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重症急性胰腺炎患者早期或晚期手术时外周血有核细胞Toll样受体表达差异及意义
目的探讨重症急性胰腺炎患者早期或晚期手术时外周血单核细胞Toll样受体2、4mRNA的表达差异,及其与患者并发症发生率和预后的相关性.方法随机选取重症急性胰腺炎患者29例,分成早期或晚期手术组,于手术后第5天分离外周血有核细胞,利用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)法检测TLR2、TLR4基因的变化,同时测量血浆内毒素水平的变化,并与并发症发生率和病死率的差别作相关性分析.结果早期手术组与晚期组的病死率分别为25%(3/12)和5%(1/17),χ2＝15.21,P＜0.01;并发症发生率分别为100%和35%,χ2＝5.34,P＜0.05;TLR2 mRNA的表达水平分别为(119.82±11.13)和(75.15±6.34)(t=12.54,P＜0.01);TLR4mRNA的表达水平为(98.11±5.16)和(65.54±5.11),t=16.83,P＜0.01;两组间内毒素水平分别为(1.16±0.10)pg/L和(1.09±0.08)pg/L,t=1.83,P＞0.05.结论与晚期手术者比较,早期手术者外周血白细胞TLR4及TLR2mRNA表达水平增加,术后病死率和并发症发生率增加,说明早期手术可能通过再次炎症反应打击而加重了系统性器官损伤.
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全身炎症反应综合征小鼠肝脏Toll样受体2,4基因的表达
目的观察Toll样受体(TLR)2,4基因在全身炎症反应综合征(SIRS)小鼠肝脏中的表达,探讨TLR 2,4在SIRS发病机制中的作用.方法BABL/C小鼠40只,随机分为对照组和SIRS模型组,每组各20只.按急性重症胰腺炎方法复制SIRS鼠模型.进行血常规和血生化检查(血淀粉酶、谷丙转氨酶等),监测体温.取其胰腺和肝脏观察组织病理学改变.实时荧光PCR法检测肝脏TLR 2,4 mRNA的表达,Western blot法检测肝脏TLR 2,4蛋白的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝脏肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL)6的表达.结果SIRS鼠胰腺和肝脏组织可见不同程度出血、坏死,伴有炎性细胞浸润.血清淀粉酶和谷丙转氨酶增高,还可见体温和白细胞计数下降.SIRS鼠肝脏TLR 2,4 mRNA和蛋白表达明显增加,TNF-α和IL-6的表达亦显著升高,与对照组相比较,差异有显著性(P＜0.01).结论SIRS鼠肝脏TLR 2,4基因及其下游炎症因子TNF-α和IL-6表达明显增加,提示TLR信号通路可能与SIRS的发生发展密切相关,从而为防治SIRS提供了新的思路和必要的理论依据.
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一氧化氮对急性出血坏死性胰腺炎肺组织Toll样受体2/4 mRNA表达的影响
目的研究一氧化氮(NO)对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肺组织Toll-样受体(TLR)2/4表达的影响.方法采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠注射制造AHNP大鼠模型,动物分为假手术组、胰腺炎组和L-精氨酸(L-Arg)治疗组.RT-PCR方法检测肺组织TLR 2和TLR 4 mRNA表达变化.结果与假手术组比较,胰腺炎组大鼠从3 h时肺组织TLR 2/4 mRNA表达开始增高,在12 h时肺组织TLR 2/4 mRNA表达达到峰值;同时肺损伤加重,肺组织TNF-α浓度升高,NO浓度逐渐降低(P＜0.05).给予L-Arg治疗后,NO浓度明显升高,TLR 2/4 mRNA表达降低,肺损伤程度减轻,肺组织TNF-α浓度降低(P＜0.05).结论急性出血坏死性胰腺炎时,肺组织内TLR 2和TLR 4 mRNA表达上调,肺组织损伤加重.NO可以明显抑制AHHN肺组织TLR 2/4 mRNA的表达,从而减轻肺损伤.
关键词： Toll样受体 急性出血坏死性胰腺炎 肺脏 一氧化氮 -
乳化异氟烷预处理对缺血-再灌注损伤大鼠心肌Toll样受体4及血清TNF-α和IL-10浓度的影响
Toll样受体是一个主要分布于炎症细胞的识别病源分子的受体超家族,其主要的生物学功能是促进细胞因子的合成和释放,引发炎症反应[1].而炎症因子水平的高低与缺血后心脏功能的损害及细胞坏死数量相关.有研究表明,Toll样受体4(TLR4)缺陷型小鼠缺血-再灌注后心肌炎症反应减轻,梗死面积减少[2],推测TLR4可能参与了缺血-再灌注诱导的炎症反应,而乳化异氟烷预处理是否影响缺血-再灌注心肌TLR4的表达尚不清楚,本研究拟在评价乳化异氟烷预处理对大鼠缺血-再灌注心肌TLR4 mRNA及血清中IL-10和TNF-α的影响,探讨其产生心肌保护作用的可能机制.
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血小板及其Toll样受体4在脓毒症中的作用研究进展
研究表明,脓毒症发病过程与凝血功能异常密切相关[1-2],而血小板是联系炎症和凝血之间复杂相互作用的关键因素[3],危重患者血小板计数进行性下降提示预后不良[3-4].
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miRNA在脓毒症中调控TLRs信号通路的研究进展
脓毒症(sepsis)是指由感染引起的全身炎症反应综合征.在ICU中脓毒症是危重患者的主要死亡原因之一,并且其发病率和病死率在全球范围内逐年递增.据统计,在中国,脓毒症在ICU中的发病率为8.68％,病死率可高达44.7％.因此,脓毒症成为重症医学领域亟待攻克的难题之一.目前,脓毒症发病机制尚不清楚,主要与过度炎症反应和免疫功能紊乱有关.微小RNAs (miRNAs)作为重要的免疫调控因子,可通过TLRs/NF-κB信号通路参与固有免疫调控,在脓毒症发病过程中发挥重要作用.本文就脓毒症中miRNAs参与TLRs信号通路的研究进展作一综述.
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Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响
目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度；取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高；与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高；与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高；与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达；调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.
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甘草酸二铵对百草枯中毒大鼠肾组织TOLL样受体4表达的影响
目的 了解甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)中毒大鼠肾组织TOLL样受体4(TLR4)及NF-κB等表达影响.方法 根据随机数字表法将大鼠分为PQ染毒组(PQ组,n=20)、DG干预组(DG组,n=20)和空白对照组(NS组,n=10).PQ组及DG组100 mg/kg一次性灌胃方式建立急性肾损伤大鼠动物模型,NS组予以等量生理盐水灌胃,DG组灌胃后立即给予甘草酸二铵50 mg/kg腹腔注射,每24 h重复给药一次.ELISA检测血清和肾组织IL-6、IL-10的含量,免疫组化分析各组TLR4、Myd88及NF-κB P65蛋白表达变化,荧光定量PCR方法检测肾组织TLR4、Myd88及NF-κB的的基因表达.结果 与NS组比较,PQ组的血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血清及肾组织中IL-6水平均明显升高(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组Cr、BUN、血清及肾组织中IL-6水平均明显降低(F=266.014,168.160,63.279, 192.997,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组的肾组织和血清中IL-10水平均明显升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01),与PQ组比较,DG组的肾组织和血清中IL-10水平均有一定升高(F=87.511,79.473,均P＜0.01).与NS组比较,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κBmRNA表达明显升高(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01);与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB mRNA表达明显降低(F=84.408,60.683,86.272,均P＜0.01).免疫组化结果显示,PQ组肾组织TLR-4、Myd88及NF-κB的蛋白表达量明显升高(F=79.139,61.799, 112.740,均P＜0.01).与PQ组比较,DG组肾组织TLR-4、Myd88和NF-κB的蛋白表达量明显降低(F=79.139,61.799,112.740,均P＜0.01).结论 甘草酸二铵可减轻百草枯中毒大鼠的急性肾损伤,并能降低肾组织TLR-4、myd88及NF-κB的表达水平.
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慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞中论著TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达
目的 观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞中TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的表达.方法 用密度梯度离心法分离COPD患者和健康人外周血单个核细胞后,提取总RNA并逆转录为cDNA,用实时定量PCR检测TLR3、TLR7、TLR8及TLR9 mRNA的拷贝数.结果 COPD患者外周血单个核细胞的TLR3和TLR9 mRNA表达较正常健康人明显增高(P＜0.05),而TLR7和TLR8 mRNA的表达在COPD患者和正常健康人之间却无显著差异(P＞0.05).在COPD患者中,急性期和稳定期患者的TLR3、TLR7、TLR8和TLR9无显著差异(P＞0.05). 结论TLR3和TLR9的升高可能是COPD患者对病毒敏感性增高的一个重要机制.
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CD14 mRNA和TLR4 mRNA表达与帕金森综合征的关系
目的 探讨外周血单核细胞CD14和toll样受体(TLR4)mRNA的表达与帕金森综合征(PD)的关系.方法 前瞻性选取2016年1月至2017年12月在北京潞河医院治疗的PD患者80例,同时选取健康志愿者80例作为对照组.采用RT-PCR技术检测CD14mRNA和TLRmRNA表达,同时分析CD14mRNA和TLR4mRNA表达与PD患者临床特征的关系,CD14mRNA和TLRmRNA表达的相关性.结果 PD组CD14mRNA和TLRmRNA相对表达量分别为(1.522±0.344)和(1.417±0.401),明显高于对照组(P＜0.05);H-Y分期＞2.5期患者CD14mRNA和 TLR4mRNA相对表达量分别为(1.843±0.312)和(1.722±0.422),明显高于H-Y分期≦2.5期患者(P＜0.05);CD14mRNA和TLR4mRNA相对表达量与PD患者性别、年龄、病程、运动并发症、服用受体激动剂和左旋多巴类药物无关(P＞0.05);CD14mRNA和TLRmRNA相对表达量呈正相关(P＜0.05).结论 CD14mRNA和TLR4mRNA表达与PD患者疾病严重程度有一定关系,提示机体固有免疫可能参与了 PD的发生发展.
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Toll样受体信号通路在眼缺血综合征中的作用与研究
眼缺血综合征(OIS)是由于颈动脉阻塞或狭窄所致的脑和眼的供血不足而产生的一系列脑和眼的症状,其发病机制尚不十分清楚.Toll样受体(TLRs)是机体免疫系统识别、感知细菌、病毒等病原体入侵的重要分子,在机体免疫防御功能中发挥着重要作用.众多的研究提示,OIS的发生发展与视网膜长期缺血缺氧导致的慢性炎症有关,其中Toll样受体起着重要的作用.文章以TLRs介导的信号通路为切入点,探讨免疫系统的激活与OIS发病过程的相互关系,为其病理机制及防治OIS提供新的思路和方法.
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连续性血液净化对严重脓毒症患者Toll样受体及炎症介质的影响
目的 探讨连续性血液净化(CBP)对严重脓毒症患者Toll样受体及炎症介质的影响.方法 30例严重脓毒症患者随机分成常规治疗组和CBP治疗组,每组15例;另选15名健康志愿者为对照组.在治疗的不同时间点,检测单核细胞Toll样受体-2(TLR2)和TLR4的蛋白表达及血清TNF-α、IL-6、IL-10的浓度.结果 严重脓毒症患者TLR2/4的蛋白表达及TNF-α、IL-6、IL-10的浓度水平,均明显高于健康对照组(均P＜0.05).CBP可下调TLR2/4的蛋的表达及TNF-α、IL-6的浓度水平(P＜0.05).结论 CBP通过下调TLR2/4的蛋白表达,抑制过于亢进的非特异性免疫反应;通过降低血清炎症介质的浓度,使促炎和抗炎反应达到相对平衡.
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跑台训练对大鼠脑缺血再灌注后脑组织toll样受体2、toll样受体4信号转导通路活性的影响
目的:探讨跑台训练对大鼠脑缺血再灌注神经功能恢复和脑组织toll样受体2(TLR2)、toll样受体4(TLR4)、核转录因子-KB(NF-kB)与髓样分化因子(MyD88)信号转导通路活性的影响.方法:用线栓法制作Wistar大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,35只大鼠随机分为假手术组(SH组)、跑台训练组(O+TR组)和手术对照组(Oc组).O+TR和OC组又分为跑3d、跑7d、跑14d 3个亚组,各亚组及SH组每组5只大鼠.O+TR组于术后第3天开始给予跑台训练,SH组及OC组不予跑台训练.于跑3d、跑7d、跑14d 3个时间点进行神经功能评估后处死大鼠.采用RT-PCR和Western-blot技术测定大鼠梗死组织TLR2、TLR4及下游因子MyD88、NF-κB 的转录活性及蛋白表达的水平.结果:O+TR组在跑3d、7d、14d神经功能评分明显优于OC组(P＜0.05).TLR2、TLR4、MyD88及NF-κB表达O+TR组与OC组均较SH组高,3d组表达多,之后呈逐渐下降的趋势,但O+TR组表达均较OC低(P＜0.05).结论:跑台训练通过降低大鼠脑组织缺血再灌注后上调的TLR2、TLR4及下游因子MyD88、NF-κB的表达,抑制脑组织炎症反应,从而有利于脑缺血后神经功能的恢复.
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失血性休克小鼠心肌Toll样受体的表达
目的:探讨小鼠失血性休克(无复苏)对心肌Toll样受体(toll-like receptor,TLR)表达变化的影响及其可能的意义.方法:45只C57BL/6的小鼠随机分为3组:失血组、假手术组、脂多糖(LPS)组(尾静脉注射LPS 5mg/kg),每组15只小鼠,采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型;心肌TLR-2 mRNA和TLR-4 mRNA的表达利用RT-PCR的方法进行分析;左室收缩功能以测定的左室收缩末压(left ventricular end-systolic pressure,LVESP)作为指标.结果:①与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降;②与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后均可导致左室收缩功能障碍;③失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4基因的表达水平均出现不同程度的上调,而假手术组在各时间点未见明显改变.结论:①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4基因表达的上调与心功能障碍存在密切联系,但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异;②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4升高增强了机体的天然免疫能力,提高了机体对急性炎症的应激能力,对机体具有保护作用,但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害.
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黏膜佐剂在黏膜耐受治疗大鼠实验性结肠炎中的作用
目的 探讨Toll样受体(TLR)参与黏膜佐剂增强黏膜耐受和缓解实验性结肠炎的可能机制.方法 建立大鼠三硝基苯磺酸实验性结肠炎模型.以卵白蛋白为诱导抗原,脂多糖为佐剂,将已建立的三硝基苯磺酸结肠炎大鼠模型根据不同的干预方法分为结肠炎组(无干预)、口服耐受组、经鼻耐受组、口服加佐剂组、经鼻加佐剂组、佐剂对照组和空白对照组.用免疫组织化学方法检测各组大鼠结肠组织局部TLR2和TLR4表达水平.用三色流式细胞技术检测各组大鼠外周血调节性T细胞CD4+CD25+亚群和CD8+CD28-亚群表面TLR2和TLR4表达水平.结果 在结肠组织局部,结肠炎组的TLR2和TLR4阳性细胞数均显著高于正常对照组(P<0.05＝;佐剂对照组和口服加佐剂组的TLR4表达较结肠炎组显著下降(P<0.05＝.外周血CD4+CD25+ 亚群内,口服加佐剂组、经鼻耐受组、经鼻加佐剂组和佐剂对照组的TLR2+ 细胞比例显著低于结肠炎组(P<0.05,P<0.01＝;口服加佐剂组和经鼻加佐剂组的TLR4+ 细胞比例显著低于结肠炎组(P<0.05＝.外周血CD8+CD28- 亚群内,各组的TLR2+ 细胞比例差异均无显著性;口服加佐剂组和经鼻耐受组的TLR4+细胞比例显著低于结肠炎组(P<0.05＝.结论 多次给予脂多糖佐剂可能通过下调调节性T细胞的TLR2和TLR4表达而增强黏膜局部和循环的调节性T细胞功能(对CD4+CD25+亚群作用更明显),从而增强免疫耐受的效果.
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MicroRNA、Toll样受体与HIV发病机制慢性免疫激活的研究进展
获得性免疫缺陷综合征(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所致的致命性疾病.该病毒侵犯并摧毁宿主的免疫系统,初始感染CD4+T细胞,逐渐呈现出慢性免疫激活的状态并终导致AIDS的发生.MicroRNAs(miRNA),小型非编码RNA,在控制HIV病毒的感染及复制过程中发挥着重要的作用.Toll样受体(TLRs)在病原体诱导的免疫激活现象中起决定性的作用.本综述阐述了miRNA与HIV病毒间的相关联系,并介绍miRNA在AIDS发病机制慢性免疫激活的作用及其与TLRs的关系.
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膝骨关节炎中天然免疫和TLR/NF-κB信号通路的研究进展
膝骨关节炎（OA），是由多种因素引起关节软骨纤维化、破损、降解、脱失而导致的关节退行性疾病。目前，有越来越多的研究表明，骨关节炎的发生、进展有toll样受体（TLR）介导的天然免疫系统的参与，其中TLR/NF-κB信号通路扮演了重要角色。一般认为，遗传、代谢或机械因素造成关节软骨的初始伤害，导致软骨释放特定的自身抗原触发自身免疫反应。包括T细胞、B细胞和巨噬细胞在内的免疫细胞渗透到关节组织，释放各种细胞因子和趋化因子，例如基质金属蛋白酶（MMPs）和前列腺素 E2（PGE2）释放，补体系统被激活，导致软骨降解，关节软骨进一步被破坏。本文回顾在 OA 发病机制中的天然免疫系统和TLR/NF-κB信号通路的作用。
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Toll样受体在慢性阻塞性肺疾病发病机制中的作用
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种以气道炎症为主要标志的慢性呼吸系统疾病。而COPD 气道炎症的启动、激发和炎性信号级联放大机制尚不甚明了。近年来研究表明模式识别受体（PRRs）在COPD慢性炎症的启动和维持过程中扮演着重要角色。其中，尤以Toll样受体（TLRs）与COPD发病关系为密切。吸烟、有害气体、微生物及损伤相关分子模式（DAMPs）与TLRs相互作用，通过NF-κB信号转导通路完成跨膜信号转导，终调节炎症基因的转录和翻译，产生大量炎症介质并趋化大量炎症细胞参与气道炎症反应的启动及维持。本文结合近年来国内外的新相关研究成果，对TLRs及下游信号转导通路在COPD发病机制中的重要作用综述如下。
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强直性脊柱炎髋关节病变中Toll样受体4表达的初步研究
目的研究强直性脊柱炎（AS）髋关节病变中滑膜Toll样受体2和4（TLR2和TLR4）等受体的表达，以探讨髋关节病变的发病机制。方法免疫组化染色法检测AS患者及对照组患者滑膜组织中TLR2、TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、NFκB-p65表达情况。结果 AS组滑膜组织中TLR4、NFκB-p65表达阳性， TLR2、MyD88表达阴性，而对照组只NFκB-p65表达阳性，TLR2、TLR4、MyD88表达阴性。结论 AS患者髋关节病变存在TLR4高表达，并可能经MyD88非依赖性信号通路引起免疫炎症反应，导致髋关节破坏。
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TLR4/NF-κB通路在深低温停循环逆行脑灌注技术脑保护机制中作用的研究
目的：研究TLR4/NF-κB通路是否参与深低温停循环逆行脑灌注的脑保护机制。方法五指山小型猪共10头，随机分成单纯深低温停循环组（DHCA组，n＝5）与深低温停循环逆行脑灌注组（RCP组，n＝5）。建立体外循环后，DHCA组降温至18℃后停循环40 min，RCP组停循环后经上腔静脉以10 ml/kg流量逆行脑灌注40 min。定期抽血检测血清IL-6水平。复灌180 min后处死动物取脑皮质组织行HE染色， Western blotting检测脑皮质TLR4，NF-κB/p65蛋白表达。结果脑皮质HE染色显示DHCA组较RCP组有更多炎症细胞浸润。在复灌60 min，复灌120 min及复灌180 min三个时点RCP的IL-6水平均显著低于DHCA组（t＝7.314，P＜0.01；t＝5.172，P＜0.01；t＝4.676，P＜0.01）。复灌180 min后RCP组脑皮质中TLR4水平明显低于DHCA组（t＝10.212，P＜0.001）。复灌180 min后RCP组脑皮质中NF-κB/p65水平明显低于DHCA组（t＝3.344，P＝0.011）。结论 RCP通过抑制TLR4/NF-κB信号通路而发挥抗炎作用，这可能是RCP脑保护作用的机制之一。
