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应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14-3-3sigma相互作用的分子网络
目的 筛选14-3-3 sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白,构建相互作用的分子网络.方法 构建稳定过表达14-3-3 sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株(PG细胞,大细胞肺癌),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测PG细胞的生长速度.利用稳定同位素标记氨基酸(stableisotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)技术,联合线性离子阱回旋共振质谱仪(LC-LTQ-FT)鉴定由14-3-3 sigma过表达引起的差异表达蛋白,将质谱鉴定为表达＞2倍或＜0.5倍的蛋白作为差异蛋白.通过检索人类蛋白参考数据库(Human protein reference database,HPRD)和蛋白质交互作用网络数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)构建分子网络.结果 显示C4克隆中外源14-3-3 sigma表达量高(命名为PGSC4),后续实验用PGSC4细胞进行.转染14-3-3 sigma 后,PG细胞生长速度明显减慢.建立了包含147个蛋白差异蛋白的数据库.构建的分子网络中含有26个蛋白,其中参与了多个细胞活动(细胞周期调控、细胞分化、凋亡等)的重要激酶——酪蛋白激酶Ⅱα亚基(casein kinaseⅡsubunit alpha,CSNK2A1)是表达升高明显的蛋白质,与DNA损伤调节机制相关的转录调节因子MEN1 (Menin)则是表达降低幅度大的蛋白质.结论 14-3-3 sigma可以抑制非小细胞肺癌PG细胞的生长速度,与细胞周期、DNA损伤修复等机制相关的蛋白质发生了变化,并构成了相互作用的分子网络.
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白花蛇舌草诱导人肺巨细胞癌细胞株PG细胞凋亡的初步研究
目的 研究白花蛇舌草诱导人肺巨细胞癌细胞株PG细胞凋亡的作用,以探讨其抗肿瘤的作用机制.方法 用不同浓度的白花蛇舌草含药血清分别处理PG细胞,采用流式细胞仪分析白花蛇舌草对PG细胞在细胞周期各个时相不同DNA含量和细胞凋亡峰的影响.结果 经白花蛇舌草含药血清作用的PG细胞在非凋亡细胞二倍体峰(G1)之前出现典型的凋亡细胞峰,不同浓度的含药血清对PG细胞的作用存在明显的量效关系,凋亡率分别为6.86%、9.77%、11.69%.结论 诱导肿瘤细胞凋亡可能是白花蛇舌草抗肿瘤作用机理之一.
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蛋白酶抑制剂leupeptin增强抗肿瘤药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用
目的 研究蛋白酶抑制剂(protease inhibitor) leupeptin对化疗药物紫杉醇(taxol,TAX)、吉西他滨(gemcitabine,GEM)以及平阳霉素(pingyangmycin,PYM)在体外抑制肿瘤细胞增殖作用的影响.方法 选取一定浓度梯度的酶抑制剂leupeptin单独或联合TAX、GEM和PYM与肿瘤细胞孵育,48h后采用MTT法测定肿瘤细胞生长的变化并与相应浓度的TAX、GEM和PYM单药组相比较.采用流式细胞术测定MCF-7细胞周期分布.结果 leupeptin在浓度高于50μmol/L时可增强化疗药物对肺癌PG细胞和乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用.leupeptin对TAX的增效作用尤为显著.leupeptin与低浓度的GEM和TAX联合应用可改变MCF-7的细胞周期分布.结论 leupeptin可增强化疗药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用,但其作用程度与肿瘤细胞株的种类、化疗药物的种类及leupeptin的浓度均相关.
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肺金生方通过调控MMP-2/TIMP-2平衡抗肺癌侵袭转移研究
目的:探讨肺金生方对多种肺癌细胞株的体外抗肿瘤转移作用.方法:以肺金生方含药血清作用于肺癌A549、PG和PAa细胞,普通倒置显微镜观察各组细胞的生长特点及形态,MTT法检测细胞增殖情况,Boyden小室法观察细胞迁移,ELISA法检测25％肺金生方含药血清对MMP-2、TIMP-2表达的影响.结果:肺金生方含药血清作用于各细胞后,与正常细胞相比形态发生明显改变,明显梭形化,细胞数量减少;各浓度肺金生方组抑制率与空白组相比有差异,其中25％含药血清与空白组相比有显著性差异(P＜0.01),25％肺金生方含药血清组能减弱A549、PG和PAa细胞迁移,同时,各细胞肺金生方组MMP-2、TIMP-2的表达与空白血清组相比有差异(P＜0.05).结论:肺金生方可以通过调控MMP-2/TIMP-2平衡达到抗肺癌转移作用.
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ICA和PJA对高转移性人肺癌细胞体外侵袭转移能力抑制的研究
目的：将新型抗癌药物淫羊藿甙（ICA）和济南假单胞菌制剂（PJA）作用于PG 细胞，从肿瘤转移抑制的多个方面和环节探讨PJA、ICA抗转移作用的机制。方法：采 用粘附实验、运动侵袭实验、逆转录PCR(RT-PCR) 、细胞免疫组化等多种方法进行了检测 。 结果：PJA、ICA可降低PG细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力，减少PG细胞表面粘附 分子CD44V6、LN-R及胞浆内CK18的表达，同时细胞内c-myc、Tiam-1基因mRNA水平均有不 同 程度的降低，而Nm23-H1 mRNA水平有不同程度的升高，且两药有明显的协同作用。结论： PJA、ICA通过对肿瘤转移多个步骤的抑制而发挥抗转移作用。
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小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响
目的:研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响,以探讨其抑制肿瘤侵袭转移的可能机制.方法:小檗碱(5、10 μg/ml)处理PG细胞24小时,采用MTT法观察PG细胞与PG细胞的黏附(同质黏附),PG细胞与细胞外基质(FN和Martrigel)的黏附;用虎红染色法观察PG细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附.通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件,半定量PG细胞E-cadherin、CD44的表达;RT-PCR法检测PG细胞E-cadherin mRNA和CD44 mRNA的表达.结果:小檗碱(10 μg/ml)可促进PG细胞的同质黏附(P＜0.05);小檗碱(5、10 μg/ml)可抑制PG细胞与FN和Martrigel的黏附(P＜0.01),并可抑制PG细胞与HUVEC的黏附(P＜0.05,P＜0.01).经小檗碱(10 μg/ml)作用的PG细胞,E-cadherinm及其mRNA表达明显增高(P＜0.01),而CD44及其mRNA的表达明显减少(P＜0.05).结论:小檗碱通过促进PG细胞E-cadherin的表达而促进PG细胞间的同质黏附,抑制PG细胞CD44的表达而抑制其与细胞外基质及血管内皮细胞的黏附,这可能是小檗碱抗肿瘤转移的机制之一.
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克栓酶抑瘤作用的实验研究
目的 实验研究克栓酶的抑瘤作用,以期扩展其药用范围,为治疗肿瘤增加药源.方法 采用双层琼脂培养,流式细胞检测,免疫组化图象分析,MTT-ELISA等,以及荷瘤裸鼠整体实验方法观察对人肺癌细胞(PG)与正常人胚内皮细胞增殖抑制作用.结果 证明克栓梅可抑制PG与人胚内皮细胞增殖,具有统计学意义.结论 克栓酶毒性低具有治疗肿瘤的潜能.在肿瘤综合治疗中如何合理联合配伍使用克栓酶值得进一步探讨.
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淫羊藿甙抗癌作用机制的实验研究
中药单体淫羊藿甙是一种新型的生物反应调节剂和诱导分化剂.为进一步探讨淫羊藿甙抗癌作用机制,我们将淫羊藿甙作用于人高转移肺癌细胞PG,采用MTT、放免、流式细胞术、粘附实验、运动侵袭实验等多种手段进行了检测.结果表明,淫羊藿甙虽直接抑癌作用较弱,但却能影响PG细胞周期的时相分布,使S期减小,并能升高细胞内cAMP水平,降低cGMP水平,提高cAMP/cGMP比值,同时降低PG细胞对胞外基质的粘附性及侵袭、运动能力,从而逆转肿瘤细胞的恶性表型.提示,淫羊藿甙作为一种有开发前景的抗肿瘤药物值得进一步深入研究.
