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高血压对全脑缺血再灌注大鼠神经功能的影响及SP600125的干预作用
目的 探讨高血压对全脑缺血再灌注神经功能的影响及SP600125的干预作用.方法 将12周龄42只雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠随机分为对照组和WKY全脑缺血再灌注组(WKY+缺血再灌注组),同周龄46只雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分为高血压全脑缺血再灌注组(SHR+缺血再灌注组)、高血压全脑缺血再灌注加抑制剂组(抑制剂组).抑制剂组于缺血前30 min侧脑室注射c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125.应用四血管阻断法(Pulsinelli-4VO法)制备全脑缺血模型,脑缺血20 min分再灌注24、48 h两个时间点,电镜和光镜观察海马区神经细胞形态变化,再灌注48 h应用神经功能学检测表评价运动和感觉功能.结果 与WKY+缺血再灌注组对比,SHR+缺血再灌注组24、48h神经元细胞形态结构损伤随时间延长加重,神经元细胞存活密度降低(15.56±1.81比22.52±0.96,7.33±1.32比14.11±1.61,均P＜0.05).SHR+缺血再灌注组运动及感觉功能明显低于WKY+缺血再灌注组(4.79±0.93比7.79±0.72,4.42±0.72比6.42±0.65,均P＜0.05).与SHR+缺血再灌注组对比,抑制剂组24、48 h神经元细胞形态结构明显改善,细胞存活密度增加(24.11±1.62比15.56±1.81,17.89±1.54比7.33±1.32),抑制剂组运动及感觉功能均明显提高(6.54±0.83比4.79±0.93,5.54±0.66比4.42±0.72,均P＜0.05).结论 高血压加重脑缺血再灌注后神经功能的损伤,SP600125对高血压大鼠全脑缺血再灌注损伤有保护作用.
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sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响
目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号传导通路特异阻断剂sp600125对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)凋亡以及Caspase-3蛋白表达的影响.方法:不同浓度sp600125对乙醛刺激的大鼠HSC-T6进行处理后,MTT比色法检测细胞增殖,用Hoechst 33258染色来观察凋亡细胞的形态变化,FCM检测细胞凋亡率,SABC法检测Caspase-3蛋白表达.结果:不同浓度的sp600125能抑制HSC-T6增殖(F=102.53,P＜0.01),诱导HSC-T6凋亡;随着sp600125浓度增加,HSC-T6凋亡率逐渐增高(F=38.26,P＜0.01),HSC-T6细胞内Caspase-3蛋白阳性表达率也逐渐增高(F=38.26,P＜0.01).结论:不同浓度sp600125能抑制HSC-T6增殖,诱导HSC-T6凋亡,这可能与促进Caspase-3蛋白表达有关.
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白藜芦醇预先干预对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠足细胞内质网应激性凋亡的影响
目的 研究内质网应激及c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)所致肾小球足细胞损伤中的作用及白藜芦醇对其的保护机制.方法 小鼠足细胞诱导分化,随机分为对照组(C组)、高AngⅡ组、白藜芦醇干预(AngⅡ+Res)组、JNK通路特异抑制剂SP600125干预组,对照组采用RPMI 1640培养,AngⅡ浓度为10-8mol/L,白藜芦醇浓度为20μmol/L,SP600125浓度为20 μmol/L.作用48 h后,倒置显微镜下观察各组足细胞形态,并用流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blotting法分别测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和磷酸化JNK(p-JNK)mRNA及蛋白的表达.各组间数据比较采用t检验.结果 与对照组相比,AngⅡ组细胞凋亡率升高,GRP78 mRNA、p-JNK mRNA的表达增多(t=9.318、6.063、7.160,均P＜0.05),且GRP78蛋白、p-JNK蛋白的表达也上调(GRP78蛋白和p-JNK蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.116、5.085、5.117,均P＜0.05).与AngⅡ组相比,AngⅡ+Res干预组足细胞凋亡率降低,GRP78mRNA、蛋白表达减少(t=14.328、4.530、3.977,均P＜0.05),p-JNK mRNA、p-JNK蛋白的表达亦减少(mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=4.590、4.990、4.991,均P＜0.05).与AngⅡ组相比,SP600125干预组足细胞凋亡率降低(t=10.756,P＜0.05),p-JNK mRNA、蛋白的表达亦减少(mRNA和蛋白Ⅰ、Ⅱ条带t=5.408、4.901、4.886,均P＜0.05).结论 高AngⅡ可在体外诱导足细胞发生凋亡,通过了内质网应激途径,并由JNK通路引起细胞凋亡.白藜芦醇通过抑制内质网应激通路及JNK通路的激活抑制了足细胞的凋亡.
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蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞BAG3表达影响及其机制探讨
目的:探讨4种蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezome,BZ)、环氧甲酮四肽(epoxomycin,Epox)、乳孢素(lactacystin,Lacta)和MG132单独作用或者联合JNK特异性抑制剂SP600125,对肝癌HepG2细胞内BAG3蛋白表达的影响及分子机制.方法:空白对照、100 nmol/L BZ、100 nmol/L Epox、500 nmol/L Lacta和2μmol/L MG132单独或联合50 μmol/L SP600125处理HepG2细胞;实时定量RT-PCR检测蛋白酶体抑制剂对肝癌HepG2细胞内BAG3基因mR-NA表达水平影响,蛋白质印迹法检测蛋白酶体抑制剂单独或者联合JNK激酶特异性抑制剂对BAG3蛋白表达水平的影响;利用MTT试剂盒检测蛋白酶体抑制剂细胞存活率,Hoechest33258染色检测细胞凋亡率.结果:蛋白酶体抑制剂BZ、Epox、Lacta和MG132均不同程度上调BAG3基因的mRNA和蛋白表达水平,而SP600125显著抑制蛋白酶体抑制剂引起的BAG3表达上调.MTT结果显示,SP600125显著抑制HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性;进一步Hoechst33258染色结果显示,4种蛋白酶体抑制剂联合SP600125作用引起HepG2细胞的凋亡率分别为(49.2±3.2)％、(58.7±3.5)％、(56.8±3.4)％和(53.4±3.3)％,明显高于蛋白酶体抑制剂单独作用组的(7.2±2.8)％、(16.7±3.2)％、(12.3士2.9)％和(11.4±3.0)％,P＜0.05.结论:蛋白酶体抑制剂通过JNK信号通路上调BAG3的表达,抑制JNK活性增加了HepG2细胞对蛋白酶体抑制剂的敏感性.
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c-jun氨基末端激酶在UVA诱导人角质形成细胞IL-10表达中的作用
目的 探讨c-jun氨基末端激酶(JNK)是否介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达.方法 以2.4 J/cm2 UVA照射体外培养的2×104个/ml人角质形成细胞系(HaCaT)细胞,于照射后不同时点(0～48 h)收集细胞并应用免疫荧光法检测磷酸化、非磷酸化JNK的水平.以JNK抑制剂SP600125(终浓度为10μmol/L)预处理人角质形成细胞,收集UVA照射后各时点(0～48 h)的细胞及培养上清液,采用RT-PCR和双抗夹心ELISA方法 检测IL-10 mRNA及其蛋白表达.结果 照射组角质形成细胞磷酸化JNK水平在各采样时点均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);照射组角质形成细胞非磷酸化JNK水平于0、2、12、24、48h均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).SP600125预处理的细胞于照射后的各时点均未检测到IL-10 mRNA及其蛋白的表达.结论 JNK可能介导UVA诱导的人角质形成细胞IL-10的表达.
关键词： 紫外线 角质形成细胞 白细胞介素-10 c-Jun氨基末端激酶 SP600125 -
促红细胞生成素通过JNK通路对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响
目的:探讨促红细胞生成素(EPO)后处理是否通过抑制C-Jun氨基末端激酶(JNK)活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡.方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组(n=8):对照组(C组)、肺缺血/再灌注组(I/R组)、促红细胞生成素干预组(EPO组)、促红细胞生成素+溶剂对照组(P组)、促红细胞生成素+ SP600125组(SP组).各组分别于再灌注2h留取左肺组织,电镜检测超微结构损伤;免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果:与C组相比,I/R组肺组织超微结构损伤明显,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低,Bax蛋白表达明显升高(P＜0.01);EPO组、P组、SP组与I/R组相比,组织损伤有所减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01);SP组与EPO组相比,组织损伤明显减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低(P＜0.01).结论:I/R通过激活JNK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;EPO可通过抑制JNK的激活而减轻I/R损伤.
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抑制JNK信号通路下调A549中LRP表达可增强顺铂化疗敏感性
目的：探讨在顺铂作用下的A549细胞中JNK信号通路与肺耐药蛋白LRP之间的相互关系。方法：用SP600125抑制JNK信号通路的活化，CCK-8法检测顺铂药物敏感性，流式细胞术检测细胞凋亡率，用Western blotting法检测LRP、JNK、P-JNK的表达。结果：顺铂可活化JNK信号通路，上调LRP的表达；用SP600125抑制JNK信号通路后，LRP的表达下调，增强了顺铂化疗敏感性，促进了细胞凋亡。结论：在A549细胞中，活化的JNK信号通路上调LRP的表达促进化疗耐药，因此阻断JNK信号通路为肺癌提供新的治疗靶点。
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左归丸对庆大霉素诱导的肾损伤大鼠MKK4、MKK7、JNK的影响
目的:探讨左归丸对庆大霉素诱导的肾损伤大鼠MKK4、MKK7、JNK的影响.方法:将40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、SP600125组、左归丸组,对照组给予腹腔注射0.9%生理盐水2.5 ml·kg-1·d-1,模型组腹腔注射硫酸庆大霉素100 ml·kg-1·d-1,SP600125组左侧腹腔注射硫酸庆大霉素100 ml·kg-1·d-1,2 h后右侧腹腔注射SP600125 15 ml·kg-1·d-1,左归丸组腹腔注射硫酸庆大霉素100 ml·kg-1·d-1和灌胃左归丸水溶液2 g·200 g-1·d-1,4组大鼠连续给药10 d.第11天测量各组大鼠尿NAG酶、血Scr、血BUN等生化指标;HE染色观察各种大鼠肾脏病理状况;以免疫组化技术检测各组大鼠肾脏MKK4、MKK7、JNK的表达,并采用Image pro-Plus6.0图像分析软件半定量分析;以Western blot方法检测各组大鼠肾脏MKK4、MKK7、JNK蛋白的表达.结果:生化指标结果显示:与对照组比较,模型组的大鼠尿NAG酶、血Scr、血BUN值显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,SP600125组与左归丸组生化指标得到改善,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).免疫组化结果显示:与对照组比较,模型组MKK4、MKK7、JNK在肾小管大量表达,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,SP600125组与左归丸组表达少量,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01).Western blot方法结果显示:模型组MKK4、MKK7、JNK蛋白灰度值较对照组明显升高(P<0.01),SP600125组与左归丸组较模型组灰度值下降(P<0.05).结论:左归丸对庆大霉素诱导肾损伤大鼠的保护作用可能与抑制MKK4、MKK7、JNK的表达有关.
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姜黄素逆转SP600125诱导Dami细胞多倍体化模型的建立
背景:细胞的多倍性是重要的生物学现象,不仅影响组织器官和造血系统的正常生理功能,而且是某些应激条件下代偿性的表现,和发生某些病理过程的基础,尤其与恶性肿瘤的发生有着密切的关系.目的:优化SP600125诱导Dami细胞多倍体化模型,探讨姜黄素对此多倍体化逆转作用的机制.方法:将不同浓度SP600125(15,30,60 mmol/L)分别加入细胞悬液中,诱导Dami细胞多倍体化,确定佳诱导时间和浓度;将5,10,20 mmol/L姜黄素分别加入含有SP600125的细胞悬液中,培养72 h收集细胞.Annexin V-PI染色法的流式细胞术检测细胞倍性的变化、Western blot法检测细胞周期相关蛋白的变化.结果与结论:30 mmol/L SP600125作用Dami细胞72 h,诱导的多倍体化细胞数量多,并且cyclin D3表达高;姜黄素明显逆转Dami细胞多倍体化,cyclin D3表达逐渐降低,存在明显的剂量依赖关系.结果显示,实验成功建立了Dami细胞的多倍体化模型,并确立了诱导多倍体化Dami细胞的SP600125佳诱导时间和浓度72 h,30 mmol/L.姜黄素可能通过抑制cyclin D3的表达,逆转SP600125诱导Dami细胞多倍体化.
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JNK激酶抑制剂SP600125对大鼠皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用
目的 探讨SP600125对SD大鼠腹部皮瓣缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 雄性SD大鼠36只随机分为3组,假手术组(SH组),缺血再灌注/注射SP600125组(I/R-SP组)和缺血再灌注/注射DMSO溶液组(I/R-D组),每组12只,后两组大鼠通过夹闭左腹腹壁下浅动脉3h后恢复血流供给制备腹部皮瓣缺血再灌注模型.血流恢复24 h,每组随机挑选6只大鼠进行免疫组化检测,比较pJNK、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平;血流恢复72 h,采用激光多普勒血流灌注成像仪检测各组剩余(6只)大鼠皮瓣的血流灌注情况,并通过HE染色和TUNEL染色观察组织学变化和细胞的早期凋亡.结果 免疫组化结果显示,与I/R-D组相比,I/R-SP组pJNK,Bax蛋白表达水平显著降低,Bcl-2表达水平显著增高;皮瓣血流灌注情况显示,I/R-SP组成活率及血流灌注量均显著高于I/R-D组,差异有统计学意义(P＜0.01);皮瓣组织细胞凋亡率,I/R-SP组显著低于I/R-D组(P＜0.01).结论 SP600125可能通过抑制JNK通路,减少细胞凋亡,从而缓解皮瓣缺血再灌注损伤.
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鞘内注射JNK特异性抑制剂SP600125对CCI大鼠痛行为的影响
目的 观察鞘内注射c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)特异性抑制剂SP600125对慢性压榨性损伤(chronic constriction injury,CCI)大鼠痛行为的影响.方法 雄性sD大鼠40只,随机分为5组(n=8). SP5组:CCI模型,鞘内注射SP600125 5μg;SP25组:CCI模型,鞘内注射SP600125 25 μg;SP50组:CCI模型,鞘内注射SP600125 50μg;DMSO组:CCI模型,鞘内注射2%二甲亚砜溶剂10 μl;Naive组:正常大鼠,鞘内注射SP600125 50μg.SP600125均溶于2%二甲亚砜10μl.CCI模型制作7 d后行鞘内注射,并测定大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)及热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).结果 鞘内注射SP600125对正常大鼠的痛行为无影响.鞘内注射一定剂量SP600125能减轻CCI大鼠的机械痛敏及热痛敏.结论 鞘内注射一定剂量的SP600125能够减轻CCI大鼠的机械痛敏及热痛敏.
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JNK抑制剂对鼠实验性牙周病后基质金属蛋白酶-2mRNA影响的研究
目的 观察c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal protein kinase,JNK)特异性抑制剂SP600125对大鼠实验性牙周病后基质金属蛋白酶-2mRNA(MMP-2mRNA)水平的影响.方法 18只雄性SD大鼠随机分为对照组、生理盐水组(腹腔注射生理盐水)和SP600125组(腹腔注射SP600125),每组6只.每只大鼠右侧下颌第一磨牙牙颈部结扎钢丝,4周后去除钢丝,对照组在全麻下切取牙龈组织.此后生理盐水组每天腹腔注射生理盐水,SP600125组每天腹腔注射SP600125稀释液,连续7d后分别在全麻下切取牙龈组织.利用TR-PCR技术,分别检测对照组、生理盐水组和SP600125组牙龈组织中MMP-2mRNA的水平.结果 SP600125组牙龈组织中MMP-2mRNA较对照组和生理盐水组明显减少,差异有统计学意义.结论 JNK特异性抑制剂SP600125能够减少实验性鼠牙周病牙龈组织中的MMP-2mRNA.
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SP600125抑制c-Jun的激活拮抗肾缺血/再灌注诱导的细胞凋亡
目的 应用JNK抑制剂SP600125研究转录因子c-Jun的激活对肾缺血/再灌注(I/R)诱导细胞凋亡的影响.方法 采用双侧夹闭大鼠肾蒂缺血45min后再灌注3 h的方法制备肾I/R动物模型.免疫组化法分析转录因子c-Jun的激活变化情况;原位末端标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡情况.结果 再灌注3h,p-c-Jun的免疫活性显著增强,凋亡的细胞数明显增加.SP600125明显抑制了p-c-Jun的免疫活性且明显减少肾I/R诱导的细胞凋亡.结论 肾I/R诱导的细胞凋亡与c-Jun的激活有关,SP600125能明显抑制转录因子c-Jun的激活,减轻肾小管上皮细胞的凋亡.
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JNK信号通路介导化学性缺氧对PC12细胞的损伤作用
目的 探讨C-Jun蛋白氨基末端激酶(C-Jun N-terminal kinase,JNK)通路在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)对PC12细胞损伤中的作用.方法 应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型.应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;JC-1染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP); Western blot法检测JNK蛋白的表达水平.结果 600 μmol·L-1 CoCl2作用PC12细胞不同时间(12～48 h)后,可时间依赖性地抑制PC12细胞的存活率;600 μmol·L-1的CoCl2处理PC12细胞48 h时,可引起细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;CoCl2能明显的降低PC12细胞的MMP; CoCl2能诱导JNK的磷酸化,特异性的JNK阻断剂SP600125可抑制CoCl2对PC12细胞的上述损伤作用.结论 CoCl2可引起PC12细胞损伤,此作用可能与其诱导JNK磷酸化有关.
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JNK抑制剂保护肾缺血/再灌注损伤及其分子机制
肾脏对缺血/再灌注损伤(ischemic reperfusion injury,IRI)较敏感,在相关手术中易发生不同程度的再灌注损伤,可能与细胞凋亡及JNK信号通路的激活有关"[1,2].
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JNK通路在高糖促人乳腺癌MCF-7细胞增殖中的作用
目的探讨c-Jun氨基末端激酶( JNK)信号通路在高糖促进人乳腺癌MCF-7细胞增殖中的作用。方法体外培养人乳腺癌 MCF-7细胞,分为低糖组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)；高糖组(葡萄糖浓度为25 mmol/L)；加药组：高糖+不同浓度特异性JNK信号转导通路抑制剂SP600125(10、20、40、80μmol/L)。四亚基偶氮唑盐( MTT)比色法检测各组作用24、48、72 h细胞增殖水平；倒置显微镜下观察细胞形态；Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞技术检测作用24 h 后细胞凋亡率；Western blot 检测作用24 h 后细胞内JNK1/2及磷酸化JNK1/2( p-JNK1/2)蛋白的表达水平。结果① MTT检测结果显示：与低糖组比较,高糖能够促进MCF-7细胞增殖( P <0.05), SP600125可以抑制高糖对MCF-7细胞的促增殖作用( P<0.05)；②凋亡检测结果显示：低糖组与高糖组凋亡率差异无统计学意义,SP600125呈浓度依赖性促进高糖环境下MCF-7细胞的凋亡( P<0.05)；③ Western blot检测结果显示：与低糖组比较,高糖组MCF-7细胞p-JNK1/2蛋白表达量增加( P<0.05),且 p-JNK/JNK比值上升( P<0.05)；与高糖组相比,不同浓度的SP600125可以明显降低p-JNK1/2蛋白的表达( P<0.05),并下调p-JNK/JNK的比值( P<0.05)。结论抑制JNK信号通路后可以抑制高糖所诱导的MCF-7增殖,并诱导其凋亡。
关键词： c-Jun氨基末端激酶1/2 SP600125 乳腺癌 细胞凋亡 增殖 -
JNK 信号通路受抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼敏感性
目的：观察 JNK 信号通路受到抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼的敏感性。方法培养人白血病敏感细胞株 K562和耐阿霉素细胞株 K562／ADR，采用 CCK-8法测算尼洛替尼对细胞的半抑制浓度（IC50）及耐药指数。用4μg／mL 的 SP600125抑制 K562／ADR 细胞 JNK 信号通路后进行尼洛替尼处理，CCK-8法测算细胞尼洛替尼 IC50。将 K562／ADR 细胞分为对照组、尼洛替尼组、联合组，对照组未处理，尼洛替尼组采用20μmol／L 尼洛替尼处理，联合组先用4μg／mL SP600125预处理2 h，再用20μmol／L 尼洛替尼处理，荧光定量 PCR 检测各组细胞内 MDR1基因，Western blot 法检测各组细胞内 P-糖蛋白（P-gp）。结果 K562／ADR 细胞对尼洛替尼的耐药指数为 K562细胞的19．58倍。抑制 JNK 信号通路后，尼洛替尼对 K562／ADR 细胞的 IC50由（12．53±0．11）μmol／L 下降到（6．77±0．24）μmol／L（P ＜0．05）。对照组、尼洛替尼组、联合组 K562／ADR 细胞 MDR1 mRNA 相对表达量分别为0．9678±0．0062、0．5136±0．0124、0．2671±0．0087，P-gp 相对表达量分别为1．0074±0．0041、0．5961±0．0136、0．3637±0．0069，两两组间比较，P 均＜0．05。结论 JNK 信号通路受抑制的人白血病 K562／ADR 细胞对尼洛替尼敏感性增加，这与抑制 JNK 信号通路可降低 K562／ADR 细胞中 MDR1基因的表达有关。
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SP600125-JNK抑制剂对缺血再灌注损伤保护作用的研究进展
SP600125是JNK激酶抑制剂,可特异性阻断JNK细胞转导通路,对缺血再灌注损伤起保护作用,并且抑制细胞活化和分化,相关炎症基因表达.笔者就SP600125抑制剂治疗脑、肝、心、肺、肾及脊髓缺血再灌注损伤的基础和实验研究成果做一综述,以期为临床医师选择使用SP600125抑制剂提供理论依据,同时提出在IRI中除了JNK信号通路影响之外是否存在诸如JAK-STAT、PI3K-Akt等信号通路,有可能成为临床治疗IRI新靶点.
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Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和JNK信号转导通路的作用
目的 探讨Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道与JNK的作用,以及钾通道与JNK的关系,进一步了解AD的发病机制.方法 应用MTT法、Hoechst33342法、比色法及Westernb1ot法分别检测以TEA和SP 600125作用的Aβ1-40诱导神经干细胞的存活率、凋亡发生率、Caspase-3活性的改变及JNK磷酸化的情况.结果 预先加入TEA使Aβ1-40诱导的神经干细胞的存活率增加,凋亡减少;JNK的选择性阻断剂SP 600125 可显著的保护Aβ1-40诱导的神经干细胞的凋亡.在Aβ1-40孵育前30 min加入TEA,与Aβ1-40共同孵育24 h,TEA使JNK的磷酸化表达显著降低.结论 Aβ1-40可以使神经干细胞发生凋亡.钾通道在Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡时被激活,TEA可以明显减轻Aβ1-40诱导的神经干细胞的凋亡.Aβ1-40诱导神经干细胞后JNK信号转导通路参与了凋亡的发生,SP600 125对Aβ1-40诱导的神经干细胞具有明显的保护作用.TEA作用于Aβ1-40诱导的神经干细胞可以使JNK蛋白表达下降,说明Aβ1-40引起的钾通道激活和JNK磷酸化两者之间有一定的相互联系,进而诱发了下游凋亡相关蛋白的改变.
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c-Jun氨基末端激酶抑制剂SP600125对杏仁核电点燃癫痫模型大鼠海马CA1区神经元的保护作用
目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对杏仁核电点燃大鼠海马CA1区神经元的保护作用.方法 将30只健康雄性Wistar大鼠随机分为点燃组、加药组及加药对照组,每组10只.大鼠10次癫痫发作后灌注取脑,Western blot法检测JNK和磷酸化JNK表达,进行胶原纤维酸性蛋白(GFAP)和尼氏染色,并将各组进行观察和比较.结果 Western blot显示加药组海马区JNK磷酸化水平(0.347±0.033)较点燃组(0.510±0.039)和加药对照组(0.476±0.045)显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05),总JNK水平各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);加药组GFAP阳性细胞计数(42.27±4.63)较点燃组(68.82±5.36)和加药对照组(69.06±4.63)显著减少,差异有统计学意义(P＜0.05);尼氏染色正常神经元计数加药组(37.82±6.30)较点燃组(19.87±3.58)和加药对照组(20.13±5.37)显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK特异性抑制剂SP600125对大鼠杏仁核电点燃癫痫模型CA1区海马神经元具有保护作用.通过SP600125抑制JNK的活性可能是治疗颞叶癫痫一种新的有效策略.
关键词： c-Jun氨基末端激酶 颞叶癫痫 海马硬化 SP600125
