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六聚组氨酸文献资料
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钴金属螯合亲和层析在hIGF-1融合蛋白分离纯化中的应用
为探讨钴金属螯合亲和层析应用于分离纯化制备人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)的可行性与纯化条件,以重组工程菌E.coli DH5α/pET32a(IGF-1)为对象,使用钴亲和层析技术分离纯化其表达产物并与镍亲和层析比较,在此基础上尝试应用钴亲和层析分离纯化制备较大量的hIGF-1融合蛋白.结果显示,钴亲和层析在分离纯化hIGF-1融合蛋白时表现出更好的可操作性与纯化效果,线性放大条件后分离纯化效果稳定,制备hIGF-1融合蛋白产物纯度约为95％,蛋白获得率约为10.78％.研究初步建立了切实可行的钴金属螯合亲和层析分离纯化制备hIGF-1融合蛋白的工艺.
关键词： 人胰岛素样生长因子-1 金属螯和亲和层析 固相化金属离子亲和层析 六聚组氨酸 纯化 镍离子 钴离子 -
六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响
目的研究六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响.方法采用PCR法扩增目的基因,克隆入pMD18-T载体后进行序列测定.构建原核表达载体pET28-His-Cpn10-IL-4与pET28-Cpn10-His-IL-4,在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达两种在不同位置带有六聚组氨酸(His-tag)的重组白细胞介素4(rhIL-4)融合蛋白.用SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达产物,采用镍亲和层析的方法纯化两种重组融合蛋白.结果 Western 印迹证实两种融合蛋白均可与抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,但用镍亲和层析方法可以很好地分离纯化融合蛋白His-Cpn10-IL-4,却不能纯化融合蛋白Cpn10-His-IL-4.结论应用镍亲和层析的方法纯化融合蛋白时,His-tag在融合蛋白中的位置对蛋白质的纯化非常重要,His-tag可以在融合蛋白的N端和C端,但不能在中间.
