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Toll样受体及其在牙周病中研究进展
Toll样受体是一类在进化中高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白,识别病原体相关分子模式,为先天性免疫的重要成分,同时在机体特异性免疫过程中也起着关键性作用.目前在人及哺乳动物体内发现10种Toll样受体.本文对近年来有关Toll样受体及其在牙周免疫过程中所起作用的研究进展作一综述.
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实验性脑出血大鼠脑组织Toll样受体4的表达及意义
目的:探讨TLB4在脑出血大鼠血肿周围脑组织中的表达变化及其作用.方法:采用自体尾动脉血注入法制作脑出血大鼠模型,将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组,造模完毕后按不同时间点(术后6,24,48,72 h和7 d)随机分为5个亚组,每组5只.各组于不同时间点取材,采用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法检测大鼠脑组织TLB4 mR-NA的相对表达.结果:各实验组各时间点TLB4 mRNA均表达,假手术组TLR4 mRNA的相对表达在各时间点无显著差异(P>0.05);模型组与假手术组相比TLR4 mRNA相对表达显著升高(P<0.05),且在48 h达高峰,持续到72 h.模型组相同时间点TLR4 mRNA的相对表达与假手术组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.01).结论:脑出血大鼠模型TLR4表达增高,提示TLR4在脑出血炎症损伤中可能具有一定作用.
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组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用
目的: 观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体(TLR)表达的影响. 方法: 体外培养人肺上皮细胞株A549,用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10 mRNA的变化,并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用. 结果: A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达,组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性,并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用. 结论: 组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达,提示当呼吸道存在变态反应性病变时,增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性.
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Toll样受体2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆与序列分析
目的为研究TLR2胞外域在肽聚糖诱导的信号转导中的功能,构建TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段真核表达载体. 方法提取HL-60细胞总RNA,以RT-PCR方法获取了TLR2胞外域cDNA片段,将其与pGEM-T Easy载体连接,转化E.coli JM109,建立了TLR2胞外域的cDNA克隆;籍此,又相继克隆了胞外域的氨基端和羧基端片段,然后将这三个片段克隆到真核表达载体pcDNA3中. 结果序列分析表明,与GenBank中的人TLR2全长cDNA序列比较,仅4个碱基不同,同源性为0.998. 结论成功获得了HL-60细胞TLR2胞外域及其氨基端和羧基端片段的克隆.
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免疫抑制宿主巨噬细胞Toll样受体的表达变化
目的:检测小鼠腹腔巨噬细胞TLRs表达情况及糖皮质激素甲基强的松龙对TLRs mRNA表达的影响.方法:应用RT-PCR检测正常小鼠腹腔巨噬细胞TLR1-13的表达;并以甲基强地松龙为免疫抑制剂,诱导小鼠免疫抑制后检测腹腔巨噬细胞TLRs mRNA表达变化.结果:已发现的TLR1-13在正常小鼠腹腔巨噬细胞均有表达;小鼠腹腔巨噬细胞经糖皮质激素处理后,部分TLRs在mRNA水平上可被上调.结论:Toll样受体是抗真菌先天免疫的重要组成部分.甲基强的松龙对巨噬细胞有毒性作用,甲基强的松龙注射后可导致小鼠腹腔巨噬细胞明显减少.
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Toll样受体参与类风湿性关节炎发病机制的研究进展
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作为一种自身免疫性疾病,其病情迁延,是造成我国人群劳动力丧失与致残的主要病因之一.因此,对其病因和发病机制的阐明就显得尤为重要.近年来,Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)在RA和实验性关节炎中的作用机制受到了广泛关注.已经发现RA患者的滑膜组织(细胞)、免疫细胞等都存在某些TLR表达的改变.这些TLR可介导滑膜成纤维细胞的细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶等的产生,同时参与巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞的功能调节,也能通过对血管内皮细胞及软骨细胞的功能调节,促进血管生成和软骨破坏,从而参与RA及实验性关节炎的进展.总之,多种TLR在不同细胞中协同或拮抗发挥作用,共同参与并影响了关节炎的发病过程,相关的研究为RA的早期预防、诊断、治疗及特异性药物的开发提供了实验依据.
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Toll样受体与相关疾病研究进展
Toll样受体(Toll like receptors,TLRs)是一类保守的介导天然免疫的跨膜信号传递受体家族,是模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR)家族的一员,属于Ⅰ型跨膜蛋白受体.在自然性和获得性免疫应答、细胞活化信号的转导、炎症反应等过程中起重要作用,因此引起了研究者的极大兴趣,近几年的研究表明,TLRs在某些疾病的病生理过程中起一定甚至重要作用,这对揭示这些疾病的发病机制及免疫治疗提供理论依据.现就TLRs的生物学特性及其与相关疾病的研究现状进行综述.
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Toll样受体与肝缺血再灌注损伤及其保护
Toll样受体(Toll-like receptors,TLR)是参与非特异性免疫(天然免疫)的一类重要蛋白质分子,也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁.TLR是单个的跨膜非催化性蛋白质,可以识别来源于微生物的具有保守结构的分子.当微生物突破机体的物理屏障,如皮肤、粘膜等时,TLR可以识别它们并激活机体产生免疫细胞应答.肝脏的缺血/再灌注(I/R)是在休克的复苏、肝叶切除术以及肝移植手术等过程中常见的病理生理过程.缺血再灌注损伤机制中多种因素参与了,尚未完全阐明其确切病因.以往研究表明,在非内毒素血症状态下,肝脏库普弗细胞及血管内皮细胞表达的TIRs参与了小鼠肝脏缺血再灌注损伤病理过程[1].本文主要阐述Toll样受体与肝脏的缺血/再灌注(I/R)相关研究进展.
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流感病毒感染的模式识别及下游相关信号通路
流感病毒(influenza virus)轻症感染可由机体免疫系统清除,但重症感染则诱发肺脏免疫损伤.流感病毒的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)可被位于细胞膜、细胞器膜及胞质内的重要模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)介导识别,活化一系列激酶及转录因子,诱导促炎细胞因子和趋化因子的表达、成熟和分泌,进一步激活天然免疫及获得性免疫应答细胞,介导炎症反应和诱导免疫病理损伤.PRRs是研究天然免疫应答启动机制及抑制重症感染诱导免疫病理损伤的重要靶点.现就Toll样受体(toll-like recep-tors,TLRs)中的TLR3、TLR7/8、TLR4、RIG-I样受体(RIG-I like receptors,RLRs)和NOD样受体(NOD-like receptor,NLR)在流感病毒感染中的识别及下游信号通路在免疫病理损伤中的作用机制作一综述.
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Toll样受体与新型佐剂-佐剂研究的新趋势
佐剂是疫苗开发的一部分.Toll样受体是一类重要的模式识别受体,能通过识别不同病原体的PAMP在连接固有免疫与特异性免疫的关键环节发挥着极为重要的作用.早发现并作为佐剂使用的TLR配体是CpG.CpG通过TLR9介导对免疫系统的激活作用,从而发挥诱导Th1偏倚的Th1/Th2混合反应的佐剂效应,已经受到了广泛的关注和应用.近年来,研究发现一类具有免疫调节作用的抗病毒治疗的药物Imidazoquiline(咪唑并奎琳衍生物)是合成的TLR7/8的配体,也具有佐剂活性,但效果还存在争议.TLR配体作为佐剂的使用为佐剂的研发开拓出一条新的思路,带来了新的希望.
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TLR家族及其功能研究进展
由于TLR能识别病原体,从而在病原体入侵机体的早期即启动天然免疫,提示其在抗感染中的重要作用.至今已发现的TLR家族中的TLR1～10,其中TLR1～5的结构已经被确定,而对于TLR的功能,现今对TLR在细菌内毒素(LPS)作用下引起的免疫毒理学作用的研究较为深入,提示TLR对由病原体引起的免疫病理损伤有重要的作用.随着研究的深入,发现TLR在促进细胞因子的合成与释放,引发炎症反应;促进免疫细胞膜表面表达相关免疫分子,促进免疫细胞的成熟和功能化;抗病毒感染;调节免疫应答;诱导一氧化氮(NO)依赖性杀菌活性;介导全身免疫病理损伤以及其家族间的协同作用影响免疫应答等方面起到重要的作用.
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Toll样受体的研究进展
Toll样受体是近几年发现的天然免疫受体,它们不仅能特异性地识别病原微生物的结构成分,激活天然免疫,同时也为激活获得性免疫提供共刺激信号.Toll样受体是天然免疫与获得性免疫之间的连接点.
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树突细胞和Toll样受体的发现与疫苗的研制
2011年,由于在免疫学研究领域的开创性的研究,Ralph Steinman,Jules Hoffmann和Bruce Beutler获得了诺贝尔生理学医学奖.Ralph Steinman发现了树突细胞及其主要功能；Jules Hoffmann和Bruce Beutler发现Toll样受体在固有免疫应答中的作用.他们的工作改变和丰富了人们对固有免疫应答和获得性免疫应答的认识,也对新型疫苗及佐剂的研究产生了巨大的推动作用.
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人骨髓间充质干细胞Toll样受体3和4活化对IL-10、IL-12和IL-6分泌的影响
目的:研究人骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)中Toll样受体(TLR)3和4的活化对IL-10、IL-12和IL-6分泌的影响.方法:用RT-PCR法检测体外培养的BM-MSCs中是否存在TLR3和TLR4的表达;用不同剂量的聚肌胞和脂多糖分别进行诱导后,用ELISA法检测培养上清中IL-10、IL-12和IL-6的变化.结果:BM-MSCs中有较高水平的TLR3和TLR4mRNA表达.聚肌胞可明显促进IL-6分泌(P＜0.05),且0.025 g/L组明显强于0.0025 g/L组(P＜0.01);明显抑制IL-10分泌(P＜0.01),且0.25 g/L组明显强于0.025 g/L组(P＜0.05);对IL-12的分泌无明显影响.脂多糖可明显促进IL-6的分泌(P＜0.01),而对IL-12和IL-10的分泌无明显影响.结论:BM-MSCs中有较高水平的TLR3和TLR4表达.TLR3活化影响BM-MSCs对IL-6和IL-10的分泌,TLR4活化影响IL-6的分泌,TLR3或TLR4活化均不影响IL-12的分泌.
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Toll样受体核因子通路在变应性鼻炎发病中的作用
目的 探讨Toll样受体(TLR)核因子信号传导通路及核因子-κB(NF-κB)不同程度表达在变应性鼻炎(AR)发病中的作用.方法 60只Wistar大鼠随机分为5组,12只/组,A组为正常对照组、B组为AR模型组、C组为AR+脂多糖组、D组为AR+吡咯烷二硫氨基甲酸干预组、E组为AR+地塞米松干预组.应用卵清蛋白建造变应性鼻炎大鼠模型,HE染色观察鼻黏膜形态改变,计数炎症细胞浸润数,实时定量荧光聚合酶链式反应检测TLR-4及NF-κB的表达,免疫组织化学法检测Th细胞因子及IgE的含量.结果 B组TLR-4及NF-κB、IgE的表达均较A组增高,鼻黏膜以嗜酸性粒细胞浸润为主;C组TLR-4及NF-κB、IgE的表达进一步增高,鼻黏膜以中性粒细胞浸润为主;D、E组TLR-4及NF-κB、tgE的表达均降低(P＜0.05).结论 TLR-NF-κB信号传导通路在变应性鼻炎发病中发挥作用,NF-κB的高表达抑制白细胞介素-4的生成、促进干扰素-γ的生成,产生免疫偏移作用.
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LPS对肝癌细胞TLR4及IL-23/IL17A表达的影响
目的 观察Toll样受体4(TLR4)的激动剂LPS (LPS)对肝癌HepG2细胞株表达TLR4、IL-23/IL-17A的影响,探讨TLR4、IL-23/IL-17A在肝癌发生中的作用及可能机制.方法 用LPS 1 mol/L作用HepG2细胞24h,或先用LPS作用HepG2细胞24 h后再用髓样分化因子-88(MyD88)的阻断剂ST2825作用HepG2细胞8h,运用Q-PCR法检测TLR4、IL-23、IL-17A在HepG2细胞的转录水平;应用Western-blot方法测定TLR4、IL-23及IL-17A在HepG2细胞的表达,采用ELISA法检测HepG2细胞培养上清液中IL-23在12h、24h、36 h的分泌水平.结果 LPS可促进HepG2细胞株IL-23的分泌和TLR4、IL-23、IL-17A mRNA的转录及蛋白表达,阻断MyD88后其表达水平比LPS组明显降低,趋于正常组水平.结论 TLR4、IL-23及IL-17A参与原发性肝癌的发生与进展.
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骨髓间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA和蛋白表达的影响
目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)对肺泡巨噬细胞Toll 样受体(toll-like receptor，TLR2/4)基因和蛋白的影响，为探讨骨髓MSCs移植对早期炎症介质的影响及炎症级联反应的调控机制做铺垫。 方法 巨噬细胞分为PBS对照组、骨髓MSCs对照组、脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)对照组和LPS+骨髓MSCs处理组，各组均取1，3，6，12 h时相点。流式细胞仪检测骨髓MSCs表面标记阳性细胞率和巨噬细胞TLR2/4蛋白的表达；RT-PCR方法检测各组不同时相点巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达变化；ELISA法检测各组不同时相点上清液中TNF-α浓度变化。 结果 与PBS对照组、骨髓MSCs对照组比较，LPS对照组巨噬细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01)，1h时开始增高，12h时达到峰值；同时TNF-α浓度也明显增高(P＜0.01)，6h时TNF-α浓度达到峰值。与LPS对照组比较，LPS+ MSCs组巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01)，TNF-α浓度也降低(P＜0.01)。 结论 LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达升高，TNF-α浓度也升高，后者峰值时间出现略早，说明TLR2/4表达与TNF-α之间存在一个正反馈环；骨髓MSCs可以明显降低LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达及TNF-α浓度，说明骨髓MSCs打破了上述正反馈环。
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黄体酮对大鼠脑外伤后皮层Toll样受体和核因子-κB表达的影响
目的 探讨黄体酮对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后脑皮层中Toll样受体(toll-like receptors,TLR)和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达的调控作用.方法 雄性Wistar大鼠18只,随机分为对照组、创伤组和黄体酮治疗组,采用自由落体撞击致重型颅脑损伤,黄体酮注射剂量为16 mg/kg,连续注射5 d,伤后第5天处死动物,取脑挫裂伤周围区脑皮层标本,分别测定TLR2、TLR4的mRNA表达和NF-κB结合活性.结果 与对照组相比,创伤组TLR2、TLR4的mRNA水平和NF-κB活性明显上调(P＜0.01);黄体酮治疗组中,TLR2、TLR4和NF-κB活性显著下降(P＜0.01).结论 黄体酮能够抑制TBI后皮层中TLR2、TLR4和NF-κB的表达,这可能是黄体酮实现神经保护作用的机制之一.
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间歇性高容量血液滤过对严重脓毒症患者Toll样受体表达及器官功能的影响
目的 探讨间歇性高容量血液滤过(pulse high volume hemofiltration,PHVHF)对严重脓毒症患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)表面Toll样受体2(Tolllike receptor 2,TLR2)和TLR4 mRNA表达的临床意义. 方法 40例严重脓毒症患者按随机数字表法分为常规治疗组和PHVHF组,每组20例.另选15例健康志愿者作为对照组.在治疗前、治疗24,48,72 h RT-PCR法检测单核细胞TLR2和TLR4 mRNA表达,ELISA检测血浆中TNF-α和IL-6浓度.比较各组生命体征、血清胆红素(BIL)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、乳酸水平(Lac)、氧合指数(PaO2/FiO2)、急性生理和慢性健康评估Ⅱ(acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEⅡ)评分、序贯器官功能衰竭(sequential organ failure assessment,SOFA)评分变化及预后,并监测治疗过程中的并发症. 结果 脓毒症组TLR2和TLR4 mRNA表达及TNF-α、IL-6的浓度水平均明显高于对照组(P＜0.01).PHVHF组72 h后,TNF-α和IL-6水平较治疗前明显下降(P＜0.01),PBMC表面TLR2和TLR4表达分别与常规治疗组同时相点比较显著降低(P＜0.01)；而常规治疗组治疗前后比较差异无统计学意义.PHVHF组治疗72 h后,平均动脉压(MAP)和PaO2/FiO2较治疗前明显上升,Cr、BUN、Lac、APACHEⅡ评分和SOFA评分均较治疗前显著降低(P＜0.05),且与常规治疗组同时相点比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 PHVHF可降低严重脓毒症患者的全身炎症反应,改善重要器官功能水平,缩短ICU住院时间,下调PBMC 表面TLR2、TLR4表达可能是其治疗严重脓毒症的新机制.
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TLRs/MyD88与痛风性关节炎的相关性研究
目的:研究Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)与痛风性关节炎患者临床及实验室指标的相关性.方法:选取120例痛风性关节炎患者,其中急性痛风性关节炎患者(急性组)76例,非急性痛风性关节炎患者(非急性组)44例;另选取健康者20例为健康对照组.记录所有患者的一般情况、病程、疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分,检查肾功能、C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR),酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测TLR2、TLR4、MyD88在外周血的浓度,采用SPSS 22.0软件分析痛风性关节炎患者的外周血TLR2、TLR4、MyD88与各指标的相关性.结果:①痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);急性组患者外周血TLR2、TLR4、MyD88浓度较非急性组明显升高(P<0.01).②病程<1年、1～5年、5～10年、>10年的患者外周血TLR2、TLR4、MyD88比较,病程<1年的患者外周血TLR2、TLR4高,差异有统计学意义(P<0.05);其他病程段的痛风患者两两比较,差异无统计学意义(P>0.05).急性组患者VAS评分、ESR、CRP高于非急性组,差异有统计学意义(P<0.01).非急性组患者外周血尿酸高于急性组,差异有统计学意义(P<0.05);2组尿素氮、肌酐、胱抑素C比较,差异无统计学意义(P>0.05).④痛风性关节炎患者外周血TLR2、TLR4、MyD88与CRP、ESR呈线性正相关(P<0.01或P<0.05).结论:TLR2、TLR4、MyD88参与了痛风性关节炎患者的发生、发展,尤其在急性期.
