腺嘌呤核苷含量分别在6.80 ~ 95.20 μg/mL、6.70 ~93.80 μg/mL、6.50 ~91.00 μg/mL、7.20~100.80 μg/mL线性范围内与峰面积呈良好线性关系,r为0.9995~0.9999,平均回收率为98.25% ~ 101.38%,RSD≤2.32%;4种核苷类成分总含量在花期前>花期后,花蕾>叶>种子>根.结论:建立的方法操作简单、稳定性好、准确可靠,可用于同时测定药食同源植物多星韭中4种核苷类成分的含量,为开发利用多星韭提供依据.
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HPLC同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷的含量
目的:研究以HPLC同时测定半夏药材中次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷含量的方法.方法:采用Kromasil C18柱(4.6 mm×150 mm,10μm),以甲醇-水(1:99)为流动相,流速1.0 mL·min-1,λ1=248 nm(检次黄嘌呤核苷),λ2=254nm(检鸟嘌呤核苷),柱温30℃.结果:次黄嘌呤核苷在20-421 ng范围内线性关系良好,r=0.9999,鸟嘌呤核苷在40-339 ng范围内线性关系良好,r=0.9996.平均加样回收率(n=9):次黄嘌呤核苷为99.2%;鸟嘌呤核苷为99.7%.结论:本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为半夏药材质量控制的方法.