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以ISA720为佐剂甘氨酸作为保护剂的恶性疟疾疫苗AMA1的长期稳定性
恶性疟原虫顶端膜抗原(AMA1)是恶性疟原虫无性繁殖血液期表达的蛋白,是恶性疟疾疫苗的候选抗原.AMA1蛋白是疟原虫FVO和3D7等位基因表达产物,恶性疟疾候选疫苗AMA1-C1/ISA720是AMA1抗原与佐剂MontanideISA720按照1∶1(质量比)配伍混合合成的.
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新生儿异戊酸血症1例报告
异戊酸血症(Isovaleric acidemia,IVA)MIM (isovalerylCoAdehydrogenase,)为异戊酸辅酶A脱氢酶先天性缺陷所致,属常染色体隐性遗传,该酶在亮氨酸代谢的第三步,即异戊酰辅酶A代谢为3-甲基巴豆酰辅酶A中发挥关键作用,导致异戊酸及其代谢产物堆积,血中异戊酸含量明显增高,并从尿中排出大量异戊酸甘氨酸.临床出现症状.有两种不同的临床类型,约半数病人新生儿期急性起病,而另一半病例表现为慢性间歇性发作.急性IVA:新生儿在出生时正常,生后1～14天出现拒奶、呕吐,继而表现为脱水、倦怠和嗜睡.多有体温低、震颤或惊厥.常伴有因异戊酸增高所致的难闻的"汗脚"气味.
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反相高效液相色谱法测定复方甘草甜素片三组分的含量
目的:建立测定复方甘草甜素片中甘草酸单铵盐及两种氨基酸含量的方法.方法:采用RP-HPLC法测定复方甘草甜素片三组分的含量. 流动相为乙腈∶0.025 mol/L NaAC-DMF(40∶60,v/v),固定相为ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm),双波长检测,检测波长256 nm和360 nm.结果:甘草酸单铵盐在40 ng/ml～300 μg/ml范围和两种氨基酸在20 ng/ml～120 μg/ml范围线性相关良好(r=0.999 6,r=0.999 7,r=0.999 8),回归方程为Y=14 318X+724.64, Y=265 416X, Y=142 768X-5 023,平均回收率分别为98.41%(RSD=1.80%)、101.36%(RSD=1.20%)和101.56%(RSD=2.05%). 结论:HPLC法测定复方甘草甜素片中三组分简便、准确、重现性好,可作为该制剂质量检验的定量方法.
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甘氨酸治疗急性坏死性胰腺炎的动物试验研究
目的:探讨甘氨酸对急性坏死性胰腺炎(ANP)的治疗作用及其对肿瘤坏死因子和内毒素含量的影响,并观察TNF-α和内毒素(Endotoxin,ET)在ANP病程中的动态变化.方法:标准wtstar大鼠105只随机分为正常对照组、ANP组及治疗组,采用制作十二指肠闭袢的方法复制大鼠ANP模型,动态观察TNF-α和ET含量变化,同时观察各组大鼠不同时间胰腺组织的病理变化、大鼠24 h病死率及平均生存时间.结果:甘氨酸可明显降低ANP大鼠血TNF-α含量,但对ET无明显影响.还可降低ANP大鼠24 h病死率及延长生存时间.结论:甘氨酸可以通过明显降低TNF-α含量显著改善ANP大鼠的预后.
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还原型谷胱甘肽治疗病毒性肝炎及各种原因引起的肝功能异常临床分析
还原谷胱甘肽为谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸构成的三肽化合物.机体各器官内广泛分布,具有解毒和保护肝细胞的作用.它参与体内三羧酸循环及糖代谢[1,2],激活体内的疏基酶等多种酶,从而促进三大物质代谢.本临床研究旨在通过对各种肝病患者随访临床症状及主要肝脏生化指标,观察还原谷胱甘肽治疗各种肝病的有效性与安全性.
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复方甘草甜素治疗慢性乙型肝炎35例临床观察
复方甘草甜素是由甘草酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的复合物,我们对慢性乙型肝炎进行治疗取得了较好的疗效,现将结果报告如下.
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甘氨酸的肝脏保护作用
甘氨酸即a-氨基乙酸,属于不带电荷的极性氨基酸,是一种非必需氨基酸,含一个氨基和一个羧基(简单的氨基酸).由于其分子小,所以易于在蛋白中作为灵活的连接区,参与形成螺旋、胞外的信号分子、细胞膜或酶的识别位点.
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甘氨酸对大鼠创伤性休克继发肝损伤的防护作用
目的 研究甘氨酸对大鼠创伤性休克后肝组织热休克蛋白70(HSP70)和TNF-αmRNA表达的影响,探讨其对大鼠创伤性休克继发肝损伤的可能保护机制.方法 建立创伤性休克动物模型,120只Wistar大鼠按随机数字表法分成3组:创伤性休克组(休克组)、甘氨酸治疗组(治疗组)和对照组.在复苏开始时,治疗组大鼠将甘氨酸按100 mg/kg溶于0.5 ml等渗盐水后经颈静脉输入,休克组输以同体积的等渗盐水.分别于复苏后3,6,12,24及48 h 5个时相点处死大鼠.采用RT-PCR法检测肝组织HSP70和TNF-α mRNA表达;观察肝组织病理改变并测定血清ALT和AST水平. 结果 休克组复苏后3 h肝组织HSPTO和TNF-αmRNA表达即增加,复苏后6 h达高峰,治疗组肝组织HSP70 mRNA表达于复苏后12 h达高峰.与休克组比较,治疗组各时相点肝组织TNF-α mRNA表达明显降低(P<0.05),HSP70 mRNA表达明显增强(P<0.05),血清ALT和AST明显降低(P<0.05),肝组织光镜下病理损害明显改善(P<0.05). 结论甘氨酸可能通过增强肝组织HSP70 mRNA表达及抑制TNF-α mRNA表达的途径降低创伤性休克后继发肝损伤的程度.
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探寻新生儿氨基酸的佳营养组成
根据氨基酸完全来源于饮食或通过自身底物合成可分为必需氨基酸和非必需氨基酸,异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸及组氨酸是必需氨基酸,因新生儿的某些代谢过程尚未发育成熟,精氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、脯氨酸、牛磺酸以及酪氨酸为条件必需氨基酸.氨基酸的质与量对新生儿的生长发育都很重要.
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甘氨酸对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用及机制
目的探讨甘氨酸对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用及机制.方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,用生化分析仪检测缺氧后6 h及甘氨酸处理后心肌细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量;用免疫组织化学方法观察常氧及缺氧心肌细胞甘氨酸受体α1亚基(GlyRα1)的表达;激光共聚焦显微镜检测细胞内游离钙及心肌细胞膜电位的变化.结果缺氧后6 h心肌细胞培养液中CK、LDH值[(393.8±5.3)、(1 564±41)U/L)]均升高,甘氨酸处理后CK、LDH值[(56.3±2.7)、(716±18)U/L]均明显下降(P＜0.01).常氧及缺氧心肌细胞GlyRα1均呈阳性表达.常氧心肌细胞钙离子平均荧光强度为27±8,缺氧后6 h增加为139±29(P＜0.01);而甘氨酸处理后细胞钙离子平均荧光强度为51±11,与缺氧后6 h比较明显减少(P＜0.01),与常氧下比较却明显增加(P＜0.01).常氧心肌细胞膜电位为177±20,缺氧后6 h膜电位发生去极化(62±9,P＜0.01);而加入甘氨酸后心肌细胞膜电位为123±16,较缺氧后6 h时的去极化程度明显减轻(P＜0.01).结论甘氨酸对缺氧心肌细胞有保护作用,其可能的机制是甘氨酸与其受体结合后,减轻了心肌细胞膜去极化,从而减少了细胞膜电压依赖性钙通道开放,使钙离子内流减少.
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甘氨酸对大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡的影响
目的 明确甘氨酸对缺血缺氧致心肌细胞凋亡过程的影响.方法 建立SD乳鼠心肌细胞缺血缺氧模型,分为单纯缺血缺氧组和甘氨酸处理组(培养液中加入终浓度5 mmoL/L甘氨酸,其余处理同单纯缺血缺氧组).以SD乳鼠正常心肌细胞作为对照组.3组细胞培养6 h后,检测凋亡情况、线粒体跨膜电位及分布情况、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性变化.结果 (1)细胞凋亡程度:对照组和甘氨酸处理组荧光强度均明显低于单纯缺血缺氧组(P<0.01).(2)线粒体跨膜电位:对照组心肌细胞荧光强度为73±4,单纯缺血缺氧组荧光强度(32±7)明显较弱(P＜0.01),甘氨酸处理组荧光强度(52±4)强于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).(3)mPTP开放情况:对照组心肌细胞线粒体荧光强度(90±7)较强,甘氨酸处理组荧光强度(62±8)明显强于单纯缺血缺氧组(27±4,P＜0.01).(4)caspase-3活性:对照组和甘氨酸处理组均显著低于单纯缺血缺氧组(P＜0.01).结论 甘氨酸对缺血缺氧心肌细胞具有抗凋亡作用,其机制可能与改变线粒体膜电位、减少mPTP开放、减轻钙超载、降低caspase-3活性有关.
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甘氨酰谷氨酰胺二肽对烧伤大鼠心功能的保护作用
目的 了解甘氨酰谷氨酰胺二肽(简称甘谷二肽)对严重烧伤大鼠心肌力学功能的保护作用,并探讨其机制.方法 将136只Wistar大鼠分成对照组8只(不予烧伤)、烧伤组32只、谷氨酰胺组32只、甘氨酸组32只、甘谷二肽组32只.后4组均造成30%TBSA Ⅲ度烧伤.5组大鼠依次给予酪氨酸1.5 g·kg-1·d-1、酪氨酸1.5 g·kg-1·d-1、谷氨酰胺1.0 g·kg-1·d-1+酪氨酸0.5 g·kg-1·d-1、甘氨酸0.5 g·kg-1·d-1+酪氨酸1.0 g·kg-1·d-1、甘谷二肽1.5 g·kg-1·d-1.伤后12、24、48、72 h检测大鼠心肌组织还原型谷胱甘肽(GSH)、腺苷一磷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)、腺苷三磷酸(ATP)、细胞能荷(EC)的含量和主动脉收缩压(AOSP)、主动脉舒张压(AODP)及左心室收缩压(LVSP)、左心室压力变化大上升速率(+dp/dtmax).结果 后4组大鼠伤后心肌组织GSH、ATP和EC含量以及AOSP、AODP、LVSP、+dp/dtmax检测值普遍低于对照组(P＜0.01),AMP、ADP含量则普遍高于对照组(P＜0.01).与烧伤组比较,后3组上述指标均有明显改变.伤后12 h甘谷二肽组的GSH含量为(72.7±1.7)μmol/g,高于谷氨酰胺组(67.8±3.8)μmol/g(P＜0.01);该时相点EC、AOSP的检测值亦高于谷氨酰胺组(P＜0.01).伤后48 h甘谷二肽组GSH、EC、AOSP的检测值高于甘氨酸组(P＜0.01).结论 大鼠烧伤后给予谷氨酰胺、甘氨酸和甘谷二肽,能不同程度改善心肌组织GSH、高能磷酸化合物含量,缓解心肌力学功能的下降.甘谷二肽的疗效明显优于谷氨酰胺或甘氨酸,提示它对烧伤后心脏功能的保护作用具有协同效应.
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柱前衍生化HPLC法同时测定阿胶中4种主要氨基酸的含量
目的:建立阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸4种氨基酸的含量测定方法.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠-乙腈(93:7),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速:1.0 mL·min-1;检测波长为254 nm.结果:羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的线性范围分别为0.016～0.239μg(r=0.9999),0.032～0.483 μg(r=0.9998),0.013～0.188μg(r=0.9998),0.018～0.271μg(r=0.9999);加样回收率(n=6)分别为96.20%(RSD=1.3%),98.46%(RSD:1.2%),99.28%(RSD=0.9%),98.65%(RSD=1.7%).结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于阿胶中羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸的检测.
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柱前衍生化高效液相色谱法测定猪胆粉结合胆酸中甘氨酸和牛磺酸的含量
目的:建立柱前衍生化高效液相色谱法同时测定猪胆粉结合胆酸中什氨酸和牛磺酸含量.方法:采用10%氢氧化钠溶液对猪胆粉中的结合胆酸进行碱水解,得到游离氨基酸,再用2,4-二硝基氟苯衍生化制备样品.采用Kromasil KR100-5C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:0.05 mol·L~(-1)醋酸钠缓冲盐(醋酸调pH至5.5)和甲醇(75:25);流速:1.0 mL·min~(-1);柱温:35℃.检测波长:360 nm.结果:甘氨酸与牛磺酸能达到基线分离,空白无干扰,线性良好.结论:该方法简便、快捷、重复性好,能准确测定猪胆粉结合胆酸中什氨酸及牛磺酸的含量,为猪胆粉的质量控制提供了理论依据.
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鹿角胶中4个主要氨基酸的测定研究
目的:研究建立鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4个氨基酸的分析和测定方法.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于沸水浴水解1h,蒸干,甲醇溶解,以苯酚-0.5％硼砂溶液(4:1)为展开剂,硅胶G为固定相,茚三酮试液为显色剂进行TLC分析.样品以6mol·L-1盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析.采用Phenomenex C18色谱柱(4.6nn ×250 mm,5 μμm),柱温为43C;流动相A为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(7:93),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1；检测波长为254 nm进行HPLC测定分析.结果:TLC能较好地鉴别出鹿角胶中的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸.HPLC测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的线性范围分别为0.02 ～0.34 μg(r=1.000),0.04～0.71 μg(r=1.000),0.02 ～0.30 μg(r =0.9998),0.02～0.37 μg(r＝1.000)；加样回收率(n=6)分别为99.5％ (RSD=2.3％),97.8％( RSD=1.6％),100.8％ (RSD=1.6％),97.9％ (RSD=2.4％).结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的检测.
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高效液相法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量
目的:建立HPLC法测定人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量.方法:采用氨基键合柱进行分离,流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(50∶ 50),流速1.0 mL·min-,紫外检测波长为205 nm,柱温40℃,进样量20 μL;用面积外标法计算含量.结果:在本实验条件下,甘氨酸与精氨酸的分离度符合要求;甘氨酸质量浓度在1.02～5.04 mg·mL-1范围内线性关系良好;3批样品平均含量分别为8.70、8.76、8.80 mg·mL-1,RSD分别为0.57％、0.32％和0.50％.结论:该方法经方法学验证,可用于人凝血因子Ⅷ中甘氨酸含量的测定.
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高效液相色谱-荧光法测定大鼠纹状体细胞外液中4种氨基酸的含量
目的:采用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-RF)建立大鼠脑微透析液中天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的测定方法.方法:采用ODS-C18(5μm,250mm×4.6mm)色谱柱,柱温为35℃,流动相A为磷酸盐缓冲液(pH 6.7),流动相B为纯甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,荧光检测器的激发波长为239 nm,发射波长为375 nm.以邻苯二甲醛和β-巯基乙醇为衍生化试剂,柱前衍生,将脑微透析液直接注入高效液相色谱仪完成分析.结果:Asp、Glu、Gly和GABA4种氨基酸在0.5～32 μmol·L-1范围内线性关系良好,回收率范围为96.2％～102.1％.结论:所建立的氨基酸检测方法具有流动相配制简单、保留时间稳定、分析时间短、重复性好和回收率高等优点,可用于脑微透析液中痕量氨基酸的测定.
关键词： 脑微透析 纹状体 高效液相色谱-荧光检测法 氨基酸类递质 衍生化 邻苯二甲醛(OPA) 天门冬氨酸 谷氨酸 甘氨酸 氨基丁酸 -
HPLC法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量
目的:建立用高效液相色谱法测定人凝血酶原复合物中氨基酸含量.方法:采用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)为衍生剂,与氨基酸柱前衍生后,用Agilent 1200高效液相色谱仪,AccQ·Tag C18柱(waters 150 mm×3.9 mm,4μm),以水Eluent(醋酸盐-磷酸盐缓冲液)稀释液和乙腈进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,柱温37℃,进样量10μL.结果:各氨基酸在32 min内测定完毕,回收率为99.3％～100.6％.RSD均小于1.5％.结论:本法分离度好,快速、简便,可作为产品的质量控制方法.
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P物质增强大鼠鞘内注射D-丝氨酸诱发的热痛过敏
目的：研究脊髓伤害性信息传递中P物质(SP)与N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体甘氨酸位点激动剂D-丝氨酸(D-serine)之间的功能联系.方法：在浅麻大鼠，采用行为学方法，测定甩尾反射潜伏期(TFL)并结合鞘内给药途径观察药物作用.结果：鞘内注射D-serine 1000 nmol后1.5分钟，TFL明显缩短：在注射D-serine 10 nmol前6分钟鞘内施加SP0.05 nmol，明显增强D-serine 10 nmol引起的TFL缩短效应；选择性NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂7-氯犬尿酸l pmol及非选择性PKC抑制剂H-7 10μmol均可阻断这种增强作用.结论：SP可使D-丝氨酸诱发的热痛过敏明显加强，NMDA受体甘氨酸位点及胞内蛋白激酶系统参与了脊髓SP与NMDA受体的相互作用.
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国内中药化学成分抗内毒素研究现状
细菌内毒素(Endotoxin)是迄今发现的生物活性为广泛的物质之一,内毒素拮抗剂的研究已成为生命科学的热门话题.中药化学成分是中药药理作用的物质基础.板蓝根有机酸;山莨菪碱;苦参碱;川芎嗪;秋水仙碱及甘氨酸等18个中药化学成分分别从破坏内毒素分子结构、抑制内毒素诱导的炎性介质的合成和释放及降低内毒素的致热性和致死性等不同途径呈现其抗内毒素作用.但大多数仍局限于实验室,今后不仅应扩大研究范围,还应加强临床应用研究.
