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碱解法测定动物水解蛋白中L-羟脯氨酸的含量
目的 建立了使用聚四氟乙烯带盖水解管,以NaOH溶液为水解液的碱解法测定动物水解蛋白中L-羟脯氨酸(L-Hydroxyproline,L-Hyp)含量.方法 将样品置于10 ml水解管中,加入6 ml 2.5 mol/L NaOH溶液在110℃烘箱中加热2h,水解出的L-Hyp经氯胺T氧化后与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色络合物,在(558±2) nm处测定其吸光度.结果 在优化实验条件下,该方法的线性范围0～10 μg/ml(r =0.999 3),检出限1.35 μg/g,样品测定的RSD在1.0％ ～2.3％,加标回收率为88.7％～96％(加标量为30 mg/kg).结论 相对酸解法,碱解法的水解效率和酸解法基本一致,样品前处理操作简单,缩短了测定时间,灵敏度、重复性和稳定性良好.
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食品及生物样品中L-羟脯氨酸检测技术研究进展
L-羟脯氨酸(L-hydroxyproline,Hyp)是动物水解蛋白的特征物质,而动物水解蛋白是可能被违法添加于食品中尤其是乳与乳制品中的非食用物质之一,Hyp可作为判定食品中是否掺入动物水解蛋白的重要指标.建立快速、高效地Hyp检测方法,提高其检测灵敏度和回收率,是食品质量安全监控的重要任务.本文就食品及生物样品中L-羟脯氨酸的提取净化、衍生化及测定方法研究进展进行了综述.
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市售龟甲胶质量分析研究
目的 分析市售龟甲胶质量状况,研究建立龟甲胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4个氨基酸的定性和定量分析方法.方法 样品以6 mol.L-1盐酸于沸水浴水解1h,蒸干,甲醇溶解,以苯酚0.5％硼砂溶液(4:1)为展开剂,硅胶G为固定相,茚三酮试液为显色剂进行TLC分析；样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃；流动相A为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(7:93),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-1；检测波长为254 nm,进行HPLC测定分析.应用等离子发射光谱仪对市售龟甲胶样品进行铅、镉、砷、汞、铜和铬元素的测定分析.结果 TLC能较好地鉴别出龟甲胶中的L羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸.HPLC测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的线性范围分别为0.01727～0.3454 μg(r=1.0000),0.03536～0.7072 μg(r=1.0000),0.01508～0.3016 μg (r=0.9998),0.01868～0.3736 μg(r=1.0000)；加样回收率(n=6)分别为97.0％(RSD=2.4％),97.3％(RSD=1.8％),94.7％(RSD=2.2％),96.8％(RSD=1.9％).测定样品中铅、镉、砷、汞、铜和铬元素的含量,发现部分样品铬元素含量较高.结论 所建立的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和L-脯氨酸的定性和定量方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于龟甲胶中这4种氨基酸的检测.市售龟甲胶样品中铬元素含量普遍较高,应加强对该元素的检测控制.
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鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸的柱前衍生高效液相色谱测定法
目的 建立柱前衍生反相高效液相色谱测定鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸方法.方法 样品经酸水解,采用异硫氰酸苯酯(PTTC)与水解液中的L-羟脯氨酸衍生,以C18柱分离,紫外检测器254 nm波长下检测.结果 在2～10 mg/L范围内,L-羟脯氨酸质量浓度与峰面积具有良好的线性关系,样品加标平均回收率为95.0％ ～ 100.3％,方法精密度为0.4％～4.0％.鲜乳的检出限为2.0 mg/kg,乳粉的检出限为14 mg/kg.结论 该方法易于操作、稳定、准确,适用于鲜乳及乳粉中L-羟脯氨酸检测.
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雪隆胶囊的质量标准研究
目的制订雪隆胶囊的质量标准.方法对雪莲花进行了薄层色谱鉴别;用分光光度法测定了L-羟脯氨酸的含量.结果含量测定平均回收率101.1%(RSD＝1.7%,n＝6).结论该方法稳定,专属性强,可作为该制剂的质量控制方法.
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2015版《中华人民共和国药典》阿胶含量测定方法优化
目的:优化2015版《中华人民共和国药典》HPLC测定阿胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸含量的方法.方法:样品用盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析.色谱柱:syncronis aQ(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相优化为:以0.1 mol·L-1醋酸钠溶液(用醋酸调pH至6.5)为流动相A,以乙腈为流动相B,以水为流动相C,进行梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:254 nm;进样量优化为:3 μL.结果:L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸分别在0.027～0.27 mg· mL-1 (r=0.9997)、0.058～0.58 mg·mL-1(r=0.9997)、0.029～0.29 mg·mL-1(r=0.9997)、0.035～0.35 mg·mL-1(r=0.9997)范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为99.8％(RSD％=1.36％)、98.8％(RSD％=2.42％)、102.0％(RSD％=2.26％)、98.0％(RSD％=1.48％).结论:该方法准确、灵敏、重复性好,更适于阿胶的质量控制.
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林蛙皮中胶原蛋白的含量测定研究
目的 扩大中国林蛙应用范围,增加其自身经济价值.建立林蛙皮中胶原蛋白的含量测定方法,并考察其中的胶原蛋白含量.方法 应用Worssner比色法测定中国林蛙皮水解液中的L-羟脯氨酸的含量,计算出中国林蛙皮中胶原蛋白的含量.结果 中国林蛙皮中L-羟脯氨酸的含量为37.7 mg/g,胶原蛋白在林蛙皮中百分比为37.86％.结论Worssner比色法稳定、有效,可用于测定中国林蛙皮中胶原蛋白的含量测定.林蛙皮中胶原蛋白含量极高,可以作为新的提取来源.
关键词： 中国林蛙 林蛙皮 Worssner比色法 L-羟脯氨酸 胶原蛋白 -
不同年份阿胶中5种成分的同时测定
目的 同时测定不同年份阿胶中挥发性碱性物质、L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸对照品、L-脯氨酸的含有量.方法 阿胶水溶液的分析采用Titank C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,3μL);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长为254 nm;柱温为43℃.结果 不同年限熬制的阿胶,其氨基酸含有量没有显著差异;挥发性碱性物质随着时间的增加缓慢下降,到了第5年时阿胶中挥发性碱性物质下降程度超过50％.结论 挥发性性碱性物质是评价阿胶品质的一个重要指标,挥发性碱性物质含有量越低,阿胶的品质越好.
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HPLC法同时测定阿胶强骨口服液中4种氨基酸
目的 建立HPLC法同时测定阿胶强骨口服液(阿胶、黄芪、熟地等)中4种氨基酸的含有量.方法 该药物0.1 mol/L盐酸提取液的分析采用Welch XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长254 nm;柱温43℃.结果 L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸分别在0.8～80 μg/mL(r=0.999 9)、1.6～160 μg/mL (r=0.999 8)、0.7～70 μg/mL(r=0.999 8)、1.2 ～ 120 μg/mL(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为100.2％、99.7％、100.1％、100.5％,RSD分别为1.6％、1.5％、1.3％、1.5％.结论 该方法灵敏准确,重复性和稳定性良好,可用于阿胶强骨口服液的质量控制.
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L-羟脯氨酸用于减肥的实验研究
L-羟脯氨酸(L-Hydroxyproline,L-HYP)是一种具有独特生理活性的氨基酸,1902年由Fischer 首先自白明胶中获得,化学式C5H9NO3,分子量131.13,白色粉末,无毒无臭略带甜味,易溶于水.L-羟脯氨酸是人体胶原蛋白的组成成分,也是肝和胆囊的成分,具有多种重要的生理功能与独特的生物活性[1].L-HYP可用作抗氧化、防腐和保鲜剂,用作许多药物(如抗生素、抗肿瘤、降压药及新型胃药等)的合成原料,用作饮料和化妆品添加剂等[2].动物脂肪中羟脯氨酸含量和脂肪细胞的分裂能力与生长能力有关,羟脯氨酸含量越高,脂肪细胞的分裂能力越强[3].L-HYP还具有增进肝细胞生长和促进糖原合成的作用,本文用L-HYP和常用减肥药安非拉酮对营养性肥胖大鼠的减肥效果进行了对比试验,并用昆明种小鼠对L-HYP的毒性进行了实验.
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柱前衍生-反相高效液相色谱法测定乳及乳制品中的L-羟脯氨酸
目的:建立柱前衍生-反相高效液相色潜法测定乳及乳制品中L -羟脯氨酸含量.方法:乳及乳制品中蛋白质经酸水解后,用2,4二硝基氟苯对L -羟脯氨酸进行衍生,采用250 mm×4.6 mm,5μm DiamonsilAAA分析柱进行分离,检测波长360 nm,流动相为0.02 mol/L磷酸氢二钠与磷酸二氢盐缓冲液、乙腈、甲醇,流速1.0 ml/mim,采用梯度洗脱.结果:L-羟脯氨酸的浓度与峰面积成良好的线性关系,相关系数r为0.9994,回收率在94.0％～97.4％之间,样品的测定结果良好.结论:本方法测定乳及乳制品中L -羟脯氨酸灵敏度较高,干扰因素少,结果稳定、准确,适合乳及乳制品中L-羟脯氨酸的测定.
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附子对L-甲状腺素诱发心肌肥厚大鼠心肌和主动脉血管细胞外基质的影响
目的:探讨附子对甲状腺素大鼠主动脉血管细胞外基质的影响.方法:按Woessn方法测定大鼠心肌和主动脉组织中羟脯氨酸含量,用酶谱分析半定量法分析MMP2活性.结果:①模型组大鼠心肌和主动脉胶原含量与正常对照组比较均明显升高(P<0.05);附子给药组和粉防己碱给药组与模型组相比明显降低(P<0.05),与正常对照组比较没有显著差异(P>0.05);②模型组主动脉MMP2活性与正常对照组相比明显下降(P<0.05);附子给药组、粉防己碱给药组与模型组比较MMP2活性略有上升,但差异无统计学意义(P>0.05),仍然不能恢复到正常水平;而心肌中MMP2条带较弱以至于不能分析.结论:附子抑制胶原合成但不能改变该模型大鼠主动脉血管MMP2活性,说明附子预防心血管肥厚的机制与抑制其胶原合成有关.
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一测多评法测定阿胶中4种氨基酸的含量
目的:建立一测多评法同时测定阿胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的含量.方法:以阿胶中主要成分甘氨酸为内参物,建立其与L-羟脯氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸间的相对校正因子,并用该校正因子计算3种氨基酸的含量.将一测多评法与外标法所得数值进行比较.结果:对于阿胶中4种氨基酸成分,一测多评法的计算值与外标法实测值之间无显著性差异.结论:该研究建立的同时测定阿胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4种氨基酸含量的一测多评法结果准确可靠,可用于阿胶的质量控制.
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柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量
目的:建立测定胶类药材中L-羟脯氨酸(L-Hyp)和胶原蛋白含量的方法,并比较对照药材与市售药材中两种成分的含量.方法:采用柱前衍生化法进行前处理,并采用高效液相色谱法测定样品中L-Hyp的含量:色谱柱为KromasilC18,流动相为[乙腈-0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(pH 6.5,7∶93,V/V)]-[乙腈-水(4∶1,V/V)](梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为43℃,进样量为20 tL;再通过折算系数计算样品中胶原蛋白的含量.结果:L-Hyp检测质量浓度线性范围为2.5～40 μg/mL(r=0.999 9);定量限为0.20 μg/mL,检测限为0.05 μg/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜4.0％;加样回收率为96.03％～102.07％(RSD=2.20％,n=9).28批市售药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量有一定差异,其中13批市售阿胶药材与阿胶对照药材中两种成分的含量较为接近,而5批龟甲胶和7批鹿角胶药材中两种成分的含量高于其对照药材.结论:该方法准确、可靠,适用于测定胶类药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量.
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水产胶原肽对小鼠营养性肥胖的预防作用
目的:研究水产胶原肽对小鼠营养性肥胖的预防作用.方法:采用高脂饮食建立小鼠肥胖模型.胶原灌胃,以小鼠体重、脂/体比为指标,观察水产胶原肽的预防肥胖作用,同时检测肝肾功能:血清谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、尿素氮(Urea nitrogen,BUN)并作病理检测,了解水产胶原肽对肝肾的影响.结果:水产胶原肽可以明显减少小鼠因高脂饮食导致的体重增加.结论:水产胶原肽对小鼠营养性肥胖的预防作用显著,对肝肾无损害并能减轻有害物对肝细胞的损伤.
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鹿角胶中4个主要氨基酸的测定研究
目的:研究建立鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4个氨基酸的分析和测定方法.方法:样品以6 mol·L-1盐酸于沸水浴水解1h,蒸干,甲醇溶解,以苯酚-0.5％硼砂溶液(4:1)为展开剂,硅胶G为固定相,茚三酮试液为显色剂进行TLC分析.样品以6mol·L-1盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析.采用Phenomenex C18色谱柱(4.6nn ×250 mm,5 μμm),柱温为43C;流动相A为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(7:93),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1；检测波长为254 nm进行HPLC测定分析.结果:TLC能较好地鉴别出鹿角胶中的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸.HPLC测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的线性范围分别为0.02 ～0.34 μg(r=1.000),0.04～0.71 μg(r=1.000),0.02 ～0.30 μg(r =0.9998),0.02～0.37 μg(r＝1.000)；加样回收率(n=6)分别为99.5％ (RSD=2.3％),97.8％( RSD=1.6％),100.8％ (RSD=1.6％),97.9％ (RSD=2.4％).结论:该方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于鹿角胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的检测.
