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化学法制备猕猴去细胞同种异体神经支架
目的:应用化学萃取法制备的同种异体神经移植物存小动物及低等哺乳类动物实验中取得良好的效果,但在萃取猕猴粗大、长段周围神经方面尚末形成标准化程序.目的:研究猕猴化学去细胞同种异体神经制备方法,以期获得低免疫反应的同种异体神经移植物.设计、时间及地点:观察实验,于2003 01/09在中山大学动物实验中心完成.材料:取2.5岁,3.5 kg左右,雄性健康猕猴2只,由广州九佛动物研究中心提供.方法:取4段长5 cm,直径3.5～4.0 mm的坐骨神经,以4%triton-100和4%脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行萃取,萃取神经及未萃取神经于中段取材,行苏木精-伊红染色,纤维素染色,砂罗铬花青染色,S-100免疫组织化学染色,在扫描电镜及透射电镜下舰察超微结构.主要观察指标:神经的组织学及形态学观察.结果:萃取2次后的去细胞神经具有良好的黏性和弹性,细胞和髓鞘被彻底清除,神经纤维支架被保留,成为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的基底膜管架结构.而萃取1次不能完全去除抗原成分,萃取3次则破坏神经纤维支架.结论:应用4%triton-100及4%脱氧胆酸钠萃取2次,可去除猕猴长段、粗人周围神经中的细胞和髓鞘而保留神经的基底膜管和纤维支架结构.
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透明质酸在去细胞异体神经移植中对瘢痕的影响
背景：在组织相容性、免疫排斥反应及修复后瘢痕影响程度等方面，去细胞异体神经移植修复周围神经缺损更接近自体神经。目前，已经有透明质酸应用于自体周围神经修复的研究，尚无透明质酸应用于异体神经移植修复周围神经损伤的报道。
目的：探讨透明质酸在去细胞同种异体神经移植修复大鼠坐骨神经缺损中对吻合口瘢痕形成的影响。
方法：36只SD大鼠随机分为3组，每组12只。3组大鼠均选取左后肢手术，手术将坐骨神经锐性切断后造成10 mm神经缺损。实验组异体神经移植后在两端吻合口应用透明质酸，对照组行单纯异体神经移植手术，自体神经移植组将自体神经切断后远近端倒置吻合。术后观察近端吻合口的愈合情况，评估近端吻合口的瘢痕成分。
结果与结论：①大体观察：大鼠皮肤，肌肉筋膜愈合组间无差别，周围组织粘连情况比较，实验组优于对照组(P<0.05)；②Masson染色：各组神经外膜均可见胶原沉积，实验组神经外膜胶原纤维排列整齐有序，胶原纤维量略少；对照组大量胶原纤维成堆积状，排列紊乱；自体神经移植组神经外膜胶原纤维较多，胶原纤维排列较整齐，但胶原纤维较稀疏；③Ⅰ，Ⅲ型胶原免疫组化灰度值：Ⅰ型胶原灰度值实验组高于对照组(P<0.05)，Ⅲ型胶原灰度值实验组低于对照组(P<0.05)，Ⅰ型+Ⅲ型胶原灰度值实验组、对照组及自体神经移植组比较差异无显著性意义(P>0.05)；④结果提示，透明质酸在周围神经损伤修复过程中对Ⅰ，Ⅲ型胶原沉积具有调控作用，可增加Ⅲ型胶原沉积，减少Ⅰ型胶原沉积，从而减少瘢痕形成。 -
改良化学去细胞同种异体神经制备方法的实验研究
[目的]改进去细胞异体神经化学萃取制备方法,制备出细胞及髓鞘去除完全、神经机构保存完好的去细胞异体神经移植物.[方法]SD大鼠14只,取双侧坐骨神经(共28根),分3组进行化学萃取去细胞处理:Sondell法组(10根)、改良法组(10根)和对照组(8根).Sondell法组所用萃取剂为Triton X-100和脱氧胆酸钠;改良法组所用萃取剂为Triton X-200、SB-10和SB-16;对照组未进行化学处理.处理后神经行HE染色、快蓝染色、基底膜素免疫组化染色及环境扫描电镜观察,并从去细胞程度、髓鞘染色分级和结构完整性三方面综合评价.[结果]在去细胞异体神经物理性状方面,改良法制备的去细胞异体神经韧性弹性略好于Sondell法;HE染色表明,2种方法的去细胞效果均较好,但改良法对神经结构的破坏较小;快蓝染色、基底膜素免疫组化染色、环境扫描电镜结果均表明,改良法在对髓鞘的去除、基底膜素的保留及神经结构的保存方面均优于Sondell法;综合质量评分结果表明,2种方法在去细胞效果方面相似(P1＞0.05),髓鞘去除及神经结构的保存方面改良法优于Sondell法(P2、P3＜0.05),综合去细胞程度、髓鞘染色分级和结构完整性3方面,改良法制备的去细胞异体神经质量优于Sondell法(P4＜0.05).[结论]综合运用萃取剂Triton X-200、SB-10和SB-16的化学萃取方法,是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,能够制备出免疫物质清除完全、神经结构较好保存的去细胞异体神经移植物,为自体神经移植找到了较好的替代解决方法.
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化学去细胞同种异体神经制备的改良及桥接周围神经缺损效果
目的:改良去细胞异体神经的制备方法,研制出一种理想的自体神经移植替代物. 方法:将用Sondell法(Triton X-100、脱氧胆酸钠)和改良法[Triton X-200,sulfobetaine-10(SB-10),sulfobetaine-16(SB-16)]两种方法制备的去细胞异体神经用HE染色、髓鞘染色、免疫组化染色、扫描电镜检查等进行组织学评价. 然后将制备的神经桥接大鼠坐骨神经缺损,从坐骨神经指数、神经电生理、运动终板染色等方面评价神经移植后的再生效果. 结果:改良法制备的神经细胞及髓鞘去除彻底、结构保存完好;移植后神经再生良好,优于Sondell法制备的神经,达到了与自体神经移植相当的再生效果. 结论:综合运用萃取剂Triton X-200,SB-10和SB-16的改良化学萃取方法是一种较为理想的去细胞异体神经制备方法,其制备的异体神经移植物可望替代自体神经移植.
