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高效液相色谱法测定保健食品中淫羊藿甙
淫羊藿为小檗科植物,主要功效为补肾阳,强筋骨,祛风湿.因此,淫羊藿甙在补肾壮阳的保健食品中常是主要的功能因子.关于淫羊藿甙的测定,保健食品方面尚无检验方法,药典对其甙类的检测是薄层色谱法,需铺板,试样萃取,减压蒸馏浓缩,后用分光光度法测定,既繁琐误差又大.所以本文参照有关文献,[1～5],利用高效液相色谱法对保健食品中淫羊藿甙的测定进行了研究.
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淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响
目的:了解淫羊藿甙对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,探讨淫羊藿“补肾壮阳,益精健骨”的作用机制.方法:体外培养大鼠成骨细胞,在96孔培养板和24孔培养板内分别加入0.2ml和0.4ml的4×105个/ml细胞,并在相应培养基中加入淫羊藿甙,终浓度分别为20μg/L、40μg/L、60μg/L,不加淫羊藿甙者作为对照.培养24h、48h、72h后检测细胞的增殖能力及碱性磷酸酶的活性.在6孔板内放置盖玻片,每孔内加入1×105个细胞,并加入淫羊藿甙(终浓度为20μg/L),继续培养24h、48h,用于I型胶原蛋白免疫组化研究.结果:淫羊藿甙对大鼠成骨细胞的增殖无明显的刺激作用,但能促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶和I型胶原蛋白.结论:淫羊藿甙可促进成骨细胞的分化,使骨形成增加,起到“健骨”的作用.
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淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨组织核心结合因子α1表达的影响
目的 观察淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨组织Cbfa1表达的影响.方法 54只雌性SD大鼠随机分成6组9只/组:假手术组、模型组、尼尔雌醇组、淫羊藿甙低剂量组、淫羊藿甙中剂量组和淫羊藿甙高剂量组.对尼尔雌醇组和淫羊藿甙低、中、高剂量组分别给予尼尔雌醇(0.1mg/kg)和淫羊藿甙(40,80和160mg/kg)治疗12周.12周后,以DXA法测定大鼠全身的骨密度;放射免疫法测定各组大鼠血清中骨钙素及雌二醇的浓度;处死各组大鼠,直接从头盖骨中提取总.RNA,采用荧光定量PCR技术检测Cbfa1 mRNA的相对表达量.结果 12周后,模型组大鼠的骨密度和血清雌二醇水平明显降低,与假手术组相比,差异有显著性(P<0.05).与模型组相比高剂量组的全身骨密度和血清骨钙素含量增加(P<0.05),但是血清雌二醇的水平无变化(P>0.05).12周后,与假手术组相比,模型组大鼠骨组织中Cbfal mRNA表达明显降低,差异有显著性(P<0.01).与模型组相比高剂量组骨组织中Cbfal mRNA的表达,显著升高(P<0.01).结论 淫羊藿甙对去卵巢大鼠骨质疏松症具有防治作用,其部分机制可能为淫羊藿甙促进骨组织中Cbfa1表达,从而调节骨形成.
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葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞生物学作用的比较研究
目的 对比葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞增殖和分化的影响.方法 将小鼠骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3、4代细胞,以rhBMP-2为阳性对照,MTT法观察葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定及钙结节计数观察葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞分化的影响.结果 20 μg/ml的淫羊藿甙可显著促进成骨细胞的增殖;20 μg/ml淫羊藿甙及50 μg/ml葛根素均能提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性,并使矿化结节的形成明显增多.结论 淫羊藿甙不仅能促进成骨细胞的分化,还能增强其增殖能力,而葛根素主要是通过刺激分化来增强成骨细胞的活力.
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MAPK信号通路在淫羊藿甙促进成骨细胞Cbfa1蛋白表达中的作用
目的 观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响以及MAPK信号通路在淫羊藿甙促成骨细胞核心结合因子α1(core binding factor-1,Cbfa1)蛋白表达中的作用,以探讨淫羊藿甙对成骨细胞作用的信号传导机制.方法 用酶消化法分离24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养.在培养液中加入淫羊藿甙(10 ng/mL),作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min、60 min,抽提总蛋白,用Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用雌二醇(10-8 mol/L)作用于成骨细胞5 min、10 min、30 min,同上法检测细胞中ERK、p-ERK、P38和p-P38蛋白的表达.用淫羊藿甙(10 ng/mL)、雌二醇(10-8 mol/L)和u0126或SB203580单独或共同干预成骨细胞24 h,抽提核蛋白,用Western blot法检测Cbfa1蛋白的表达.结果 ①淫羊藿甙作用于成骨细胞,30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);淫羊藿甙作用于成骨细胞,5 min时即可促进P38蛋白的磷酸化,在30 min时达高峰,并可持续至60 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).②雌二醇作用于成骨细胞,在30 min时可促进ERK蛋白的磷酸化,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05);雌二醇作用于成骨细胞,在10 min时可促进P38蛋白的磷酸化,并可持续至30 min,和空白组比较,差异有显著性(P<0.05).③淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中Cbfa1蛋白的表达,和空白组相比,差异有显著性(P<0.05).u0126和SB203580可以抑制淫羊藿甙和雌二醇促进Cbfa1蛋白表达的作用.结论 ①淫羊藿甙和雌二醇均可以激活成骨细胞中ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路;②淫羊藿甙和雌二醇均能促进成骨细胞中核转录因子Cbfa1的表达,并且ERK/MAPK和P38/MAPK信号通路参与了此过程.
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阴蒂海绵体中磷酸二酯酶5表达及淫羊藿甙对cGMP浓度的影响
目的探讨阴蒂海绵体中磷酸二酯酶5表达及淫羊藿甙对cGMP浓度的影响. 方法通过反转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测兔阴蒂海绵体中PDE5 mRNA的表达;125I放射免疫法测定不同浓度淫羊藿甙对阴蒂海绵体内PDE5酶底物cGMP浓度的影响,西地那非作为阳性对照,分别计算EC50. 结果阴蒂海绵体组织中有PDE5的表达,淫羊藿甙可明显提高阴蒂海绵体内的cGMP浓度,具有显著的浓度依赖性. 结论淫羊藿甙对阴蒂海绵体平滑肌细胞内cGMP水平的影响可能是通过PDE5发挥作用,与NO-cGMP信号通路有关.
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曲古霉素A和淫羊藿甙诱导HL-60细胞分化过程中nm23和c-myc及G-CSF表达变化的研究
目的:研究曲古抑菌素A(TSA)、淫羊藿甙(ICA)诱导急性非淋巴细胞白血病HL-60细胞株分化过程中nm23基因的表达变化及其作用机制.方法:通过MTT试验检测HL-60增殖分化变化,观察细胞形态,分析表面标志和硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应,观察HL-60细胞分化水平变化情况;通过流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR检测nm23-H1、nm23-H2、G-CSF、c-myc基因表达的变化.结果:HL-60细胞经TSA、ICA作用后增殖受抑制,24、48和72h抑制率分别为(12.73±1.17)%、(38.15±3.32)%和(58.45±3.06)%,向成熟粒细胞系分化,细胞被阻滞在G1期,nm23、c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调.结论:HL-60细胞分化过程中c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调与下调nm23基因的表达有关.
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淫羊藿甙对原代培养神经元缺氧缺糖损伤的保护作用
目的探讨淫羊藿甙对体外原代培养神经元缺氧缺糖损伤的作用.方法原代培养大鼠乳鼠皮质神经元,在缺氧缺糖4、6、8 h时检测正常对照组、损伤模型组、淫羊藿甙处理组的神经元细胞噻唑蓝、乳酸脱氢酶(LDH)病理学指标变化.结果模型组在缺氧缺糖4、6、8 h后噻唑蓝值明显低于相应对照组(P＜0.01),LDH漏出率明显高于对照组(P＜0.05或＜0.01).淫羊藿甙组与相应模型组比较,可提高缺氧缺糖的神经元生长能力,使噻唑蓝值有所上升;LDH漏出率有所下降;改善细胞形态.结论淫羊藿甙对体外原代培养神经元具有保护作用,可减轻神经元缺血性损伤.淫羊藿甙有利于缺血性脑血管疾病的治疗.
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淫羊藿甙逆转双酚A促甲状腺癌B-CPAP细胞活性的研究
目的 分析淫羊藿甙(icariin,ICA)逆转环境内分泌干扰物双酚A(bisphenol A,BPA)促甲状腺癌B-CPAP细胞增殖功能及可能机制.方法 采用CCK-8试剂盒检测不同浓度ICA、BPA处理组B-CPAP细胞增殖变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率及活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)试剂盒检测B-CPAP胞内超氧化物歧化酶活性,脂质氧化试剂盒检测胞内丙二醛(malondialdehyd,MDA)表达变化,采用蛋白质印迹法(Westernblot)检测Bcl-2及γ-HA2X蛋白表达.采用SPSS 18.0统计学软件进行统计学分析.结果 3×10-1moL/L BPA处理48 h后,BPA组A值明显高于对照组(1.089±0.053比0.935±0.010,P＜0.05);BPA +ICA25组、BPA+ ICA50组、BPA+ ICA1oo组、BPA+ ICA200组A值分别为0.780 ±0.036、1.007±0.050、0.958±0.033、0.625±0.064,均高于BPA组(P值均＜0.01).72 h各处理组增殖趋势同48 h相似,24h各组差异无统计学意义.48 h后BPA凋亡率为(19.272 ±0.186)％,而对照组为(22.412±0.238)％(P＜0.05);BPA+ ICAso组、BPA+ICA200组B-CPAP细胞凋亡率分别为(23.688 ±0.412)％、(30.270±0.696)％ (P＜ 0.01).BPA +ICA50组、BPA+ ICA2m组ROS均高于BPA组(1 772±37、2 041±16比806±21,P值均＜0.01),呈剂量依赖性.对照组和BPA组的Bcl-2蛋白表达量高于BPA +ICA5o和BPA+ICA200组(7 120±151、9 801 ±286比5 902±171、4 203 ±216,P ＜0.01).结论 BPA可良好地促进甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、降低细胞凋亡率,而这种作用可被ICA逆转,其作用可能途径为诱导胞内ROS高表达且抑制抗氧化酶体系表达,导致细胞氧化损伤,从而诱导凋亡.
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淫羊藿甙对辐照小鼠的抗凋亡作用与半胱天冬酶活性的相关性研究
目的:观察淫羊藿甙抗辐射损伤作用,并探讨其抗辐射损伤机制.方法:KM种小鼠于60Co γ射线照射前48,24h及照后即刻灌胃淫羊藿甙,剂量分别为1,10,100mg/kg,照射剂量8.0Gy,观察受照射小鼠30d存活率和死亡动物平均存活时间.另外观察淫羊藿甙对KM种小鼠受5.5Gy 60Co γ射线照射后小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-8(caspase-8))活性的影响.结果:中剂量淫羊藿甙组30d存活率较照射对照组提高50%,死亡动物平均存活时间延长2.5d.照射对照组胸腺、脾脏和骨髓细胞在照射后6,12和24h均有凋亡.胸腺和脾脏于照射后12h凋亡率高,骨髓于照后6h凋亡率高.照射24h后,3种组织的凋亡率均明显降低.中剂量淫羊藿甙可降低照射后6,12h胸腺、脾脏、骨髓细胞凋亡率和照射后24h脾脏、骨髓细胞凋亡率,抑制照射后6h caspase-3活性,对半胱天冬酶-8活性无影响.结论:淫羊藿甙具有抗辐射损伤作用,其机制之一可能是通过抑制caspase-3活性降低细胞凋亡率.
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HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量
目的:建立HPLC法测定前列舒乐颗粒中淫羊藿苷的含量.方法:固定相:Alltima C18分析柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.5%醋酸(55∶45),检测波长:270nm,流速:1.0ml/min,柱温:40℃.结果:淫羊藿苷在0.131～1.048μg范围内,线性关系良好,r=0.999 9.平均回收率为98.12%,RSD为0.69%.结论:本法可用于前列舒乐颗粒中淫羊藿甙的质量控制.
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骨健颗粒剂提取工艺研究
采用正交设计L9(34),对骨健颗粒剂进行了提取工艺研究,筛选出佳提取条件,并采用薄层层析-紫外分光光度法测定了该制剂中主药淫羊藿中淫羊藿甙的吸收度,计算出淫羊藿甙的转移率为71.2%,验证了优选出的佳提取工艺的合理性.
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淫羊藿甙对小鼠主要器官结构和功能的影响研究
目的 以淫羊藿甙(ICA)为供试药物,研究其对小鼠主要器官结构和功能的影响.方法 100只6周龄健康雌性SPF级昆明系小鼠随机分为两组,分别灌服ICA和生理盐水,在试验第0、1、4、7、10、13、16、19天采血取血清,进行血清生化指标(AST、ALT、ALP、LDH)的检测；剖杀后取心、肝、肺、肾进行组织学观察.结果 ICA对小鼠血清生化指标具有一定的调节作用,表现为使血清中AST和ALT水平升高,降低血清中的ALP和LDH水平,但组织学观察则未见异常.结论 ICA对小鼠主要器官功能与组织结构影响较小.
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淫羊藿苷对动脉性ED模型大鼠阴茎海绵体压力和一氧化氮合酶亚型表达的影响
目的建立动脉性勃起功能障碍大鼠模型(arteriogenic erectile dysfunction,A-ED),研究淫羊藿苷(Icariin)对A-ED大鼠勃起功能和一氧化氮合酶(NOS)三种亚型表达的影响.方法40只Wistar大鼠随机分为假手术组(A组)、A-ED组(B组)、A-ED低剂量淫羊藿苷治疗组(C组)和A-ED高剂量淫羊藿苷治疗组(D组).结扎大鼠双侧髂内动脉建立A-ED动物模型后,C组和D组每天口饲不同剂量的淫羊藿苷(5 mg/kg,10 mg/kg),A组和B组口饲等体积的生理盐水.30d后,通过检测各组大鼠阴茎海绵体压力(ICP)变化评估淫羊藿苷对大鼠勃起功能的效果,切取阴茎海绵体组织,通过逆转录-PCR和Western印迹方法检测NOS亚型的表达变化.结果建立A-ED模型30 d后,B组ICP较手术前显著降低,NOS三种亚型的表达水平也显著降低.经淫羊藿苷治疗后,C组和D组的ICP比B组明显升高(P＜0.01),且D组较C组增高效果明显;C组和D组的eNOS表达水平较之B组有所增高,与ICP的变化有相同的趋势.C组的iNOS表达水平有一定程度的升高.治疗后nNOS表达水平没有明显增高.结论经淫羊藿苷治疗后大鼠勃起功能显著改善,这种功能改善与eNOS的表达增加有相同的趋势,提示淫羊藿苷可能通过恢复eNOS的表达来改善A-ED模型的勃起功能.
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淫羊藿甙对MC3T3-E1细胞Smad1,5作用的实验研究
目的 检测淫羊藿甙(icariin,ICA)对MC3T3-EI中Smad1,5 mRNA及蛋白的影响.方法 DMEM高糖、胎牛血清培养下的MC3T3-E1细胞按ICA刺激浓度0、10、40及80 ng/ml分为四组,各组接种于6孔板中,接种细胞数目约为3×105个/孔,分别于给药后24、48及72 h,用半定量RT-PCR技术测定Smad1,5 mRNA的量,以Western blot评价Smad1,5蛋白的量.并于给药72h后用免疫组织化学定位Smad1,5蛋白的表达.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 RT-PCR显示ICA刺激24 h后,0、10、40、80 ng/ml各组Smad1.5 mRNA量的表达无统计学差异;刺激48 h后,0 ng/ml组Smad1mRNA表达量检出极少,Smad5 mRNA未检出;至72 h时,0 ng/ml组二者均未检出,而10、40、80 ng/ml各组在刺激48、72 h时,Smad1,5 mRNA保持较高水平,各组Smad1,5 mRNA的表达量较0 ng/ml组具有统计学意义.Westem blot蛋白印迹显示10、40、80 ng/ml各组的Smad1蛋白表达于不同时间点较0ng/ml组明显增加,0 ng/ml组仅于刺激72 h后少量检出.Smad5蛋白表达除0 ng/ml组外,于10、40、80ng/ml各组在不同时间点均有检出,较0 ng/ml组具有统计学意义.免疫组织化学显示10、40、80 ng/ml组,于胞质及核内Smad1,5蛋白的表达较0 ng/m组均增多.结论 淫羊藿甙可能通过上调Smad1,5mRNA及蛋白的表达来促进成骨细胞分化.
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淫羊藿甙促进成骨细胞增殖与分化的作用及其机制
目的 探讨淫羊藿甙对骨形态发生蛋白细胞信号通路Smad1、Smad5和Smad4表达的调节作用及促进成骨细胞增殖与分化的机制.方法 在体外分别用含淫羊藿甙0、10-9、10-8和10-7 mol/L 的条件培养液干预MC3T3-E1细胞.给药后第1天、2天和3天,分别应用四甲基噻唑蓝法绘制细胞生长曲线并计算细胞群体倍增时间,用速率分光光度法测定碱性磷酸酶含量,用RT-PCR和Western blot 技术检测Smad1、Smad5、Smad4及骨钙素、Runx2、骨形态发生蛋白-2、骨保护素mRNA的表达,于细胞生长的第21天观察钙结节数量.结果 淫羊藿甙含量为10-8 mol/L时,MC3T3-E1细胞增殖能力强,碱性磷酸酶活性和钙结节数量明显增加；淫羊藿甙作用细胞第1天、2天和3天时,10-8 mol/L组细胞Smad1、Smad5和Smad4 mRNA的表达量始终保持较高水平,第3天时10-9 mol/L和10-7 mol/L组表达明显减少；第2天时,10-8 mol/L组细胞Runx2、骨形态发生蛋白-2、骨保护素mRNA和骨钙素、Smadl、Smad5和Smad4蛋白表达明显增加.结论 淫羊藿甙通过直接刺激MC3T3-El细胞的骨形态发生蛋白-2、Runx2、Smadl、Smad5和Smad4的表达,且以表达水平同步增高的方式促进其成骨性分化.
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淫羊藿甙的研究进展
淫羊藿甙（icariin，ICA）来源于小檗科植物朝鲜淫羊藿（ epimdium koreanum）和心叶淫羊藿（ epimdium berberidaceae maxim）的地上部分。淫羊藿是我国传统的补益类中药，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的作用，主治阳痿遗精、虚冷不育、尿频失禁、肾虚喘咳、腰膝酸软、风湿痹痛、半身不遂等病症。淫羊藿甙为淫羊藿黄酮类提取物的主要成分，也是淫羊藿中主要的抗氧化活性成分［1］。其化学结构属黄酮类化合物，具有体内体外多种生物活性［2］，有增强人体免疫力，抗肿瘤抗氧化，促进组织蛋白质合成，促进成骨细胞生长和抑制破骨细胞活性等双向调节骨代谢的作用。现将淫羊藿甙的研究进展综述如下。
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淫羊藿水煎液和淫羊藿甙的保肝利胆实验研究
淫羊藿(Herba epimedii)是临床上常用的补肾壮阳中药,具有雄性激素样作用,在临床上广泛用于男性不育症及性功能障碍的治疗.其主要成分之一--淫羊藿甙(Icarrin),是近年来提取并研究较多的成分之一,研究发现其有免疫激活作用,能增强T细胞功能[1],这对许多免疫耐受为主的慢性肝病的治疗很有价值.临床上也经常用补肾法治疗慢性肝病,为了探讨其在肝病领域的应用价值,我们对淫羊霍及其主要成分淫羊藿甙进行了保肝利胆效果的研究.
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高效液相色谱法测定冠心康胶囊中淫羊藿甙及丹参酮ⅡA含量的研究
采用高效液相色谱法测定其中有效成分淫羊藿甙、丹参酮ⅡA的含量,可以有效地控制产品的质量.
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ICA和PJA对高转移性人肺癌细胞体外侵袭转移能力抑制的研究
目的：将新型抗癌药物淫羊藿甙（ICA）和济南假单胞菌制剂（PJA）作用于PG 细胞，从肿瘤转移抑制的多个方面和环节探讨PJA、ICA抗转移作用的机制。方法：采 用粘附实验、运动侵袭实验、逆转录PCR(RT-PCR) 、细胞免疫组化等多种方法进行了检测 。 结果：PJA、ICA可降低PG细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力，减少PG细胞表面粘附 分子CD44V6、LN-R及胞浆内CK18的表达，同时细胞内c-myc、Tiam-1基因mRNA水平均有不 同 程度的降低，而Nm23-H1 mRNA水平有不同程度的升高，且两药有明显的协同作用。结论： PJA、ICA通过对肿瘤转移多个步骤的抑制而发挥抗转移作用。
