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脂多糖诱导的急性肾损伤小鼠模型肾脏中JNK信号通路的激活
目的 探讨JNK信号通路激活在脂多糖(LPS)诱导的急性肾损伤(AKI)发病中的作用.方法 48只小鼠随机分为对照组和AKI组,分别检测血清尿素氮、肌酐以及胱抑素C,HE染色观察肾组织病理改变,免疫组化、West-ern blot检测肾组织p-JNK和p-c-Jun蛋白表达部位及强度,ELISA检测血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素1β(IL-1β)水平.结果 小鼠腹腔注射LPS后,血清尿素氮、肌酐、胱抑素C均较对照组均明显升高,肾组织病理损伤呈进行性加重.正常小鼠各时间点可见p-JNK和p-c-Jun在肾小管、肾小球系膜区有微量表达.AKI组小鼠p-JNK及p-c-Jun在肾小管等部位大量表达.与对照组相比,AKI组p-JNK和p-c-Jun蛋白水平在1h后即开始升高,以造模4h时增高明显,30 h时逐渐下降.与之相应,血中TNF-α和IL-1β水平亦明显升高,于4h达峰值后逐渐下降.结论 JNK信号通路激活在LPS诱导的AKI发病中起重要作用,JNK信号通路活化后可诱发TNF-α和IL-1 β等炎性因子的表达,继而介导AKI的发生和发展.
关键词： 脂多糖 急性肾损伤 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 信号通路 -
脑缺血预适应大鼠脑内c-Jun氨基末端激酶磷酸化水平和蛋白表达量的改变
目的 初步探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在大鼠脑缺血预适应中(IPC)的作用.方法 将大鼠随机分为正常对照(control)、假手术(SI)、缺血预适应或缺血耐受(IT)、单纯蜜蜂毒(BV)、外周伤害耐受(PNT)5组.应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助Gel Doc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测大脑躯体感觉皮层、海马组织内JNK的磷酸化水平和蛋白表达量的变化.结果 IPC大鼠大脑躯体感觉皮层内JNK46KD的磷酸化水平(激活程度)增高(P＜0.05),JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的磷酸化水平无明显变化.IPC大鼠躯体感觉皮层JNK46KD蛋白表达量回落(P＜0.05),JNK54KD及海马组织内JNK46KD和JNK54KD的蛋白表达量均无明显变化.结论 大鼠躯体感觉皮层内JNK 46 kDa磷酸化水平的增高及其蛋白表达量的回落可能参与了脑缺血预适应的形成.
关键词： 脑缺血预适应 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 磷酸化 蛋白表达 -
结膜松弛症手术切除标本中几种激酶的检测
目的 动态观察不同严重程度结膜松弛症手术切除标本中细胞外调节蛋白激酶(ERK)、c-jun氨基末端激酶(JNK)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)活性的表达变化情况.方法 收集结膜松弛症30例手术切除标本,其中Ⅱ级组10例,Ⅲ级组12例,Ⅳ级组8例;另正常对照组结膜组织10例.采用免疫组化方法检测结膜松弛症组及正常组中ERK、JNK及P38MAPK蛋白的表达情况,同时对结膜形态进行分析.结果 正常组ERK平均灰密度值为27.25±6.43,结膜松弛症组ERK平均灰密度值为62.68±15.92,两组之间差异有统计学意义(F=93.287,P＜0.01);正常组JNK平均灰密度值为9.65±1.53,结膜松弛症组JNK平均灰密度值为11.95土1.38,两组之间差异有统计学意义(F=39.322,P＜0.01)正常组P38MAPK平均灰密度值为27.35±12.72,结膜松弛症组P38MAPK平均灰密度值为61.48 ±20.24,两组之间差异有统计学意义(F =50.003,P＜0.01),结膜松弛症组间多重比较发现3种蛋白平均灰密度值在Ⅱ级组与Ⅲ级组之间差异无统计学意义(P＞0.05),而在Ⅱ级组与Ⅳ级组及Ⅲ级组与Ⅳ级组间差异均有显著性意义(P＜0.01).提示随着结膜松弛程度增加,而MAPK通路的活性增强.结论 结膜松弛症随程度加重结膜中ERK、JNK及P38MAPK蛋白表达明显增强,提示MAPK信号通路参与了结膜松弛症的发展过程.
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氨基末端激酶信号通路在细跑凋亡中的作用
目的观察维生素E琥珀酸酯(VES)和维生素E(VE)对人B细胞白血病细胞株(Raji)的诱导凋亡作用及c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在VES诱导细胞凋亡中的作用.方法应用流式细胞仪、免疫印迹法(Western blot)等技术方法,体外观察VES和VE对Raji细胞的作用.结果VES和VE对Raji细胞均有程度不一的诱导凋亡作用,VES处理后6 h,在DNA直方图上G1峰前出现一个明显的凋亡峰,并随着VES作用时间延长而增强,具有时间效应关系,而VE诱导凋亡的作用则相对较弱,同时VES作用后,细胞内磷酸化型JNK蛋白于6 h开始增高,12 h达到高峰,并持续24 h,而非磷酸化型JNK蛋白表达无显著变化.结论VES是JNK的激活因子,JNK信号通路的激活在VES诱导肿瘤细胞凋亡的过程中发挥重要作用.
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c-jun氨基末端激酶在胃癌组织中的表达
目的 研究c-jun氨基末端激酶(JNK)对胃癌细胞的促凋亡作用.方法 采用免疫组化S-P法检测62位患者的胃癌手术石蜡标本中JNK的亚组(jnkl,jnk2)及其下游表达产物c-jun的表达,并对结果 进行统计学分析.结果 高分化胃癌中的jnkl,jnk2及c-jun含量显著高于低分化的胃癌组织并且与淋巴结转移密切相关,三者均与年龄、性别、肿块大小及PTNM分期无关.结论 JNK促进胃癌细胞的凋亡,抑制胃癌细胞的淋巴结转移.
关键词： c-Jun氨基末端激酶(JNK) 胃癌组织 免疫组化S-P法 -
c-Jun氨基末端激酶在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及机制
目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在大鼠脑缺血再灌注(CIR)损伤中的作用.方法 构建CIR大鼠模型,同时在大鼠脑侧室给予JNK抑制剂-SP600125抑制JNK的激活.采用5分制对造模后的大鼠行为学评分,用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色分析大鼠CIR后脑梗死体积.原位末端标记(TUNEL)法检测大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况,Western印迹检测大鼠脑组织中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bax、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(酶切-caspase)3、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、JNK蛋白表达水平.结果 模型组CIR损伤后3、24、72 h行为学评分均明显高于假手术组(P<0.01),说明成功构建了大鼠CIR模型.实验组CIR损伤后3、24、72 h行为学评分均明显低于模型组(P<0.01).脑梗死再灌注后3、24和72 h模型组大鼠脑组织中脑梗死体积、细胞凋亡率均明显高于假手术组,实验组均明显低于模型组(均P<0.01).模型组脑组织中Bax、酶切-caspase3蛋白表达水平均明显高于假手术组,Bcl-2蛋白表达水平明显低于假手术组(P<0.01).实验组中Bax、酶切-caspase3蛋白表达水平均明显低于模型组,Bcl-2蛋白表达水平明显高于模型组(均P<0.01).实验组JNK的表达水平低于模型组(P<0.01).模型组大鼠脑组织中IL-1β、TNF-α水平均明显高于假手术组,实验组均明显低于模型组(均P<0.01).结论 抑制JNK激活可以减轻大鼠CIR损伤,作用机制可能与Bcl-2、Bax、酶切-caspase3表达有关.
关键词： 脑缺血再灌注 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 脑梗死体积 细胞凋亡 -
基于JNK信号通路探究半胱氨酸在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用
目的:通过体外细胞实验,研究半胱氨酸(cysteine,CYS)加剧棕榈酸(palmitate,PAL)诱导肝细胞死亡的作用机制.方法:以人肝细胞株HepG2为细胞模型,采用LDH、MTF技术以及Hoechst染色法检测细胞增殖活性,通过酶化学方法检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,应用DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,利用Western blot技术检测细胞内质网应激相关蛋白C/EBP同源转录因子(C/EBPhomologous transcription factor,CHOP),GRP-78以及磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)的表达量.结果:(1) PAL可以显著抑制HepG2细胞的增殖活性.(2) PAL提高HepG2细胞内的GSH水平,但不影响MDA和ROS水平.(3) CYS显著加剧PAL诱导肝细胞死亡的作用.(4) CYS/PAL协同作用不影响细胞内MDA和ROS水平.(5) CYS/PAL协同作用可显著提高肝细胞内质网应激相关蛋白GRP-78、CHOP和p-JNK的表达.(6)抑制JNK通路可抑制PAL诱导的细胞死亡.结论:CYS通过激活JNK通路导致内质网应激加强,从而加剧PAL诱导细胞死亡,参与NASH发病机制.
关键词： 半胱氨酸 棕榈酸 内质网应激 肝细胞 c-Jun氨基末端激酶(JNK) -
龟甲胶和鹿角胶含药血清对豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38MAPK基因表达的影响
目的:通过实验观察龟甲胶、鹿角胶合药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞促增殖作用以及两种含药血清对JNK及p38 MAPK基因表达的影响,揭示龟甲胶及鹿角胶治疗膝骨关节炎的作用机制.方法:分别用龟甲胶、鹿角胶、盐酸氨基葡萄糖(GHC)含药血清及生理盐水对3月龄豚鼠骨关节炎软骨细胞进行干预,MTT法比较含药血清对软骨细胞的促增殖情况,QPCR检测含药血清干预后软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达情况.结果:用含药血清浓度为5％的各组培养液干预后(时间72 h),龟甲胶组、鹿角胶组、氨基葡萄糖组和空白对照组MTT法检测OD值分别为0.468±0.017,0.425±0.010,0.337±0.017,0.276±0.027,结果显示差异有统计学意义(P＜0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组JNK mRNA相对表达量分别为0.162±0.096,0.333±0.165,0.653±0.141,1.000±0.000,差异有统计学意义(P＜0.05).QPCR检测龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组和空白对照组p38 MAPK mRNA相对表达量分别为0.058±0.025,0.229±0.057,0.441±0.090,1.000±0.000,结果显示差异有统计学意义(P＜0.05).结论:龟甲胶和鹿角胶都能有效减少豚鼠骨关节炎软骨细胞JNK及p38 MAPK基因的表达,对软骨细胞作用为促增殖,对其凋亡产生抑制作用,从而一定程度上减缓骨关节炎的病损进展.
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抑制JNK信号通路对致(癎)后海马神经元损伤的保护作用
目的:探讨抑制c-Jun氨基末端激酶通路(JNK)对减轻癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马神经元损伤的作用和机制.方法:建立氯化锂-匹罗卡品SE模型,其中24只鼠为单纯模型组;另24只鼠为抑制组,即在注射氯化锂-匹罗卡品之前,预先用特异抑制剂SP600125作侧脑室注射.另用6只鼠作正常对照,不制模,用生理盐水代替氯化锂-匹罗卡品,用二甲基亚砜(DMSO)溶液代替SP6001250.3组都在不同时间点用免疫组化法检测海马CA1区磷酸化JNK(p-JNK)的表达,并将抑制组与模型组、对照组相比较,观察组织病理学改变.结果:正常对照组JNK极少活化;模型组在SE后30min时点JNK在海马神经元强烈激活,2h时达到高峰,6h后明显减少;抑制剂组JNK激活明显减少.模型组海马CA1区可见到神经元发生变性和坏死,抑制剂组这种变化则较轻.结论:SE后JNK信号转导(transduction)通路被激活,并可致发作后海马神经元损伤;抑制剂SP600125则抑制JNK信号转导通路,对海马神经元起一定保护作用.
关键词： c-Jun氨基末端激酶(JNK) SP600125 癫(癎) 海马 -
四川新康温石棉通过活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)通路诱导A549细胞凋亡
目的 研究活性氧/c-Jun氨基末端激酶(ROS/JNK)途径在四川新康温石棉诱导A549人肺上皮细胞凋亡过程的作用.方法 采用(12.5、25、50、100、200) μg/mL温石棉作用A549细胞24h,MTT法检测细胞存活率;设置ROS抑制组,异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡、JC-1标记检测线粒体膜电位、二氯二氢荧光黄乙酰乙酯(DCFH-DA)负载检测ROS水平,Western blot法检测磷酸化的c-JNK1(p-JNK1)、p-JNK2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)蛋白水平.结果 随着温石棉剂量增大,细胞存活率下降,温石棉半数抑制剂量为223.43 μg/mL;细胞凋亡率呈现剂量-效应关系,胞内ROS水平升高,p-JNK1、p-JNK2、c-caspase-3蛋白水平明显上调,线粒体膜电位降低;与相同剂量温石棉组比较,ROS抑制剂能显著抑制细胞凋亡,降低ROS水平,减少线粒体膜电位的降低程度,并下调p-JNK1、p-JNK2和c-caspase-3蛋白的表达.结论 四川新康温石棉可能通过ROS/JNK途径诱导A549细胞发生凋亡.
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过表达Bax抑制子1(BI-1)通过内质网IRE1-JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马神经元凋亡
目的 探讨慢病毒介导Bax抑制子1(BI-1)过表达对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马神经元保护作用以及与内质网膜蛋白肌醇酶1-c-Jun氨基末端激酶(IRE1-JNK)信号通路的关系.方法 制备BI-1过表达慢病毒并经侧脑注射,24h后采用血管内穿刺法建立SAH大鼠模型.于造模后24h,对大鼠进行神经行为学评估和脑含水量检测,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)观察大鼠海马神经元凋亡情况,Western blot法检测BI-1蛋白以及内质网应激标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和IRE1蛋白水平.采用IRE1 α特异性抑制剂KIRA6处理SAH后大鼠,Westem blot法检测BI-1过表达对IRE1-JNK信号通路相关蛋白磷酸化的IRE1(p-IRE1)、磷酸化的JNK(p-JNK)及凋亡相关蛋白Bax、Bcl2和caspme-3蛋白水平的影响.结果 过表达BI-1提高SAH模型大鼠的神经行为学评估得分,降低SAH模型大鼠的脑含水量和海马神经元凋亡率,并且BI-1过表达可以下调SAH后大鼠海马神经元中GRP78和IRE1蛋白水平.KIRA6处理和BI-1过表达均可抑制p-IRE1、p-JNK、Bax的表达和caspase-3的活化,促进Bcl2的表达.结论 过表达BI-1可通过阻断IRE1-JNK通路抑制SAH后大鼠海马神经元凋亡.
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DHA对糖尿病大鼠神经病理性痛和背根节JNK/CXCL1信号通路的影响
目的:研究DHA对糖尿病神经病理性痛大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,探讨DHA对糖尿病大鼠背根节JNK磷酸化和CXCL1水平及其受体表达的影响.方法:采用SD大鼠,随机分为对照组、对照+DHA组、糖尿病组和糖尿病+ DHA组.以链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病,DHA组给予DHA(200mg/kg体重)干预,对照组和糖尿病组给予玉米油(0.2 ml/kg体重).检测各组大鼠机械痛和热痛阈值,ELISA法、PCR法检测背根节中CXCL1含量,免疫荧光法检测CXCR2受体表达情况,Western Blot法检测背根节中JNK磷酸化水平.结果:糖尿病大鼠机械痛敏和热痛敏阈值下降,DHA可在一定程度上缓解大鼠痛反应.糖尿病大鼠背根节JNK磷酸化水平升高,CXCL1水平明显升高,CXCR2受体阳性神经元数量明显升高.DHA干预明显抑制JNK磷酸化水平和CXCR2的表达,降低CXCL1的含量.结论:DHA具有减轻糖尿病神经病理性痛大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,其机制可能与抑制背根节JNK磷酸化,降低炎性因子水平有关.
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JNK信号转导通路及其在组织损伤中的作用
丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是广泛表达的丝氨酸/酪氨酸激酶,在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用.MAPK有4个主要亚族:ERK、JNK、p38MAPK和ERK5.JNK信号转导通路是MAPK通路的一重要分支,它在细胞周期、生产、凋亡和细胞应激等多种生理和病理过程中起重要作用.本文就JNK的分型、分布、信号通路的组成及其在组织损伤中的作用进行综述,旨在为组织损伤程度和伤后时间推断的法医病理学研究提供参考资料.
关键词： 法医病理学 c-Jun氨基末端激酶(JNK) 信号转导通路 损伤
