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龟甲胶、鹿角胶调控MKK基因表达促进豚鼠OA软骨细胞增殖的研究
目的 通过观察龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞增殖及其丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)基因表达的影响,探讨龟甲胶、鹿角胶对膝骨关节炎的治疗机制.方法 采用Ⅱ型胶原酶消化法获取3月龄豚鼠膝关节软骨细胞,建立体外培养系,将龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组、对照组4组含药血清分别对其进行干预,采用MTT法检测含药血清干预后软骨细胞增殖情况,荧光定量PCR检测含药血清干预对软骨细胞MKK基因表达的影响.结果 5％含药血清干预72 h后,软骨细胞的MTT的检测结果为龟甲胶组(0.315±0.048)、鹿角胶组(0.236±0.029)、盐酸氨基葡萄糖组(0.190±0.022)、对照组(0.146±0.023),差异有统计学意义(P＜0.05);荧光定量PCR检测MKK表达量结果为龟甲胶(3.287±0.675)、鹿角胶(2.147±0.204)、盐酸氨基葡萄糖组(1.137 ±0.123)及对照组(0.627±0.102),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 龟甲胶、鹿角胶对软骨细胞的促增殖作用强于盐酸氨基葡萄糖,这一作用可能与其能有效上调关节软骨细胞MKK的基因表达有关.
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活化素抑制大鼠垂体GH_3细胞中人生长激素基因启动子的活性
本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH_3细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制.采用荧光素酶报告基因方法.首先建立含hGH基因启动子(-484～+30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH_3细胞株,然后加入活化素或同时加入活化素与相关信号转导途径的激动剂,通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH的含量,以及GH_3细胞内荧光素酶的变化,反映活化素对GH分泌、合成和hGH基因启动子活性的影响.将含不同长度hGH基因启动子序列的荧光素酶表达质粒分别转染GH_3细胞,观察它们对活化素的反应,寻找活化素影响hGH基因启动子活性的关键DNA序列.结果表明,活化素(5,50 nmol/L)能抑制大鼠垂体GH_3细胞中GH的分泌和合成,活化素(5,50 nmol/L)还能够抑制GH_3细胞中hGH基因启动子的活性,使之仅达对照组的77%和69%;在胞内信号转导激动剂中,丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性激动剂C_6 ceramide(1μmol/L)完全取消了活化素对hGH基因启动子活性的抑制作用;活化素发挥抑制作用所需要的hGH基因启动子关键序列位于-132～-66 bp之间.上述研究表明,活化素能抑制大鼠垂体GH_3中hGH基因启动子的活性,它可能是通过抑制细胞内依赖MAPK的信号转导途径来完成的,同时hGH启动子上-132～-66 bp的序列在其中发挥重要的作用.
关键词： 活化素 生长激素 启动子 GH_3细胞 丝裂原活化蛋白激酶激酶 -
龟甲胶、鹿角胶含药血清对豚鼠骨关节炎软骨细胞MKK表达的影响
目的:通过观察龟甲胶、鹿角胶合药血清对豚鼠膝骨关节炎软骨细胞增殖及其丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)表达的影响,阐释龟甲胶、鹿角胶对膝骨关节炎的治疗作用.方法:将龟甲胶组、鹿角胶组、盐酸氨基葡萄糖组、对照组4组合药血清分别对3月龄豚鼠膝关节软骨细胞进行干预,采用MTT法检测含药血清干预后软骨细胞增殖情况,SABC免疫组化检测含药血清干预后软骨细胞MKK的表达.结果:5％含药血清干预72 h后,软骨细胞的MTT检测结果为:龟甲胶组OD值为0.648±0.09,鹿角胶组为0.442±0.047,盐酸氨基葡萄糖组为0.353±0.053;对照组为0.236±0.050,差异有统计学意义(P＜0.05).MKK的SABC免疫组化检测OD值为:龟甲胶组0.330±0.018,鹿角胶组0.274±0.020,盐酸氨基葡萄糖组0.223±0.041,对照组0.171±0.041,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:1)豚鼠骨关节炎软骨细胞增殖与MKK的表达一致增长;2)龟甲胶、鹿角胶能有效上调关节软骨细胞MKK的表达,促进软骨细胞增殖,从而修复受损软骨,延缓骨关节炎进程.
