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金属离子对单核/巨噬细胞细胞活性及其膜上RANK表达的影响
背景:与其他配伍的假体一样,金属一金属假体在使用过程中也会产生大量的磨损颗粒和金属离子,其中金属离子以钴和铬离子较为常见,可导致假体周围骨溶解,引起假体无菌性松动.目的:观察Co~(2+)、Cr~(3+)离子对体外培养小鼠单核,巨噬细胞(RAW264.7)的细胞活性及其膜上RANK表达的影响.方法:体外培养单核,巨噬细胞(RAW264.7),采用金属钴铬离子对单核,巨噬细胞进行干预,不同时间点用-四唑盐比色方法检测细胞活性并以半定量反转录一聚合酶链反应方法测定RANK mRNA的表达量.结果与结论:四唑盐比色实验结果显示,与对照组相比,Co~(2+)、Cr~(3+)可使单核,巨噬细胞的细胞活性明显下降.单核/巨噬细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,钴铬离子组单核,巨噬细胞RANKmRNA在12 h表达增强(P<0.05),24 h达到高峰(P< 0.05),48 h较24 h表达下降(P<0.05).结果提示,金属离子对单核/巨噬细胞有细胞毒性,且能够刺激单核/巨噬细胞RANK mRNA的表达,为单核/巨噬细胞向具有骨质吸收功能的破骨样细胞转化提供必要的前提条件.
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假体磨损颗粒钴铬离子影响成骨细胞增殖及RANKL、骨保护素的表达
背景:金属-金属假体置入体内后可以发生腐蚀或磨损,释放镍、钴、铬、钛等金属离子,诱导局部炎性因子的释放.目的:观察Co2+、Cr3+对小鼠成骨细胞增殖的影响,以及成骨细胞暴露在Co2+ 、Cr3+条件下RANKL、骨保护素基因的表达.方法:体外培养成骨细胞,实验分两组,对照组给予生理盐水,离子组给予钴、铬离子干预.结果与结论:显微镜直接计数法显示干预后1~6 d对照组随时间推移细胞数目显著增加,离子组则增加不明显.共培养24,48 h后,RT-PCR结果显示离子组RANKL、骨保护素基因表达较对照组均增加,以RANKL增加更显著(P < 0.05),RANKL/OPG mRNA的比率也明显增加.提示金属离子对成骨细胞的增殖有显著抑制作用,且可刺激成骨细胞RANKL、骨保护素mRNA的表达.
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薄膜扩散技术检测黄芩中的钴离子含量
基于费克扩散定律的薄膜扩散技术(DGT)是一种新兴起的分析技术,采用可渗入离子的薄膜将结合相与待测溶液隔开,控制离子扩散,进行定量富集,然后联合原子吸收测定.应用薄膜扩散技术计算公式,可以有效测定待测溶液中痕量金属离子的含量.本文以该技术确定了检测黄芩中钴离子(Co2+)的佳实验条件,并将检测结果与传统技术检测结果相比较,结果表明薄膜扩散技术对黄芩中水合钴离子Co2+和某些简单有机Co2+络合物有较好的富集效果,本文为薄膜扩散技术在中草药痕量元素分析中的研究和应用开启了新篇章.
关键词： 费克扩散定律薄膜扩散技术 黄芩 钴离子 -
钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用
为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层析分离纯化制备较大量的hIGF-1融合蛋白.结果显示,钴亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时表现出更好的可操作性与纯化效果,线性放大条件后分离纯化效果稳定,制备hIGF-1融合蛋白产物纯度约为95％,蛋白获得率约为10.78％.研究初步建立了切实可行的钴金属螯合亲和层析分离纯化制备hIGF-1融合蛋白的工艺.
关键词： 人胰岛素样生长因子-1 金属螯和亲和层析 固相化金属离子亲和层析 六聚组氨酸 纯化 镍离子 钴离子 -
钴铬离子对成骨细胞细胞毒性及对其分泌骨保护素及其配体的影响
[目的]观察金属Co2+、Cr3+离子对小鼠成骨细胞(MC3T3E1)的细胞毒性以及在Co2+、Cr3+离子刺激下对成骨细胞分泌RANKL、OPG的影响.[方法]体外培养成骨细胞.MTT法检测细胞活力.ELISA法对培养上清液RANKL、OPG浓度进行检测.[结果]MTT显示与对照组相比,钴铬离子使成骨细胞的细胞活力明显下降.成骨细胞暴露在钴铬离子下,与对照组相比,24 h、48 h后:OPG的分泌分别增长32.1%、17.8%(P<0.05);RANKL的分泌量分别是对照组的61.6倍、13.8倍(P<0.05);RANKL/OPG比率分别升高51.4倍、12.3倍.[结论]金属离子对成骨细胞有细胞毒性,可刺激成骨细胞释放RANKL、OPG,并上调RANKL/OPG的比值.
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ERK信号通路调节金属离子诱导成骨细胞RANKL表达的实验研究
目的 探讨小鼠成骨细胞暴露于金属钴、铬离子条件下对RANKL表达的影响及ERK信号通路在这一过程中作用,寻找防治假体周围骨溶解的方法.方法 体外培养成骨细胞,细胞密度为1×105 个/ml.根据培养液的不同,实验分三组:对照组给予生理盐水(A组),实验组1给予钴、铬离子干预(B组),实验组2给予钴、铬离子+ERK信号通路抑制剂PD98059干预(C组),共培养24 h、48 h后,用RT-PCR和ELISA法对RANKL进行基因水平和分泌蛋白水平检测.结果 RT-PCR结果显示:三组各个时间点均可见RANKL的表达, B、C组RANKL 基因表达较A组均增加,C组较B组RANKL基因表达明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01).ELISA结果显示:24 h后B、C组成骨细胞RANKL蛋白的分泌量分别是A组的61.6倍、44.4倍;48 h后B、C组成骨细胞RANKL蛋白的分泌量分别是A组的13.8倍、10.5倍,差异均有统计学意义(P<0.01).C组在培养24 h、48 h后RANKL的表达与B组相比分别下降约27.6%、23.6%,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 金属离子可刺激成骨细胞RANKL mRNA的表达并促进RANKL蛋白的分泌;ERK信号通路抑制剂PD98059可一定程度抑制RANKL的表达,对减少假体周围骨溶解的发生可能起重要作用.
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钴离子对人肾小管上皮细胞毒性及Bax、Bcl-2基因表达变化的实验研究
目的:研究Co2+对人肾小管上皮细胞的毒性及对凋亡基因Bax、Bcl-2表达变化的影响.方法:体外培养肾小管上皮细胞,以5种浓度(0～10μmol/L)的Co2+培养液培养细胞12 h、24 h、48 h.倒置显微镜下观察和记录细胞生长状态,采用MTT法检测各培养组在不同时间点的细胞增殖率,RT-PCR法检测各培养组在不同时间点Bax、Bcl-2的表达变化,以评价Co2+的细胞毒性.结果:当Co2+作用浓度在7.5 μmol/L以下,观察时间内对细胞无毒性;在7.5 μmol/L以上时,刺激24 h以后对细胞有轻度毒性.随着Co2+作用浓度和时间的增加,各实验各组Bax mRNA表达量逐渐上调,Bcl-2 mRNA表达量逐渐下调,Bax/Bcl-2的比值升高.结论:Co2+抑制肾小管上皮细胞的增殖,低浓度Co2+对肾小管上皮细胞不存在毒性作用,高浓度时(≥7.5 μmol/L对细胞有轻度毒性,诱导细胞发生凋亡.
