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新疆哈萨克族高血压患者外周血淋巴细胞Kv1.3通道的表达
目的 研究新疆哈萨克族高血压患者外周血淋巴细胞Kv1.3电压门控钾通道表达的变化.方法 于2010-09-2011-06在新疆医科大学第一附属医院高血压门诊随机入选未经降压药物治疗的新疆哈萨克族高血压患者20例为高血压组,年龄(50.2±3.8)岁,选择同期健康体检者20名为对照组,年龄(49.1±3.6)岁,两组男女各10名.采集这两组外周血淋巴细胞,运用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术和Western blotting技术检测外周血淋巴细胞Kv1.3通道基因和蛋白表达水平.结果 高血压组Kv1.3通道mRNA相对表达量及蛋白相对表达量均高于对照组[(0.063±0.008)比(0.008±0.007),(0.835±0.067)比(0.250±0.068),均P＜0.01].结论 新疆哈萨克族高血压患者淋巴细胞上Kv1.3通道表达增多.
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钾通道在系统性红斑狼疮T细胞中的作用研究
目的:研究SLE患者外周血活化T细胞中Kv1.3和IKCa1通道的表达情况,以及阻断Kv1.3通道后对SLE患者T细胞增殖的影响.方法:①病例选择:SLE患者33例,健康对照组12例;②分离外周血T细胞,采用抗CD3单克隆抗体刺激T细胞活化,培养72小时;③荧光实时定量RT-PCR检测SLE患者活化T细胞中Kv1.3和IKCa1通道的mRNA表达;④CCK-8法检测阻断Kv1.3通道对SLE患者T细胞增殖的影响;⑤应用统计软件SPSS17.0进行数据统计分析;对Kv1.3和IKCa1通道mRNA相对表达量与补体C3、C4、抗dsDNA抗体、SLEDAI积分及尿蛋白间进行相关性分析.结果:①SLE患者外周血T细胞活化后Kv1.3通道mRNA的表达与正常对照组相比明显增高(P<0.0001),IKCa1通道mRNA的表达与正常对照组相比降低(P=0.006),SLE患者Kv1.3及IKCa1 mRNA表达水平均与补体C3、C4、抗dsDNA抗体、SLEDAI积分及尿蛋白无相关性.②Kvl.3通道阻断剂ShK可明显抑制SLE患者外周血T细胞的增殖(P<0.001).结论:Kv1.3通过是SLE患者TEM细胞活化的主要离子通道,Kv1.3通道可成为SLE免疫治疗的一个新起点.
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探析Kv1.3通道阻断剂对动脉粥样硬化大鼠CD4+TEM细胞分化的影响
目的：探讨分析特异性阻断Kv1.3通道对动脉粥样硬化（Antheresclerosis，AS）大鼠CD4+T淋巴细胞分化的影响。方法：建立AS大鼠模型，应用特异性Kv1.3通道阻断剂ShK-L5对其进行持续干预，检测大鼠脾脏CD4+T细胞Kv1.3通道的表达及TEM细胞亚群所占比例的变化。结果：ShK-L5可显著抑制AS大鼠CD4+ T淋巴细胞Kv1.3通道表达的上调（1.653±0.461vs0.8445±0.221，P＜0.001）。ShK-L5可显著抑制AS大鼠CD4+ T淋巴细胞TEM亚群比例的上升（93.38±2.319% vs 86.23±3.577%, P＜0.05）。结论：特异性阻断Kvl.3通道剂ShK-L5可显著抑制AS大鼠CD4+T淋巴细胞向TEM细胞亚群分化。
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Kv1.3通道阻断剂ShK-L5对动脉粥样硬化大鼠CD4+T细胞的影响
目的：分析特异性Kv1.3通道阻断剂对动脉粥样硬化（AS）大鼠CD4+T淋巴细胞功能状态的影响。方法：将24只大鼠随机分为正常对照组、AS组和药物干预组，通过高脂喂养+维生素D3负荷灌胃建立AS大鼠动脉粥样硬化模型。对药物干预理组大鼠应用ShK-L5进行持续药物干预，对照分析各组大鼠CD4+T细胞炎症因子IL-2、IL-10 and IFN-γ的分泌情况。结果：ShK-L5可抑制AS大鼠CD4+T淋巴细胞受抗原刺激时出现的增殖反应（2.761±1.016 vs 1.434±0.3459,P<0.05）。药物干预理组大鼠脾组织CD4+T淋巴细胞在受到刺激48h后分泌的细胞因子显著增多，其IL-2， IL-10和IFN-γ的表达均低于AS组大鼠，且存在极显著差异（P<0.05）。结论：特异性阻断Kvl.3通道ShK-L5可抑制AS大鼠CD4+T淋巴细胞分泌炎症因子及受抗原刺激时的增殖、活化能力。ShK-L5可抑制AS大鼠CD4+T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2、IL-10、IFN-γ的功能。
关键词： CD4+ T淋巴细胞 Kv1.3通道 大鼠 动脉粥样硬化 ShK-L5 -
依普利酮对慢性心力衰竭患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道mRNA及蛋白表达的抑制作用
目的:探讨依普利酮(EPL)对慢性心力衰竭(CHF)患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响.方法:收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本(30例vs 20例).免疫磁珠分选外周血CD4+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4+T淋巴细胞增殖的影响.共分为3组,Control组、CHF组及CHF+ EPL组.RT-qPCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4+T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达.结果:EPL的佳抑制浓度为30 μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍(P＜0.01),CHF+ EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80％和39.62％ (P＜0.01);CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍(P＜0.01),CHF+ EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30％和37.14％(P＜0.01).结论:CD4+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利.
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依普利酮基于阻断Kvl.3通道对抗Treg细胞体外促成纤维细胞增殖作用
目的 SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)和成年SD大鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)体外共培养,探讨二者相互作用,并观察依普利酮(EPL)对其的影响.方法 免疫磁珠法分选大鼠Tregs,差速贴壁法分选大鼠CFs,分为CFs、CFs+ Tregs、CFs+Tregs+EPL(30 μmol.L-1)、Tregs组.孵育后,CCK-8法检测CFs的增殖情况;ELISA法检测CFs分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白相对表达水平;RT-qPCR检测Tregs的Kvl.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平;In-Cell Westem blot法检测Tregs的Kv1.3通道蛋白质的表达水平.结果 共培养48 h后,CFs增殖趋稳,共培养组CFs增殖明显(P＜0.01),EPL可明显抑制其增殖(P ＜0.01);CFs分泌的Ⅰ型、Ⅲ型胶原和MMP-2的相对表达水平均明显增加(P＜0.01),EPL可明显抑制其增加(P＜0.01);Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平分别增加6.95、1.99、1.53倍(CFs+Tregs vs Tregs,P＜0.01),EPL明显抑制Kv1.3、KCa3.1 mR-NA的表达(CFs+Tregs+EPLvsCFs+Tregs,P＜0.01),其中Kv1.3通道的抑制为明显;Tregs的Kv1.3通道蛋白增加了67.9％(CFs+Tregs vs Tregs,P＜0.01),EPL可明显抑制其表达(P＜0.01).结论 体外Treg与CFs共培养48h后,Tregs能明显促进CFs的增殖,EPL可以通过下调Tregs细胞膜上Kv1.3通道的表达,抑制Tregs的活化/增殖,间接抑制心肌纤维化.
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龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的抑制作用
目的 拟调查龙血竭对免疫调节功能相关性Kv1.3通道的影响.方法 运用全细胞膜片钳实验检测龙血竭对Kv1.3通道电流及Jurkat细胞膜电位的影响;运用ELISA实验检测龙血竭对细胞炎性因子白细胞介素-2释放的影响.结果 龙血竭对外源性表达在HEK293T细胞及内源性表达在Jurkat T细胞上的Kv1.3通道产生了浓度依赖性抑制作用;龙血竭尚可以诱导Jurkat T细胞膜电位发生去极化改变,抑制植物血凝素激活的Jurkat T细胞炎性因子白细胞介素-2的释放.结论 该研究首次报道了Kv1.3通道是龙血竭赖以产生免疫抑制作用的受体靶蛋白,部分阐明了龙血竭产生免疫抑制效应原细胞和分子机制.
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大鼠动脉粥样硬化斑块中T淋巴细胞亚群及Kv1.3通道蛋白的表达
目的 探究Kv1.3通道蛋白与动脉粥样硬化(AS)模型中活化的T淋巴细胞间的关系.方法 Wistar雄性大鼠24只,随机分为对照组(n=10)和AS组(n=14),采用高脂饲料喂养方法建立AS模型.分别于实验开始前,实验第8周,实验第12周观察各组大鼠体重变化.于第12周处死大鼠前取血,检测血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-L)、高密度脂蛋白(HDL-L)和甘油三酯(TG)的水平.通过病理HE染色及免疫组织化学方法观察AS斑块内T淋巴细胞亚群分布和Kv1.3通道蛋白表达的改变.结果 AS组体重、TC、LDL-C较对照组明显升高（P均＜0.05）；HDL-C和TG两组无差异.AS组主动脉管壁可见明显斑块形成,对照组血管壁各层的组织结构正常.AS组动脉斑块部位内膜下及中膜层可见CI4+与CD8+T淋巴细胞聚集,以CD4+T淋巴细胞聚集为主,在病变部位Kv1.3通道蛋白表达增加.对照组血管内膜、中膜中未见T淋巴细胞聚集及KV1.3通道蛋白的表达.结论 Kv1.3通道可能在调节AS斑块部T淋巴细胞亚群的激活中起着重要作用.
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Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细动脉的调节作用
目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6～8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P＜0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P＜0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P＜0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.
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Kv1.3通道阻滞剂与T、B淋巴细胞介导的自身免疫疾病
T、B淋巴细胞在免疫调节过程中扮演重要作用.当免疫系统调控出现紊乱时则会导致自身免疫等疾病的发生,已证实Kv1.3通道在T、B淋巴细胞亚型中表达数量的变化与此类疾病的发生一定的联系.特异性的Kv1.3通道阻滞剂是以Kv1.3通道为靶点并与Kv1.3通道结合,调节在淋巴细胞增殖中的细胞因子及相关的信号通路来遏制自身免疫疾病的发展.与传统的治疗此类疾病的方法相比有着其独特的优势,如较强特异性,较少的副作用等.这些发现对于深入研究自身免疫疾病的病理机制、早期诊断及新型药物的发现具有深远的意义.
