首页 > 文献资料
-
UPLC-ESI-QTOF-MS检测巴西龟龟甲胶中牛皮特征肽的研究
目的:以巴西龟为来源的龟甲胶中牛皮特征肽成分的检测.方法:采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法分别对以巴西龟为来源的龟甲胶和以中华草龟为来源的龟甲胶进行测定,选定牛皮特征肽离子m/z 604.8、m/z 641.3、m/z 790.8作为检测对象.结果:巴西龟来源的龟甲胶中只检测出牛皮特征肽离子m/z 641.3信号,其MS/MS裂解规律与黄明胶标准品酶解产物所含牛皮特征肽GEAGPSGPAGPTGAR一致,而中华草龟来源的龟甲胶中均未检测出牛皮特征肽信号.结论:该方法专属性强,灵敏度高,可区别巴西龟龟甲胶和掺杂牛皮成分的龟甲胶,可用于龟甲胶的质量控制.
-
基于UPLC-ESI-QTOF-MS/MS技术检测龟甲胶中新阿胶成分
目的:检测龟甲胶中新阿胶特征肽成分.方法:采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法(UPLC-ESI-QTOF-MS/MS)对龟甲胶样品进行测定,选定新阿胶特征肽离子m/z925.4作为检测离子.结果:龟甲胶特征成分含量偏低的样品(但不合有牛皮元和驴皮元特征肽成分)中检测出新阿胶特征肽离子m/z 925.4信号,其MS/MS裂解规律与文献报道一致,而龟甲胶标准品中未检测出该特征肽信号.结论:该方法专属性强、灵敏度高,可检测出龟甲胶中是否掺杂新阿胶成分,可用于龟甲胶的质量控制.
关键词： UPLC-ESI-QTOF-MS/MS 新阿胶 龟甲胶 肽段 -
HPLC测定左归颗粒中熊果酸和齐墩果酸含量
左归颗粒的处方来源于明代张景岳<景岳全书>卷五十一*新方八阵.由熟地黄、山药、山茱萸、枸杞子、牛膝、鹿角胶、龟甲胶、菟丝子8味中药组成,具滋肾补阴功能,用于治真阴不足,精髓亏损所致的头目眩晕,腰酸腿软,脉细等证.关于左归颗粒的质量控制方面的内容文献尚无报道.本研究采用HPLC对方中山茱萸所含熊果酸和齐墩果酸同时进行定量测定,为该产品提供一种简便,快速的质量控制方法.
-
龟甲胶、鹿角胶调控MKK基因表达促进豚鼠OA软骨细胞增殖的研究
目的 通过观察龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞增殖及其丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)基因表达的影响,探讨龟甲胶、鹿角胶对膝骨关节炎的治疗机制.方法 采用Ⅱ型胶原酶消化法获取3月龄豚鼠膝关节软骨细胞,建立体外培养系,将龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组、对照组4组含药血清分别对其进行干预,采用MTT法检测含药血清干预后软骨细胞增殖情况,荧光定量PCR检测含药血清干预对软骨细胞MKK基因表达的影响.结果 5％含药血清干预72 h后,软骨细胞的MTT的检测结果为龟甲胶组(0.315±0.048)、鹿角胶组(0.236±0.029)、盐酸氨基葡萄糖组(0.190±0.022)、对照组(0.146±0.023),差异有统计学意义(P＜0.05);荧光定量PCR检测MKK表达量结果为龟甲胶(3.287±0.675)、鹿角胶(2.147±0.204)、盐酸氨基葡萄糖组(1.137 ±0.123)及对照组(0.627±0.102),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 龟甲胶、鹿角胶对软骨细胞的促增殖作用强于盐酸氨基葡萄糖,这一作用可能与其能有效上调关节软骨细胞MKK的基因表达有关.
-
高效液相色谱-质谱联用技术测定妇科止带片中龟甲胶成分
目的:建立妇科止带片中龟甲胶成分的检测方法.方法:利用超高效液相色谱-质谱联用技术对妇科止带片中龟甲胶的特征分子离子峰进行检测,选择龟甲胶特征分子离子峰m/z 631.3(双电荷)→546.4和m/z 631.3(双电荷)→921.4作为检测离子对,离子化模式为ESI+,进行多反应监测.结果:36批市售样品中均可检出龟甲胶的特征分子离子峰.结论:经方法学验证,所建方法专属性强,可用于妇科止带片中龟甲胶成分的检测,为妇科止带片的质量控制提供参考.
关键词： 高效液相色谱-质谱联用 妇科止带片 龟甲胶 特征分子离子峰 -
超高效液相色谱-三重四极杆质谱法用于中成药中胶类成分的检测研究
目的 建立含中成药中胶类药材的检测方法.方法 采用胰蛋白酶对中成药样品酶解处理,利用超高效液相-三重四极杆质谱(RRLC-QQQ)对处方中阿胶、黄明胶、龟甲胶、鹿角胶的专属性特征离子进行检测.结果 方法的专属性、精密度和灵敏度均符合分析检测的技术要求.部分样品检测到了处方中规定的胶类药材成分,有的样品未检测到处方规定的胶类药材成分,而检出了处方中不应有的其他胶类成分.结论 所建立的方法经方法学验证,专属性强,为含胶类药材的中成药的质量控制及标准研究提供了参考.
-
基于液质联用法同时检测龟甲胶饮片中牛皮源、驴皮源及龟甲胶成分
目的:建立龟甲胶饮片中牛皮源、驴皮源及龟甲胶成分同时检测方法.方法:采用胰蛋白酶对龟甲胶样品酶解处理,利用超高效液相色谱-串联质谱联用技术(UPLC-MS/MS)对样品中龟甲胶、黄明胶、阿胶的特征肽离子对进行检测.结果:龟甲胶、黄明胶、阿胶3种对照药材在所建方法下保留时间为3～8 min,无基质干扰,检测限分别为0.5,2.0,1.0 mg/L,且重复性好,用于18批市售龟甲胶饮片的检测分析.结论:所建方法专属性强、灵敏度高,实现了龟甲胶饮片中主成分鉴别与非法添加成分检查的同时检测,提高检验效率,可有效控制龟甲胶质量.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱 龟甲胶 牛皮源成分 驴皮源成分 -
市售龟甲胶质量分析研究
目的 分析市售龟甲胶质量状况,研究建立龟甲胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4个氨基酸的定性和定量分析方法.方法 样品以6 mol.L-1盐酸于沸水浴水解1h,蒸干,甲醇溶解,以苯酚0.5％硼砂溶液(4:1)为展开剂,硅胶G为固定相,茚三酮试液为显色剂进行TLC分析；样品以6 mol·L-1盐酸于150℃水解1h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析,采用Phenomenex Luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温为43℃；流动相A为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(7:93),流动相B为乙腈-水(4:1),梯度洗脱,流速为1.0 mL· min-1；检测波长为254 nm,进行HPLC测定分析.应用等离子发射光谱仪对市售龟甲胶样品进行铅、镉、砷、汞、铜和铬元素的测定分析.结果 TLC能较好地鉴别出龟甲胶中的L羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸.HPLC测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的线性范围分别为0.01727～0.3454 μg(r=1.0000),0.03536～0.7072 μg(r=1.0000),0.01508～0.3016 μg (r=0.9998),0.01868～0.3736 μg(r=1.0000)；加样回收率(n=6)分别为97.0％(RSD=2.4％),97.3％(RSD=1.8％),94.7％(RSD=2.2％),96.8％(RSD=1.9％).测定样品中铅、镉、砷、汞、铜和铬元素的含量,发现部分样品铬元素含量较高.结论 所建立的L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸和L-脯氨酸的定性和定量方法准确、可靠,具有良好的重复性和稳定性,可用于龟甲胶中这4种氨基酸的检测.市售龟甲胶样品中铬元素含量普遍较高,应加强对该元素的检测控制.
-
采用电感耦合等离子质谱法检测龟甲及龟甲胶药材中重金属元素的含量
目的 检测龟甲及龟甲胶药材中重金属元素的含量,对重金属元素污染情况进行考察和研究.方法 采用电感耦合等离子质谱法(ICP-MS)对市售42批龟甲及混伪品、16批龟甲胶药材进行6种重金属元素(铬、砷、镉、汞、铅、铜)的检测.结果 龟甲及混伪品中重金属元素含量平均值从高到低依次为铜(21.96μg/g)、铬(1.70μg/g)、铅(1.28μg/g)、砷(0.29μg/g)、汞(0.15μg/g)、镉(0.09μg/g).龟甲胶中重金属含量平均值从高到低依次为铜(1.90μg/g)、铬(0.83μg/g)、铅(0.19μg/g)、砷(0.07μg/g)、汞(0.02μg/g)、镉(0.004μg/g).其中铬和铅元素超过国家限量标准现象比较明显.结论 龟甲和龟甲胶药材中重金属含量分布存在一定规律.龟甲胶中的重金属含量明显低于龟甲药材.ICP-MS可以对龟甲及龟甲胶药材进行质量控制和质量评价.
-
正交试验优选阿胶、龟甲胶、鹿角胶的微波炮制胶珠工艺的研究
目的 优选微波炮制阿胶、龟甲胶、鹿角胶胶珠的工艺参数.规范胶类药材制珠工艺,提高并稳定胶珠质量.方法 用多项指标评价胶珠质量,采用L_4(2~3)正交优选法对炮制胶珠工艺参数进行筛选.结果 获得了阿胶、龟甲胶、鹿角胶优化的炮制胶珠工艺参数.结论 不同种类的胶材或不同批号、不同生产厂家的同类胶材都有其适的工艺参数,可用正交试验优选法快速筛选.
-
应用热分析鉴定阿胶、龟甲胶、鹿角胶临床研究
目的:通过热分析的方法,对阿胶、龟甲胶、鹿角胶进行鉴别.方法:选取本院2012年1月-2013年12月的患者共78例,作为阿胶、龟甲胶、鹿角胶3种药材的研究资料.选取阿胶、龟甲胶、鹿角胶样品6 mg,将这3种样品加热、研磨粉碎后再放入同步热分析仅样品室中进行热分析鉴定,对每种样品测试3次,将原始数据取平均值后绘制3种样品的DTG、DTA数据分析表格.记录此方法对3种样品鉴定结果的成功率并与感官鉴定法、水试法、圆二色谱鉴定法的成功率进行对比分析.结果:3种样品的DTC曲线的峰值顶点温度和特征值个数与温度的数据对比,差异具有统计学意义(P＜0.05);3种样品的DTA曲线的凹陷处温度、凸起处温度数据和两者总个数对比,差异具有统计学意义(P＜0.05);热分析鉴定法和其他3种鉴定方法的成功率对比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:热分析法能够快速准确地鉴定区分阿胶、龟甲胶、鹿角胶3种药材,且信息直观简单,成功率高,能够在中药材的鉴定中推广使用.
-
益血生抗贫血作用的实验研究
益血生是由阿胶、龟甲胶、鹿角胶、鹿茸、鹿血等名贵中药组成,经现代科学方法精制而成的复方胶囊剂,具有健脾益气、滋肾填精、补血之功能,临床上用于治疗多种血虚证取得了较好的疗效.我们对其药理作用进行了实验研究,现将结果报道如下.
-
3种胶类中药在加工过程中的动态变化
目的 探讨3种胶类驴皮、龟甲、鹿角在加工成中药的过程中蛋白质的动态变化规律.方法 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分别对3种胶类原有蛋白质组成进行分析,按照《中国药典》规定的方法加工成阿胶、龟甲胶和鹿角胶,并分析在不同煎煮时间收集的煎出液以及终产品中的蛋白质组成,后通过比较电泳图谱分析蛋白质在加工过程中的动态变化规律.结果 驴皮、龟甲、鹿角中含有丰富的蛋白质类化学成分,在10 ～250 kDa区间均有分布;随着煎煮时间的延长以及辅料的加入,蛋白质在泳道中逐渐呈现弥散现象.此外,阿胶和鹿角胶中蛋白质的相对分子质量介于15～250 kDa,甚至更高,而龟甲胶则基本上小于50 kDa,分布区域有明显不同.结论 该技术可用于考察胶类中药加工过程的规范程度,对胶类中药的质量控制有一定的参考价值.
-
HPLC测定强精宝口服液中淫羊藿甙的含量
强精宝口服液是由黄芪、人参、枸杞子、淫羊藿、巴戟天、韭菜籽、鹿肾、黄狗肾、驴肾、鹿茸、龟甲胶等十几味天然药物精制而成.具有补肾壮阳、益气填精补髓、强筋壮骨等功效,用于强健身体,补肾壮阳、腰膝酸痛乏力.原质量标准中无定量指标,本文采用RP-HPLC,用外标峰面积法测定该制剂中有效成份淫羊藿甙的含量,结果表明,本法可作为监测和控制该制剂质量指标的手段.
-
龟甲胶滋阴功效及对甲亢阴虚证的研究进展
甲状腺功能亢进症是常见的、多发的内分泌疾病,其主要的中医证型为阴虚证.甲亢的现有临床用药主要为硫脲类药物,但其副作用明显,龟甲胶干预治疗甲状腺功能亢进症不仅可以减轻西药所导致的不良反应,改善中医症候,还在提高机体免疫力、改善甲亢患者的内分泌、血液系统及骨质方面具有显著效果.笔者通过查阅文献,对龟甲胶的滋阴作用以及它对甲亢阴虚证的治疗概况作出综述.
-
不同季节、部位龟甲的龟甲胶提取率与含氮量测定研究
龟甲为龟科动物乌龟Chinemys reevesii (Gray)的背甲及腹甲.龟甲胶为龟甲经水煎煮、浓缩制成的固体胶.对同一产地不同季节的龟甲进行水煎提取,得到龟甲胶,测定含氮量,考察不同季节龟甲对出胶率与含氮量的影响,对背甲与腹甲分别煎煮,考察二者的出胶率与含氮量.
-
海螵蛸与龟甲胶对果蝇繁殖力影响的对比研究
目的 对比研究海螵蛸与龟甲胶对果蝇繁殖力的影响,以探究其补益功效.方法 将药材提取液添加至培养基中饲养果蝇,记录果蝇产生F1代和F2代数量.结果 与对照组相比,海螵蛸和龟甲胶均显著增加果蝇F1代和F2代数量(P＜0.01),在浓度为0.02 g· L-1、0.04 g·L-1、0.08 g· L-1的三组试验中,海螵蛸F1代数量分别增殖了167.28％、178.89％、121.64％,F2代分别增长125.13％、140.86％、69.79％;龟甲胶F1代分别增殖了33.25％、97.60％、79.15％,F2代分别增殖148.48％、193.65％、150.25％.结论 海螵蛸和龟甲胶均能显著提高果蝇的繁殖力,二者对果蝇F1代和F2代成虫数量影响趋势相似.
-
龟甲胶药理作用研究进展
综述近15 a龟甲胶药理研究相关文献，经归纳分析，龟甲胶为补益类保健药品。能调节机体功能，激发机体自身调节的机制，增强自身稳定状态；能纠正甲亢阴虚动物模型全身各系统的病理、生理变化，为临床使用提供了药理依据。阴虚体质的老年人常服龟甲胶可延年益寿；阴虚阳亢的肺痨患者服用龟甲胶有益于康复。
-
龟甲胶和鹿角胶含药血清对豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38MAPK基因表达的影响
目的:通过实验观察龟甲胶、鹿角胶合药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞促增殖作用以及两种含药血清对JNK及p38 MAPK基因表达的影响,揭示龟甲胶及鹿角胶治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:分别用龟甲胶、鹿角胶、盐酸氨基葡萄糖(GHC)含药血清及生理盐水对3月龄豚鼠骨关节炎软骨细胞进行干预,MTT法比较含药血清对软骨细胞的促增殖情况,QPCR检测含药血清干预后软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达情况.结果:用含药血清浓度为5％的各组培养液干预后(时间72 h),龟甲胶组、鹿角胶组、氨基葡萄糖组和空白对照组MTT法检测OD值分别为0.468±0.017,0.425±0.010,0.337±0.017,0.276±0.027,结果显示差异有统计学意义(P＜0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组JNK mRNA相对表达量分别为0.162±0.096,0.333±0.165,0.653±0.141,1.000±0.000,差异有统计学意义(P＜0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组p38 MAPK mRNA相对表达量分别为0.058±0.025,0.229±0.057,0.441±0.090,1.000±0.000,结果显示差异有统计学意义(P＜0.05).结论:龟甲胶和鹿角胶都能有效减少豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达,对软骨细胞作用为促增殖,对其凋亡产生抑制作用,从而一定程度上减缓骨关节炎的病损进展.
-
龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠骨关节炎软骨细胞MKK表达的影响
目的:通过观察龟甲胶、鹿角胶合药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞增殖及其丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)表达的影响,阐释龟甲胶、鹿角胶对膝骨关节炎的治疗作用.方法:将龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组、对照组4组合药血清分别对3月龄豚鼠膝关节软骨细胞进行干预,采用MTT法检测含药血清干预后软骨细胞增殖情况,SABC免疫组化检测含药血清干预后软骨细胞MKK的表达.结果:5％含药血清干预72 h后,软骨细胞的MTT检测结果为:龟甲胶组OD值为0.648±0.09,鹿角胶组为0.442±0.047,盐酸氨基葡萄糖组为0.353±0.053;对照组为0.236±0.050,差异有统计学意义(P＜0.05).MKK的SABC免疫组化检测OD值为:龟甲胶组0.330±0.018,鹿角胶组0.274±0.020,盐酸氨基葡萄糖组0.223±0.041,对照组0.171±0.041,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:1)豚鼠骨关节炎软骨细胞增殖与MKK的表达一致增长;2)龟甲胶、鹿角胶能有效上调关节软骨细胞MKK的表达,促进软骨细胞增殖,从而修复受损软骨,延缓骨关节炎进程.
