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阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响
目的:研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制.方法:3月龄wistar(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清.将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养.采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达.结果:阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1 000 ml/L时强,与雌激素组比较无显著性差异 (P＞0.05),且明显高于对照组(P＜0.05).成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1 000 ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异 (P＞0 05),且明显低于对照组(P＜0.05).结论:阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松.
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阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠25-OH-VD3、1,25-(OH)2-VD3及VDR mRNA的影响
目的 研究阿胶强骨口服液(donkey-hide glue reinforcing bone oral solution, DGRBOS) 对SD大鼠血液25-羟基维生素D3 (25-OH-VD3)、1,25-羟基维生素D3(1,25-(OH)2-VD3)和肝脏VDR基因表达的影响,探讨DGRBOS治疗骨质疏松的疗效机制.方法 6月龄SD大鼠36只, 随机分为A组(假手术组),B组(卵巢切除+生理盐水组),C组(卵巢切除+阿胶强骨口服液组),每组12只.6个月后取材检测.采用ELISA法对去势大鼠血清25-OH-VD3和1,25-(OH)2-VD3进行研究,用荧光定量PCR对肝脏VDR基因进行定量分析.结果 C组(卵巢切除+阿胶强骨口服液组)血液中25-羟基维他命D3浓度和1,25-羟基维他命D3浓度与B组(卵巢切除+生理盐水组)比较明显增高,其中对25-羟基维他命D3浓度增高尤为明显,已接近A组(假手术组),P=0.002(P＜0.01),差异有明显的统计学意义.荧光定量PCR(FQ-PCR)结果B 组与C组相比,P=0.004(P＜0.01),说明扩增效率的差异有明显的统计学意义.结论 阿胶强骨口服液增加去势大鼠血液中25-OH-VD3、1,25-(OH)2-VD3的浓度,同时上调肝脏中VDR的表达水平,是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一.
关键词： 阿胶强骨口服液 25-羟基维生素D3 1 VDR基因 骨质疏松 -
阿胶强骨口服液对去卵巢大鼠骨质疏松模型Ⅰ型胶原基因和蛋白表达的影响
目的 研究阿胶强骨口服液(donkey-hide glue reinforcing bone oral solution, DGRBOS) 对去卵巢骨质疏松模型SD大鼠I型胶原基因和蛋白表达的影响,探讨DGRBOS治疗骨质疏松的疗效机制.方法 6月龄SD大鼠36只, 随机分为A组(假手术组),B组(卵巢切除+生理盐水组),C组(卵巢切除+阿胶强骨口服液组),每组12只.6个月后取材检测.采用荧光定量PCR对I型胶原基因进行定量分析,采用免疫印迹法对I型胶原蛋白进行分析.结果 C组I型胶原蛋白与B组比较明显增高,已接近A组(P<0.01),差异有明显的统计学意义.I型胶原基因荧光定量PCR(FQ-PCR)结果B 组与C组相比,(P<0.01),说明扩增效率的差异有明显的统计学意义.结论 阿胶强骨口服液可以上调骨组织Ⅰ型胶原mRNA的表达水平,同时显著提高Ⅰ型胶原蛋白表达含量,这是阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的机制之一.
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阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响
目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制.方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清.将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养.采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达.结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml/L时强,与雌激素组比较无显著性差异(P＞O05),且明显高于对照组(P＜O.05).成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P＜0 05),且明显低于对照组(P＜O.05).结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松.
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骨折愈合过程中生长因子表达与中药阿胶复方的干预效应
背景:阿胶强骨口服液可有效治疗骨折,但其具体的药理学机制仍有待研究.在骨折愈合中,血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2是促进血管内生以及骨的合成代谢的重要耦联因子.目的:观察阿胶强骨口服液对SD大鼠胫骨骨折愈合过程中骨痂中血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨折的疗效机制.设计:完全随机对照实验.单位:华中科技大学同济医学院附属协和医院骨伤科研究室.材料:选用90只雌性3月龄SD大鼠,体质量(368±40)g,阿胶强骨口服液(主要成分为阿胶,新疆华世丹药业股份有限公司生产);阳性对照药接骨七厘片(主要成分为当归、乳香、没药、大黄、血竭、骨碎补、自然铜,珠海金沙(湖南)制药有限公司生产).方法:实验于2005-07/12在华中科技大学同济医学院中西结合骨代谢实验室(省级实验室)完成,采用三点弯曲方法造成大鼠右胫骨中段闭合性骨折后,采用完全随机法分为3组:阿胶强骨口服液组(n=30):按人鼠表面积比率换算等效计量法计算后,每只每次给予阿胶强骨口服液2 mL灌胃给药,2次/d;接骨七厘片组(n=30):用蒸馏水配制成225 g/L灌胃,2次/d;生理盐水组(n=30):给予同等容量,同等频率的生理盐水灌胃.分别在实验第4,7,14,21,28天采用免疫组织化学方法检测大鼠右胫骨骨痂区血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达的变化,计算平均吸光度值及阳性细胞数(5个视野细胞).主要观察指标:各组大鼠右胫骨骨痂区血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2表达(平均吸光度值及阳性细胞数).结果:纳入大鼠90只均进入结果分析.①血管内皮生长因子表达检测结果:实验开始后4,7,14 d,阿胶强骨口服液组大鼠及接骨七厘片组平均吸光度值均高于生理盐水组(P＜0.05～0.01),阳性细胞数变化幅度与平均吸光度值一致.②成纤维细胞生长因子2表达检测结果:实验开始后4,7 d,阿胶强骨口服液组及骨七厘片组成纤维细胞生长因子2平均吸光度值,均高于生理盐水组(P＜0.05～0.01),阳性细胞数变化幅度与平均吸光度值一致.结论:阿胶强骨口服液在骨愈合早中期可通过调节血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子2的表达,促进前成骨细胞和成软骨细胞的有丝分裂、血管内生以及骨的合成代谢达到促骨折愈合的作用.
关键词： 阿胶强骨口服液 骨折愈合 血管内皮生长因子 成纤维细胞生长因子2 -
HPLC法同时测定阿胶强骨口服液中4种氨基酸
目的 建立HPLC法同时测定阿胶强骨口服液(阿胶、黄芪、熟地等)中4种氨基酸的含有量.方法 该药物0.1 mol/L盐酸提取液的分析采用Welch XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈(93∶7),B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;检测波长254 nm;柱温43℃.结果 L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸分别在0.8～80 μg/mL(r=0.999 9)、1.6～160 μg/mL (r=0.999 8)、0.7～70 μg/mL(r=0.999 8)、1.2 ～ 120 μg/mL(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率(n=9)分别为100.2％、99.7％、100.1％、100.5％,RSD分别为1.6％、1.5％、1.3％、1.5％.结论 该方法灵敏准确,重复性和稳定性良好,可用于阿胶强骨口服液的质量控制.
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阿胶强骨口服液对骨折愈合过程VEGF和FGF-2表达的影响
目的:研究阿胶强骨口服液(DGRBOS)对SD大鼠胫骨骨折愈合过程中骨痂中血管内皮生长因子(VEGF)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨折的疗效机制.方法:3月龄SD大鼠90只,采用三点弯曲方法造成右胫骨中段闭合性骨折后,随机分为阿胶强骨口服液,阳性药物,及生理盐水对照组,分别在实验的第4、7、14、21、28天时,采用免疫组织化学方法检测VEGF和FGF-2表达的变化.结果:阿胶强骨口服液组和阳性对照组在骨折后14d VEGF的表达达到峰值,两者间比较无显著性差异(P＜0.05),与阴性对照组比较存在显著性差异(P＜0.01).阿胶强骨口服液组在骨折后7 d FGF-2的表达达到峰值,与阴性对照组比较差异显著(P＜0.01),与阳性对照组比较无显著性差异(P＜0.05).结论:阿胶强骨口服液在骨愈合早期、中期可通过在分子水平上上调节VEGF和FGF-2的表达,促进前成骨细胞和成软骨细胞的有丝分裂、血管内生以及骨的合成代谢达到促骨折愈合的作用.
关键词： 阿胶强骨口服液 骨折愈合 血管内皮生长因子 成纤维细胞生长因子2 -
ELSD-HPLC法测定阿胶强骨口服液中黄芪甲苷的含量
目的 建立测定阿胶强骨口服液中黄芪甲苷含量的方法.方法 采用ELSD-HPLC测定法.色谱柱为Diamonsil C18柱(150mm×4.6mm,5um);流动相为乙腈-水(35:65,V/V);流速为1.0mL·min-1;柱温为30℃;漂移管温度为100℃,氮气流速为2.7L· min-1.结果 黄芪甲苷在0.14mg·mL-1-0.24mg,mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 4).精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.70％;平均加样回收率为99.0％,RSD=1.31％(n=9).结论 该方法测定黄芪甲苷含量简单、快速、准确、重复性好,可用于阿胶强骨口服液质量控制方法.
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阿胶强骨口服液含药血清对大鼠成骨细胞的影响
目的:探讨喂饲阿胶强骨口服液大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用.方法:在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的阿胶强骨口服液血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能.结果:阿胶强骨口服液血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量.结论:阿胶强骨口服液血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能.
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阿胶强骨口服液含药血清对人成骨细胞钙离子摄取和钙化能力的影响
根据中医医"肾主骨"理论,既往从整体和骨组织水平的研究认为补肾中药可以通过调节下丘脑-垂体-多个靶腺轴的功能,促进肠钙吸收,调节体内微量元素的平衡,改善骨的内部结构等机制防治骨质疏松[1-2],但其他对人成骨细胞钙离子摄取和钙化能力影响的机制尚不清楚.本试验从细胞学水平观察补肾中药阿胶强骨口服液对人成骨细胞钙代谢的影响,为"肾主骨"理论提供客观依据.
