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阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响
目的:研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨胶囊治疗骨质疏松的分子机制.方法:3月龄wistar(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清.将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养.采用MTT比色分析法、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达.结果:阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清1 000 ml/L时强,与雌激素组比较无显著性差异 (P＞0.05),且明显高于对照组(P＜0.05).成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1 000 ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异 (P＞0 05),且明显低于对照组(P＜0.05).结论:阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松.
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伤科接骨片对兔下颌骨缺损修复中骨保护素及配体基因表达的影响
目的 探讨伤科接骨片在下颌骨缺损修复中的作用机制.方法 健康雄性新西兰兔72只,随机分为正常对照组(24只)、模型组(24只)和伤科接骨片组(24只),建立下颌骨缺损模型.正常对照组、模型组动物给予正常饲料,伤科接骨片组动物给予伤科接骨片饲料.分别于建模后第7、14、28、56天处死相同例数动物( n =6),收集下颌骨缺损处骨组织块.采用RT-PCR技术检测骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)基因表达,免疫组化检测骨组织染色强度和面积.结果 与正常对照组比较,模型组兔下颌骨组织OPG mRNA表达在建模后第7天显著上调(P <0.05),OPGLmRNA表达在建模后第14天显著上调(P <0.05);与模型组比较,伤科接骨片组建模后第14、28、56天 OPGmRNA表达均上调明显(P <0.05),骨组织阳性染色更强,面积更广,建模后第14天 OPGLmRNA表达下调明显(P <0.05),骨组织阳性染色更弱,面积更小,OPG mRNA/OPGL mRNA比值在建模后第14、28、56天明显上调(P <0.05).结论 伤科接骨片促进下颌骨缺损修复的作用可能与其调节OPGmRNA、OPGLmRNA表达水平有关.
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铁离子对人成骨细胞RANKL／OPG基因及蛋白表达的影响
目的：研究人成骨细胞（ hFOB 1．19）在不同铁离子状态下RANKL／OPG基因及蛋白的表达。方法成骨细胞株（hFOB1．19）在DMEM／F－12培养基培养传代至第3代后，用不同终浓度枸橼酸铁铵（50、100、200μmol／L）加入细胞培养基中干预24 h，用RT－PCR方法和免疫印迹法（ Western Blot）检测干预后成骨细胞的RANKL、OPG mRNA和蛋白表达并计算RANKL／OPG比率。结果 RT－PCR检测结果显示，对照组、50、100、200μmol／L组RANKL／OPG mRNA表达比分别为0．56±0．13、0．58±0．01、0．69±0．01、1．84±0．92；Western blot结果显示，对照组、50、100、200μmol／L组RANKL／OPG蛋白表达比分别为0．82±0．66、0．82±0．64、1．09±0．11、1．25±0．14。统计学分析显示，在mRNA和蛋白水平，100和200μmol／L浓度的枸橼酸铁铵干预后RANKL／OPG比值明显高于对照组（ P＜0．05），50μmol／L枸橼酸铁干预后与对照组差异无统计学意义。结论不同浓度枸橼酸铁铵可以影响人成骨细胞RANKL／OPG基因及蛋白的表达，进而可能影响骨形成和骨吸收。
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骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的表达
目的 研究骨保护素和骨保护素配体在人骨髓基质细胞向成骨细胞诱导分化过程中的表达情况,探讨其在骨重建过程中的调节作用.方法 实验中采用梯度离心法和酶消化法分别获得人骨髓基质细胞和成骨细胞,并将骨髓基质细胞向成骨细胞方向诱导分化.通过形态学观察、生化指标检测、细胞染色和矿化结节测定等方法,确定骨髓基质细胞的功能状态和分化程度.采用RT-PCR和Western blot方法,检测骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中骨保护素和骨保护素配体的表达情况.结果 获得的骨髓基质细胞和成骨细胞生长状态良好,生化指标稳定.骨髓基质细胞分化后,碱性磷酸酶分泌明显增加,可以产生大量的矿化结节,具有成熟成骨细胞的表型特征.RT-PCR和Westernblot检测,在骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素在mRNA和蛋白质水平的表达明显升高,而骨保护素配体的表达则逐渐下降.细胞中OPGmRNA表达在第21天时达到大,约为未分化时水平的2.5倍.而OPGLmRNA表达减少为未分化时1/2;细胞中OPG的蛋白质表达水平提高约为未分化细胞的6倍.统计学分析,P＜0.01,差异有显著性.结论 在人骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中,骨保护素表达逐渐升高而骨保护素配体表达显著降低,两者比值的逐渐增大,从而发挥促进骨形成,抑制骨吸收的作用,这可能是协调骨重建周期有序进行的重要机制之一.
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细胞因子、激素调节骨保护素和骨保护素配体基因表达及破骨细胞功能的研究进展
破骨细胞(Osteoclast OC)是骨吸收细胞,已知其功能与分化的调节是由成骨细胞(Osteoblast OB)完成的.发现了其调节的新的分子学机理.破骨细胞的分化依赖于成骨/基质细胞,在研究破骨细胞的过程中发现了一种由成骨/基质细胞产生的因子-骨保护素(Osteoporotegerin OPG)及骨保护素配体(Re-ceptor activator of nuclear facor-κB ligand,RANKL),OPG属于肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)受体超家族成员,RANKL是OPG的配体.在过去发现的调节成骨细胞、破骨细胞的众多因子被认为都是通过直接作用于成骨细胞而调节OPG和RANKL这两个因子之间的浓度的增加与减少进而完成调节功能的.
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阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响
目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制.方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清.将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养.采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达.结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml/L时强,与雌激素组比较无显著性差异(P＞O05),且明显高于对照组(P＜O.05).成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P＜0 05),且明显低于对照组(P＜O.05).结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松.
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骨保护素及其配体在牙正畸中作用的研究进展
骨保护素(OPG)是生理性的抑制破骨细胞性骨吸收的因子,而骨保护素配体(0PGL)是能直接诱导破骨细胞分化发育并参与破骨细胞功能调节的细胞因子.牙周膜细胞可表达OPG和OPGL,揭示了在正畸牙移动中,牙周膜细胞可能是通过OPG/OPGL系统来调节牙槽骨代谢的.OPG和0PGL在多种骨病和牙正畸的治疗中具有很大潜力,具有良好的临床应用前景.
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骨保护素配体在大鼠牙龈炎症组织中的表达
目的 观察骨保护素配体(Osteoprotegerin Ligand,OPGL)在鼠炎症性牙龈组织中的表达.方法 12只Wistar大鼠随机分为实验组和正常对照组.实验组用丝线结扎大鼠第二磨牙并喂高糖水方法建立牙龈炎模型,术后1周处死动物,制作组织标本,用免疫组织化学方法检测OPGL在大鼠牙龈组织中的表达.结果 实验组术后3 d局部检查即显示牙龈组织探诊出血;术后1周牙龈探诊出血明显,免疫组织化学结果显示OPGL在鼠炎症性牙龈组织中的阳性表达细胞明显增多;OPGL表达细胞主要为中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、牙龈上皮细胞、成纤维细胞.对照组牙龈组织内OPGL阳性表达细胞数目较少.结论 大鼠炎症性牙龈组织中OPGL表达升高,提示OPGL可能与牙龈炎症有关.
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成骨/基质细胞在破骨细胞分化中的作用
骨组织微环境中,成骨/基质细胞表达的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)是调节骨代谢的重要因子.研究表明,成骨/基质细胞的OPG/OPGL相对表达水平与破骨细胞的分化、成熟及骨吸收直接相关.各种刺激骨吸收的生物、物理因素均通过调节成骨/基质细胞的OPG/OPGL相对表达活性,影响破骨细胞的分化和成熟.
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伤科接骨片对兔下颌骨缺损修复中骨保护素及配体表达的影响
目的:探讨伤科接骨片在下颌骨缺损修复中的作用机制.方法:健康雄性新西兰兔72只,随机分为正常对照组(24只)、模型对照组(24只)和伤科接骨片组(24只),建立下颌骨缺损模型.正常对照组、模型对照组动物给予正常饲料,伤科接骨片组动物给予伤科接骨片饲料.分别于建模后7、14、28、56天处死相同例数动物(n=6),收集下颌骨缺损处骨组织块.采用免疫组织化学技术检测骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(Osteoprotegerin ligand,OPGL)表达变化.结果:与正常对照组比较,模型对照组OPG、OPGL表达分别于建模后第7、14天显著提高(P＜0.05),伤科接骨片组OPG表达于建模后第7、14、28、56天均显著提高(P＜0.05),OPGL表达则提高不明显(P＞0.05)；与模型对照组比较,伤科接骨片组OPG表达于建模后第14、28、56天均显著提高(P＜0.05),OPGL表达于建模后第14天显著降低(P＜0.05),OPG/OPGL比值在建模后第14、28、56天显著上升(P＜0.05).结论:伤科接骨片可能通过影响OPG、OPGL的表达而促进下颌骨缺损修复.
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前列腺素E2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响
目的研究前列腺素E2(PGE2)对人成骨瘤细胞MG-63分泌的细胞因子白介素-6(IL-6)、骨保护素(Osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)表达的调节,探讨PGE引发骨吸收的机制.方法体外培养成骨瘤细胞株(MG-63),分别给予不同剂量的PGE2进行干预试验,用钙估法显示成骨细胞碱性磷酸酶的表达;用MTT法测定PGE2对MG-63细胞刺激增殖作用;提取总RNA进行半定量逆转录PCR分析,检测IL-6,OPG,RANKL基因表达水平的改变.结果 PGE2减少碱性磷酸酶的表达,抑制MG-63细胞的增殖,并呈剂量依赖性的上调IL-6mRNA,RANKL/OPG mRNA水平.结论 PGE2可以通过IL-6,RANKL/OPG mRNA基因水平的上调,促进骨吸收,此可能为PGE2导致溶骨性病变的重要发病机制.
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骨保护素配体在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达
目的 观察骨保护素配体(osteoprotegerin ligand,OPGL)在燃煤型氟中毒大鼠骨组织中的表达,、讨燃煤型氟中毒对大鼠OPGL表达的影响.方法 以SD大鼠为研究对象,按体质量均衡随机分为5组(组内雌雄各半):高氟组、高氟偏食组、低氟组、低氟偏食组、对照组(实验中所设偏食组为相对于对照组的低钙偏食).以氟中毒病区煤烘玉米为主要饲料,复制氟中毒动物模型.对其胫骨干骺端进行常规组织切片,HE染色观察组织学改变:用免疫组织化学方法检测OPGL在大鼠胫骨干骺端的表达.氟离子选择电极法测定大鼠牙氟、骨氟.结果 ①OPGL表达水平:高氟组(118.62±1.27)、高氟偏食组(97.62±1.22)、低氟组(156.25±1.02)、低氟偏食组(145.25±1.25)大鼠干骺端OPGL表达增高,与对照组(189.23±1.25)比较差异有统计学意义(P＜0.05).高氟偏食组与高氟组、低氟偏食组与低氟组比较,OPGL表达升高且差异有统计学意义(P＜0.05).②骨病理改变:高氟、低氟组大鼠骨皮质厚度增加、密度增高,骨小梁成骨细胞数轻度增加,显示成骨活跃;高氟偏食组大鼠胫骨骨皮质密质骨出现松质化.③骨密度:高氟偏食组大鼠骨密度低于对照组(P＜0.05),其余各实验组高于对照组,高氟组、低氟组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).④牙氟、骨氟:各染氟组牙氟、骨氟均高于对照组(P＜0.05).结论 ①过量氟造成骨转换增高,氟可通过增强OPGL的表达来加强破骨细胞的活性;②低钙偏食可使氟骨症破骨性骨吸收增强.
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骨保护素及其配体检测在高转换型肾性骨病中的临床意义
目的:观察高转换型肾性骨病中骨保护素(OPG)及其配体(RANKL)的表达,对骨病理进行骨形态计量学分析,并与外周血各项反映骨代谢的生化指标进行相关分析.方法:选择24例慢性肾衰竭尿毒症患者和3名正常人进行髂骨活检术,获得骨标本.采用免疫组化方法检测OPG和RANKL蛋白质表达,用全自动图像分析系统进行骨组织形态计量学测定,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测外周血OPG、可溶性RANKL(sRANKL)水平,并对慢性肾衰竭尿毒症患者及对照者的检测结果进行对比分析.结果:24例慢性肾衰尿毒症患者经骨病理学检查证实均为高转换型骨病,以破骨细胞活化形成骨吸收陷窝伴或不伴骨矿化不全为特点.免疫组化显示,尿毒症患者骨组织中以RANKL阳性表达为主.成骨细胞面积与碱性磷酸酶水平(AKP)呈显著正相关,而类骨质厚度与白蛋白水平呈显著负相关.结论:高转换型肾性骨病中,甲状旁腺激素(PTH)的溶骨作用可能是通过OPG/RANKL系统介导的,但外周血的OPG/sRANKL水平并不能预测该类骨病.
关键词： 高转换型肾性骨病 骨保护素 骨保护素配体 继发性甲状旁腺机能亢进 -
骨保护素基因敲除对小鼠左心室收缩功能的影响
目的 探讨左心室收缩功能与骨保护素配体(RANKL)和雌激素在骨保护素(OPG)基因敲除小鼠引起骨质疏松之间的关系.方法 建立OPG基因敲除小鼠模型,并设对照组;ELISA法检测小鼠血清 OPG 和RANKL水平,放射免疫法检测血清雌激素水平;利用心脏超声对心功能进行评价.结果 与对照组比较,OPG基因敲除组小鼠的心脏质量、心脏质量与体质量的比值、左室心肌细胞的横切面积均明显增大(P<0.01),左心室收缩末期内径和左心室收缩末期容积也明显增大(P<0.05).OPG基因敲除组小鼠血清RANKL浓度明显高于对照组(P<0.001),两组血清雌激素水平则无显著差异(P>0.05).结论 OPG缺乏导致血清RANKL水平升高,左心室心肌细胞肥大,但不影响血清雌激素水平.
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人甲状旁腺激素调节骨保护素及其配体基因表达的PKA、PKC信号传导通路研究
目的 探讨PTH调节成骨细胞OPG/RANKL mRNA表达的信号传导通路.方法院采用原代培养的胎鼠颅盖骨成骨细胞,在细胞培养5 d和6 d后,分别加入抑制PKC和PKA传导通路的Calphostin-C 500 nmol/L 24 h和H-89 30 μmol/L 4 h.在细胞培养5 d后,加入刺激PKC传导通路的PMA10-7mol/L 24 h后,分别加入和不加入hPTH(1-34)100 ng/ml,继续培养2 h和6 h分别收集细胞,采用RT-PCR方法半定量检测OPG和RANKL基因的表达变化.结果 PKA通路抑制剂H-89 30 μmol/L能显著改变100 ng/ml hPTH(1-34)导致的OPG和RANKL基因的表达趋势,表现为上调OPG基因和下调RANKL基因(35%和59%).而PKC通路激动剂和抑制剂对100 ng/ml hPTH(1-34)导致的OPG和RANKL基因的表达趋势无影响.结论 hPTH持续刺激上调RANKL基因,下调OPG基因的表达,主要是通过PKA通路介导,在此过程中,PKC通路无作用.
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超高分子聚乙烯颗粒对成骨细胞基因表达的影响
目的 探讨超高分子聚乙烯(UHMWPE)颗粒对体外培养的小鼠成骨细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)及其受体骨保护素(OPG)基因表达的影响.方法 实验分为空白对照组和UHMWPE颗粒干预组,分别在培养的第3、5、7天时利用RT-PCR和Western blotting法观察成骨细胞两种目的基因(OPG、 RANKL)的mRNA表达和蛋白表达强度变化.结果 UHMWPE颗粒呈剂量依赖性上调成骨细胞OPG和RANKL表达,RANKL/OPG比率随着UHMWPE颗粒刺激的剂量增加和时间延长而增高.结论 UHMWPE颗粒通过调节成骨细胞对RANKL、OPG两者的分泌间接地调节破骨细胞活性,从而影响骨代谢,这可能是UHMWPE颗粒引起人工关节假体松动的重要机制之一.
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骨保护素/骨保护素配体在大鼠创伤性股骨头坏死中的表达及意义
[目的]探讨大鼠创伤性股骨头坏死模型中OPG/OPGL蛋白表达及意义.[方法]6个月龄SD大鼠32只,雌雄不限.分组:实验组按术后1、2、4、6周4个时间点将动物随机分成4组,每组8只.对照组采用自身非实验侧股骨头做正常对照.采用圆韧带离断方法制备大鼠创伤性股骨头坏死动物模型;分别于术后1,2,4,6周处死动物.光镜下观察股骨头坏死病理形态学改变;采用CMIAS真彩色医学图像分析系统检测骨髓腔内脂肪组织与造血组织比值并计数骨组织内空骨陷窝百分率;免疫组化技术检测OPG/OPGL蛋白在股骨头坏死组织中的表达.[结果]成功的复制出大鼠股骨头坏死进展期模型,呈现出典型股骨头坏死不同时期病理改变;股骨头坏死不同时期实验组空骨陷窝百分率高于对照组(P<0.05);实验组骨髓腔内脂肪组织与造血组织的面积比值高于对照组(P<0.05);免疫组化检测结果显示实验组OPG蛋白在股骨头坏死不同时期表达的光密度值(OD值)均明显低于对照组(P<0.05);OPGL蛋白表达高于对照组(P<0.05).[结论](1)本实验成功复制了大鼠股骨头坏死模型并在一定程度上反映了股骨头坏死的病理变化过程;(2)股骨头坏死局部OPG、OPGL表达水平与病变严重程度密切相关,OPG表达随病程的延长逐渐降低;而OPGL表达水平则相反.提示OPG的过度表达可抑制破骨细胞功能,减少骨吸收;反之则促进骨吸收.如能提高坏死局部OPG浓度可以抑制骨丢失,将有助于股骨头修复,可能为股骨头坏死的早期治疗提供新方法.
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钴铬离子对成骨细胞细胞毒性及对其分泌骨保护素及其配体的影响
[目的]观察金属Co2+、Cr3+离子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)的细胞毒性以及在Co2+、Cr3+离子刺激下对成骨细胞分泌RANKL、OPG的影响.[方法]体外培养成骨细胞.MTT法检测细胞活力.ELISA法对培养上清液RANKL、OPG浓度进行检测.[结果]MTT显示与对照组相比,钴铬离子使成骨细胞的细胞活力明显下降.成骨细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,24 h、48 h后:OPG的分泌分别增长32.1%、17.8%(P<0.05);RANKL的分泌量分别是对照组的61.6倍、13.8倍(P<0.05);RANKL/OPG比率分别升高51.4倍、12.3倍.[结论]金属离子对成骨细胞有细胞毒性,可刺激成骨细胞释放RANKL、OPG,并上调RANKL/OPG的比值.
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骨保护素和骨保护素配体在入骨髓基质细胞分化过程中的表达及药物影响
本实验旨在观察骨保护素,OPG,和骨保护素配体(OPGL)在人骨髓基质细胞培养和诱导分化过程中的表达情况和相关药物的影响,探讨其在骨重建过程中的调节机制.
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骨保护素及其配体在骨改建中的作用
维持骨骼的完整性需要破骨细胞(OC)的骨吸收和成骨细胞(OB)的骨形成作用间的动态平衡和偶联,许多激素及生长因子细胞因子参与这些过程的调控,可单独或共同作用于OB和OC的增殖、分化、活化、衍变、存活、凋亡各个阶段,均衡两类细胞的数量和活性,使骨量保持动态平衡,其中骨保护素(OPG)和骨保护素配体(OPGL)/破骨细胞分化因子(ODF)越来越受到重视,尤其在口腔中的作用成为研究热点,现将有关研究进展综述如下.
