疟原虫抗原表位与沙门氏菌鞭毛蛋白嵌合体的构建

疟原虫抗原B表位NKND是由本所寄生虫免疫室与分子生物学研究室合作发现的一个疟疾抗原表位.它存在于多种不同的疟原虫分离株.在其C末端加上一个D可以增强它与抗体的结合能力[1].我们人工合成NKNDD和CS.T3的寡核苷酸片段并将之串联后插入沙门氏菌鞭毛蛋白表达载体.斑点杂交得到阳性克隆.序列分析鉴定为2拷贝NKNDD与2拷贝CS.T3的串联体.

恶性疟原虫海南分离株裂殖子表面蛋白2真核表达重组质粒的构建

目的构建恶性疟原虫海南分离株(FCC1/HN)裂殖子表面蛋白2(MSP2)融合HBsAg基因片断真核表达质粒pVXORF1-PfMSP2-HBS及重组真核表达质粒pVXORF1-PfMSP2,为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定基础. 方法 (1)采用PCR技术对恶性疟原虫FCC1/HN株MSP2原核表达质粒PET28α-MSP2的MSP2基因进行扩增,扩增产物经纯化后用BamHⅠ酶切;质粒pVXORF1-PvMSP1.19-HBS用相同的酶酶切,经纯化后用T4DNA连接酶将其与酶切后纯化的MSP2基因连接;(2)分别用BamHⅠ+XhoⅠ双酶切PET28α-MSP2质粒DNA和pVXORF1质粒DNA,纯化后将目的基因片断用T4DNA连接酶连接;将(1)、(2)连接产物分别转化大肠杆菌DH5α.于氨苄青霉素阳性LB培养平板上筛选阳性克隆,酶切电泳鉴定. 结果筛选出的重组子为编码FCC1/HN MSP2基因片断的重组质粒pVXORF1-PfMSP2-HBS及pVXORF1-PfMSP2. 结论编码FCC1/HN MSP2基因片断真核表达质粒pVXORF1-PfMSP2-HBS和pVXORF1-PfMSP2的构建为疟疾核酸疫苗及蛋白疫苗的研制奠定了基础.

与疟原虫侵入相关分子的研究进展

疟原虫具有复杂的生活史,需要人和按蚊两个宿主,并有多个虫期的发育.在人体内先后侵入、寄生于肝细胞和红细胞内,进行裂体增殖(Schizogony).疟原虫寄生人体的两个阶段中,不仅侵入的形式和侵入的宿主细胞不同,其侵入所依赖的粘附分子和机制也有很大差异.疟原虫侵入宿主细胞依赖于一系列粘附分子和酶的作用,其侵入过程需要寄生虫和宿主细胞间配体和受体的协同或相互作用.通过深入研究疟原虫侵入分子及其机制,寻找出介导侵入的分子,并作为新型抗疟药的靶目标或作为疟疾疫苗的候选抗原,可阻断疟原虫的侵入.现将疟原虫侵入相关分子的研究进展作一介绍,为进一步筛选新的抗原分子和研制有效的抗虫疫苗提供背景知识和理论依据.

疟疾疫苗研究概况

目前疟疾仍是严重危害人类健康的热带传染病,据WHO近5年的统计,每年平均约有2.1亿人发病,100多万人死于疟疾,世界上有100多个国家有疟疾流行,这些国家中一半的人口生活在疟区,热带非洲国家的人群疟疾发病率均呈上升趋势.而疟原虫抗药性及蚊媒耐药性的产生和迅速扩散,给疟疾的控制带来了更大的难度,似乎我们已经不可能指望采取单一的措施便能降服一种由生活史复杂、抗原高度变异的疟原虫引起的传染病.疟疾疫苗的研制和运用可为疟疾的综合治理提供有力的武器,但对疟原虫免疫机制的肤浅认识及缺乏适当的动物模型,使得有效的临床疟疾疫苗在经历半个世纪后的今天仍是凤毛鳞角.不过随着分子生物学技术的提高和分子免疫学研究的深入,疟疾疫苗已步入核酸疫苗时代,约氏疟原虫核酸疫苗的问世及显示对68%小鼠具有保护作用的结果[1],极大地鼓舞了疟疾疫苗的研究者.本文依据疟疾疫苗的发展,简介几种重要的疟疾候选疫苗及其作用机理,并简述对影响疟疾疫苗效果的相关因素.

不同佐剂对随机组合多表位恶性疟疾疫苗M. RCAg-1的免疫原性及体外抑虫率影响的研究

目的 研究弗氏佐剂及3种人用佐剂[Al(OH)3、Montanide ISA720、Montanide ISA51]对重组多表位蛋白M.RCAg-1(malaria random constructed antigen-1)在BALB/c小鼠及新西兰大白兔体内产生免疫效果的影响.方法 以弗氏佐剂、Al( OH)3佐剂、Montanide ISA720以及MontanideISA51佐剂分别与M.RCAg-1蛋白进行配伍,分别免疫BALB/c小鼠及新西兰白兔；采用ELISA法检测M.RCAg-1蛋白及其所组成各个表位特异的血清IgG含量；间接荧光免疫试验分析不同配伍组免疫血清对天然疟原虫抗原的识别；酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测特异性鼠T淋巴细胞的活化；另借助生物传感器评价抗原与不同佐剂配伍组血清的亲和力,并用体外生长抑制试验(GIA)对恶性疟原虫的体外生长的影响进行评价.结果 不同佐剂可诱发不同水平的抗体滴度,Montanide ISA51佐剂配伍组的效果与弗氏佐剂组为接近,并可使蛋白包含的11个表位肽能都较好诱发出特异性抗体,可有效激发以IFN-γ为主的细胞免疫应答,而且Montanide ISA51佐剂组免疫产生的抗体和M.RCAg-1蛋白质的亲和力高于其他两种佐剂；而Montanide ISA720佐剂和Al(OH)3佐剂免疫组不能诱发小鼠产生显著的IFN-γ反应(P＞0.05).Montanide ISA51配伍蛋白质免疫产生的IgG在浓度为2mg/ml时对3D7和Dd2的抑制率分别为60%和100%,Al(OH)3佐剂组免疫兔血清IgG体外抑虫率较低(10%左右),而Montanide ISA720佐剂免疫组血清不能有效抑制疟原虫生长.结论 通过比较3种人用佐剂和弗氏佐剂对BALB/c小鼠和新西兰兔的免疫辅助效能显示,Montanide ISA51佐剂能很好的辅助M.RCAg-1蛋白疫苗诱发动物体内的体液免疫和细胞免疫应答,可做为疫苗的候选佐剂之一.

国际生物防御科技前沿热点与我国未来发展思考

加强国家生物防御科技支撑能力是保障生物安全的基础和关键,我军在维护国家主权领土完整、维护国家利益拓展和遂行非战争军事行动等方面需要进一步提升生物防御能力.当前,国际生物防御科技进展迅猛.在生物威胁检测诊断产品方面,主要包括生物威胁的新型、快速、便携、远程检测诊断技术.生防疫苗研发方面,新型病毒疫苗、细菌与毒素疫苗和疟疾疫苗取得积极进展.在生防药物研发方面,新型抗流感病毒药物、抗埃博拉病毒药物、抗马尔堡病毒药物以及治疗炭疽和鼠疫的新药不断涌现.未来,我国应继续围绕生物监测预警、生防产品转化和全谱性生防体系建设等方面展开科研部署.

美海军疟疾疫苗研究进展

疟疾是造成美驻热带、亚热带地区海军和海军陆战队减员的主要原因之一.1988年2月～1993年5月,美海军和海军陆战队共患疟疾210例,其中大部分发生在陆战队和驻太平洋地区的海军部队,尤以驻菲律宾部队发病高.另外,1992年12月以来,美军驻索马里海军陆战队队员患疟疾115例.因此,美海军正加快疟疾疫苗的研究,并取得重要进展.

基于基因组学和蛋白质组学的疟疾疫苗

疫苗学研究受益于新的生物信息学技术.疟原虫的完整基因组序列已经被破译,因此当前的疫苗研究可以指向传统疫苗研究未能发现的特异基因产物.疫苗发展的先进技术,诸如基因组序列分析、微阵列、蛋白质组学方法、高通量克隆、生物信息学数据库工具及计算疫苗学,可被用于开发包括疟疾在内的各种疾病的疫苗.疟疾基因组学、蛋白质组学和及免疫组学的新进展也将促进疟疾疫苗的成功研发.

新发现或帮助开发疟疾疫苗

来自牛津大学等处的科学家或许找到了靶向作用疟原虫的新途径;如今疟疾每年影响着超过40万人的生命,而且大部分患者都是恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)引发的感染,然而生活在疟疾经常爆发区域的人们天然状态下就会获得一种特殊的免疫力来帮助机体在成年时抵御疟疾感染,因此发现抵御疟疾疫苗的可能性手段就是从分子水平上来揭示这些特殊群体机体天然免疫反应的过程.

首支疟疾疫苗朝应用迈出关键一步

可能你会认为，首支抵抗疟疾的候选疫苗值得欢呼。但这个叫作RTS或Mosquirix的疫苗在过去几年却每况愈下，是否该利用以及如何利用疫苗一直是个让人挠头的棘手问题。

中国间日疟疾疫苗的发展现状及展望

随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白的纯化及鉴定

目的 纯化随机组合多表位恶性疟疾疫苗M.RCAg-1蛋白,并进行各项鉴定.方法 对BL21 (DE3)-M.RCAg-1/pDS-ex工程菌发酵产物进行纯化,对纯化的M.RCAg-1蛋白进行各种理化性质鉴定；采用Western blot法检测其反应原性；以不同剂量的M.RCAg-1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体效价；间接荧光免疫法(IFA)分析免疫血清对天然疟原虫抗原的识别；酶联免疫斑点试验检测特异性鼠T淋巴细胞的活化及细胞因子的分泌；体外生长抑制试验检测免疫兔血清对恶性疟原虫生长的影响.结果 M.RCAg-1蛋白表达量约为菌体总蛋白的30％,浓度为1.5 mg/ml,纯度可达95％左右,等电点为5.0；内毒素残留量均小于2.5 EU/mg,宿主蛋白残留量为0.08％,N-末端氨基酸序列正确；可与相应鼠单抗特异性结合；免疫小鼠血清抗体水平随着免疫次数和免疫剂量的增加而升高,20及30 μg剂量组在末次免疫后,血清抗体滴度均可达1:1 031 707;各免疫组小鼠血清均能识别恶性疟原虫天然抗原,且呈抗原剂量依赖性；10、20和30 μg剂量组能刺激相应特异性脾淋巴细胞显著增殖(P＜0.01)及分泌IFNγ和IL-4(P＜0.01),并能较好地抑制疟原虫体外生长.结论 纯化的M.RCAg-1蛋白理化性质稳定,具有较强的免疫原性,能激发可持续、高滴度的特异性抗体,并能诱发显著的T细胞应答,是极具潜力的候选疫苗蛋白,具有较好的开发前景.

016 RTS,S/AS02疟疾疫苗在冈比亚男性成人中的效力

046 三组分血液期疟疾疫苗对巴布亚新几内亚流行区成人的安全性与免疫原性

用活寄生虫免疫预防疟疾

生活在疟疾流行区的人们终能产生抗疟原虫免疫力,说明发展抗疟疾疫苗是有可能的.虽然很少采用全虫疫苗免疫,但是用减毒的寄生虫免疫却是唯一诱导人类无虫免疫的方案.这个结果促使人们去寻找能产生相同保护力的亚单位疫苗,但是现在的候选亚单位疫苗没有一种能产生完全相同的保护作用.随着近来遗传修饰疟原虫的出现,人们重新关注活虫免疫.本文回顾了过去的研究,概述了这一领域的当前进展,并讨论了在进行大规模活虫免疫之前所面临的挑战.

疟疾疫苗研制进展

疫苗预防疟疾(血液期)

背景:由于疟疾的死亡率和发病率负荷沉重,因此,需要疟疾疫苗.本评价描述血液(无性)期疫苗试验结果.有几种疫苗正在研发中,其中仅裂殖子表面蛋白(MSP)/环状体感染红细胞表面抗原(RESA)疫苗已进行随机对照试验.

第36次全球疫苗安全咨询委员会会议

全球疫苗安全咨询委员会（Global Advisory Committee on Vaccine Safety ,GACVS）于2017 年6 月7 — 8 日在瑞士日内瓦召开了第36 次会议.委员会审议了3 种疫苗的特别安全性问题,包括在3 个国家进行的疟疾疫苗RTS／AS01（RTS ,S）试点实施项目的药物警戒计划;BCG 和人乳头瘤病毒疫苗安全性方面的进展;在GACVS 会议期间为审查疫苗安全性制定标准和模板.

PATH疟疾疫苗研发项目

此文着重介绍了美国帕斯适宜卫生科技组织的疟疾疫苗项目以及疟疾疫苗研发策略,尤其是RTS,S疟疾疫苗Ⅲ期临床试验的初步结果.

PfCP-2.9/PfCSP-2疟疾联合疫苗免疫效果血清学评价研究

目的：对PfCP-2.9/PfCSP-2疟疾联合疫苗所诱发的特异性IgG抗体进行分析评价。方法将5只新西兰白兔分为两组，其中免疫组3只，非免疫组2只。免疫组接种PfCP-2.9/PfCSP-2疟疾联合疫苗，非免疫组注射生理盐水。连续3次免疫后，采集血液样本并经间接ELISA检测其IgG抗体水平。根据非免疫组兔的吸光度数值（A值）计算临界值。临界值=2.1×非疫苗免疫组兔A值均值。若免疫组兔吸光度值高于临界值，则被判定为疫苗可诱发特异性 IgG 抗体。结果疫苗可诱发针对PfCP-2.9和PfCSP-2重组蛋白IgG抗体，经4个稀释浓度（1∶100、1∶200、1∶400、1∶800）检测获得2只免疫组兔A值分别为0.629/0.544、0.548/0.443、0.479/0.378、0.410/0.281，均高于相应稀释浓度的临界值（0.019、0.017、0.016、0.020）；疫苗可诱发针对 PfCSP 的特异性 IgG 抗体（每孔包被4μg/ml 多肽），经4个稀释浓度（1∶100、1∶200、1∶400、1∶800）检测2只免疫组家兔A 值分别为0.308/0.152、0.194/0.080、0.110/0.040、0.060/0.025，均高于相应稀释浓度的临界值（0.027、0.019、0.018、0.018）；疫苗可诱发针对PfCSP的特异性IgG抗体（每孔包被10μg/ml多肽），经4个稀释浓度（1∶100、1∶200、1∶400、1∶800）检测获得2只免疫组家兔 A 值分别为0.333/0.129、0.221/0.086、0.133/0.048、0.075/0.029，均高于相应稀释浓度的临界值（0.048、0.038、0.036、0.036）；结论 PfCP-2.9/PfCSP-2疟疾联合疫苗可诱发高水平IgG抗体，该疫苗是安全、有效且耐受性良好。