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棕榈酰胂酸基脂质体对培养的癌细胞和正常细胞活力的影响
1 引言三氧化二砷(As2O3)用于治疗疾病已有几百年的历史.已证明As2O3作为一种非常有效的抗白血病药物,能够大大减低培养的几种类型癌细胞的活力和生长,和/或导致细胞凋亡.
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矢车菊素3-葡萄糖苷膜修饰脂质体的制备及其对HLECs保护作用的初步考察
采用逆相蒸发法制备矢车菊素3-葡萄糖苷(1)脂质体(1-L).利用星点设计-效应面法,以包封率为评价指标,优化得到的处方为:1浓度7.0 mg/ml、磷脂与胆固醇质量比4、有机相与水相体积比4、磷酸盐缓冲液浓度15 mmol/L.再用三甲基壳聚糖对1-L进行膜修饰,所得标题脂质体(1-TCL)的粒径为(158.3±2.8) nm,ξ电位为(31.7±1.0) mV,包封率为(53.7±0.2)％,在人工泪液中36 h累积释放率约40％.以人晶体上皮细胞(HLECs)为模型,考察了1溶液、1-L和1-TCL对双氧水致氧化损伤HLECs进行先预处理再治疗的保护作用.与模型组细胞相比,40和80 tmol/L的1-TCL组细胞的活力提高了64.7％与74.4％.与1-L (40 tmol/L)组相比,1-TCL组对HLECs细胞的保护作用均显著提高(P.＜0.05).
关键词： 矢车菊素3-葡萄糖苷 脂质体 三甲基壳聚糖 星点设计 细胞活力 -
葡萄糖调节蛋白75基因突变体及其真核表达载体构建
葡萄糖调节蛋白75(glucose-regulated protein 75,Grp75)与细胞内的p53结合抑制其核移位,起到了保护细胞的作用.为研究Grp75和p53的结合与否是如何影响细胞活力,现构建Grp75缺失突变基因的真核表达载体.以SOE-PCR(genesplicing by overlap extension)法得到Grp75缺失突变基因,与pcDNA3.0真核表达载体连接,构建Grp75缺失突变的特异性表达载体pcDNA3.0/Grp75(△253-282),经酶切、测序鉴定Grp75缺失突变蛋白表达载体成功构建.用脂质体将pcDNA3.0/Grp75(△253-282)转染到PC12细胞株,以1 mg/mL浓度的G418筛选出稳定株,并命名为PC12/Grp75(△253-282)(+).半定量RT-PCR和Western blot结果显示PC12/Grp75(△253-282)(+)细胞组内Grp75的mRNA和蛋白的表达水平较PC12细胞组增高.对PC12细胞组、PC12/Grp75(△253-282)(+)细胞组和PC12/Grp75(+)细胞组(pcDNA3/Grp75真核表达载体已构建)分别缺糖0 h、3 h、9 h、18 h和36 h,MTT法检测各组细胞活力,Hoechst33324法检测细胞凋亡情况.结果显示PC12/Grp75(+)组细胞活力高于其它两组,PC12/Grp75(△253-282)(+)组高于PC12组,差异有统计学意义.Hoechst33324染色后,凋亡细胞的比率与MTT细胞活力检测结果基本一致.Western blot检测三种细胞内p53的表达量,PC12/Grp75(+)细胞内p53蛋白表达量低于另外两组,可能是由于Grp75蛋白量的增多部分抑制了p53的表达,提示Grp75对缺糖诱导细胞凋亡的抑制作用部分与p53的结合有关.以上结果表明Grp75基因的缺失突变在一定程度上降低了细胞的活力.
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生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用研究
目的：探讨生地黄水煎剂对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法：以H2O2处理PC12细胞制作成氧化应激损伤模型，采用MTT法检测生地黄水煎剂对PC12细胞活性的影响，并采用Westen blot法检测PC12体外凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、细胞色素C、caspase3的表达情况。结果：经150μmol/L H2O2处理的PC12细胞存活率明显降低，而经生地黄水煎剂（2.5、5、10mg/mL）预处理后，细胞存活率大致呈浓度依赖增长，并明显抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的高表达，提高Bcl-2/Bax比值。结论：生地黄水煎剂对氧化应激损伤的PC12细胞凋亡具有保护作用，其保护机制是通过抑制细胞凋亡相关蛋白Bax、细胞色素C、cleaved-Caspase3的表达，并提高Bcl-2表达而实现的。
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麻杏石甘汤对肺炎支原体诱导巨噬细胞凋亡的保护作用
目的:观察麻杏石甘汤对肺炎支原体(MP)诱导巨噬细胞凋亡的保护作用.方法:培养巨噬细胞RAW246.7,分别将麻杏石甘汤1、5、10、20μL与巨噬细胞共孵育,模型组与空白对照组分别加入磷酸盐缓冲液(PBS)20μL与细胞共孵育. 除空白对照组,72h后利用灭活MP感染其余各组细胞24h. 通过MTT检测各组细胞活力,LDH检测细胞损伤率,流式细胞仪检测细胞凋亡率. 结果:与空白对照组比较,模型组细胞活力显著降低(P<0.05),LDH释放、细胞凋亡百分比显著增加(P<0.05);与模型组比较,麻杏石甘汤10μL与20μL组细胞活力显著提高(P<0.05),LDH释放、细胞凋亡百分比显著降低(P<0.05).结论:麻杏石甘汤能对抗MP引起的RAW246.7细胞活力下降,抑制MP诱导的RAW246.7细胞凋亡,对细胞具有明显的保护作用.
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“抗纤复方”药物血清对体外培养大鼠肝细胞功能表达的影响
目的 探讨给予大鼠不同剂量“抗纤复方”药物后其血清对体外培养正常大鼠肝细胞增殖与活力和纤维肝大鼠肝细胞功能表达的影响.方法 常规培养大鼠肝细胞,用5、10、20倍剂量“抗纤复方”药物血清分别温育肝细胞48h,同时以对照血清作为参照,用3H-TsR掺入法测定细胞增殖,3H-Pro掺入法测定细胞活力,用PAS法染色糖原,用偶氮偶联法染色碱性磷酸酶.结果 各剂量组“抗纤复方”药物血清均能增加肝细胞3H-TdR(20％的20倍剂量组除外)和3H-Pro掺入量,且“抗纤复方”具有促进纤维肝肝细胞活力与糖原合成、抑制纤维肝肝细胞增殖与碱性磷酸酶活性的作用.结论 “抗纤复方”药物血清能促进正常肝细胞增殖和活力,调节肝细胞的异常代谢和功能状态.
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右美托咪定预处理对丙泊酚孵育的大鼠海马神经元细胞活力的影响
目的 观察右美托咪定预处理对丙泊酚孵育的大鼠海马神经元细胞活力的影响.方法 选择孕16～18 d SD大鼠拉颈处死,剖腹取胎鼠,分离海马神经元细胞.将细胞接种于培养板中,培养至第8天,应用神经元特异性核蛋白(NeuN)单克隆抗体进行免疫组化染色,鉴定海马神经元是否培养成功.将海马神经元细胞分为对照组(C组)、丙泊酚组(P组)、右美托咪定+丙泊酚组(DP组).C组不做任何处理；P组在培养液中加入100 μmol/L丙泊酚孵育3 h；DP1组、DP2组、DP3组、DP4组、DP5组、DP6组则在培养液中分别加入0.001、0.01、0.1、1、10、100 μmol/L右美托咪定孵育30 min,再加入100 μmol/L丙泊酚继续孵育3h,每组设6个复孔.应用CCK-8试剂盒检测各组海马神经元的细胞活力.结果 显微镜下见所培养细胞中有大量的棕黄色NeuN阳性颗粒,说明海马神经元培养成功.与C组比较,P组、DP1组、DP2组、DP3组、DP4组海马神经元细胞活力明显下降(P＜0.05),而DP5组、DP6组差异无统计学意义.与P组比较,DP1组、DP2组、DP3组、DP4组、DP5组、DP6组海马神经元细胞活力均明显升高(P＜0.05).随着右美托咪定剂量的增加,细胞活力逐渐增强,即:DP6组＞DP5组＞DP4组＞DP3组＞DP2组＞DP1组.结论 丙泊酚降低海马神经元细胞的活力,而右美托咪定具有神经保护作用,可以剂量依赖性地减轻丙泊酚对海马神经元细胞活性的抑制作用.
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四甲基偶氮唑盐(MTT)方法分析白念珠菌细胞活力的优化及其评价
为将VitK3(menadion)增强的MTT(四甲基偶氮唑盐)方法(menadion-augmentedMTTmethod)用于分析白念珠菌细胞的活力,采用正交设计[L16(4321)]确定其优基本反应条件,用该方法分析不同菌浓度的白念珠菌以及其在受到不同化学物质作用后的活力变化,并将该方法用于其它病原性酵母菌及酵母样真菌.实验结果表明menadion增强的MTT方法优基本反应条件为:MTT1.2g/L、menadion20mmol/L、反应时间6h、分光光度计波长为570nm.该方法可敏感地定量反映出白念珠菌的活力变化,并且能有效的分析其他病原性酵母菌及酵母样真菌的细胞活力.结果提示优化的MTT方法可以快速、简便、灵敏和定量地分析白念珠菌及某些致病性酵母菌和酵母样真菌的活力.
关键词： 病原真菌 细胞活力 MTT方法 VitK3(menadion) -
英文文摘
3．丙戊酸抑制组蛋白去乙酰化酶使人牙髓干细胞和成骨细胞骨钙素基因表达下调：为 HDAC2参与这一过程提供依据（英）／Paino F…／／Stem Cells．－2014，32（1）．－279－289
由于成体间充质干细胞（如牙髓干细胞）可向多种组织特异性细胞分化（尤其是成骨细胞向分化），因此研究者们将这些干细胞用于组织工程研究。近年来，干细胞表观遗传学研究表明，特定的组蛋白改变和修饰酶在细胞分化过程中起重要作用。丙戊酸（VPA ）是一种组蛋白脱乙酰基酶（HDAC）的选择性抑制剂，研究表明，VPA 可增强成骨细胞向分化，但骨钙素作为分化后期标志，其表达下降。本研究旨在探讨 VPA 对牙髓干细胞分化的影响。低浓度的 VPA不会降低细胞活力、增殖和细胞周期分布，但它足以通过上调骨桥蛋白和骨涎蛋白的表达，使基质矿化明显增加。与之相反，在转录水平上来看，骨钙素水平降低，这与 HDAC2受到抑制密切相关。事实上，通过 shRNA 介导的 HDAC2沉默对成骨细胞相关标记物表达的影响与 VPA 刺激的影响相类似。我们得出结论，VPA 不会诱导成骨细胞的终末分化，但可刺激不完全成熟细胞的产生。此外，通过 RNA 干扰可特异性抑制单个 HDAC，从而使成骨向分化能力增强，表现出一种选择效应。 -
牛蒡苷元对H89诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用
目的:考察牛蒡苷元对H89诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用.方法:用蛋白激酶A抑制剂H89处理SH-SY5Y细胞,建立细胞损伤模型.将SH-SY5Y细胞分成正常组(正常细胞)、模型组(经H89处理的细胞)、H89+牛蒡苷元组(经H89处理后给予牛蒡苷元处理的细胞)和H89+丹酚酸B组(阳性对照组,经H89处理后给予丹酚酸B处理的细胞).采用MTT法检测细胞活力、免疫荧光细胞化学法检测细胞中β-淀粉样肽和神经营养因子-3的表达以及Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡率.结果:H89诱导的细胞损伤模型造模成功.牛蒡苷元在低浓度(0.5 μmol.L-1)时对细胞损伤模型的保护作用佳,与模型组相比,H89+低浓度牛蒡苷元组细胞的细胞活力显著提高(P＜0.01),细胞中β-淀粉样肽的表达下调5.17％(P＜0.05),而神经营养因子-3的表达上调80.54％(P＜0.01),凋亡细胞百分比也显著降低(P＜0.05).结论:低浓度牛蒡苷元对H89诱导的SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用.
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精粹文章摘要
路璐，张俊伶，李德冠，等．芝麻酚对小鼠骨髓c-kit阳性细胞辐射损伤的保护作用研究．中国生化药物杂志，2013，34（4）：1-4．
采用免疫磁珠细胞分选法获得小鼠骨髓c-kit阳性细胞，照射前30min芝麻酚处理，结果显示芝麻酚可显著提高小鼠c-kit阳性细胞细胞活力和集落形成数量，但对细胞凋亡无影响。 -
不同剂量抗纤复方药物血清对正常大鼠肝细胞增殖与活力的影响
目的：探讨大鼠给予不同剂量抗纤复方药物后其血清对体外培养正常大鼠肝细胞增殖与活力的影响。方法：常规培养大鼠肝细胞，用5、10与20倍剂量抗纤复方药物血清分别温育肝细胞48h，同时以对照血清作为参照，用［3H］-TdR掺入法测定细胞增殖，［3H］-Pro掺入法测定细胞活力。结果：各剂量组抗纤复方药物血清均能增加肝细胞［3H］-TdR（20%的20倍剂量组除外）和［3H］-Pro掺入量，其中10%的10倍剂量抗纤复方药物血清作用满意。结论：抗纤复方药物血清能促进正常肝细胞增殖和活力，佳剂量为10倍剂量。
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PPARα/γ双激动剂GCP-02对细胞葡萄糖利用、前脂肪细胞分化和细胞活力的影响
目的:研究PPARα/γ双激动剂GCP-02对细胞葡萄糖利用、前脂肪细胞分化和细胞活力的影响.方法:以罗格列酮为对照,观察GCP-02对HepG2细胞和WB-F344细胞活力的影响,对HepG2细胞葡萄糖转运、葡萄糖消耗以及对3T3-L1细胞脂肪分化的影响.结果:在1×10-5mol/L浓度下,GCP-02降低WB-F344细胞活力,对HepG2细胞活力无影响;在不影响细胞活力浓度下,GCP-02增加HepG2细胞葡萄糖消耗,但不影响其葡萄特转运;GCP-02增加3T3-L1细胞的脂肪生成.结论:GCP-02增加HepG2细胞的葡萄糖消耗,促进3T3-L1前脂肪细胞分化,降低WB-F344细胞活力.
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缺氧复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞活力的影响及机制研究
目的:研究缺氧复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)活力的影响及机制.方法:培养大鼠MMECs,制作缺氧复氧模型模拟缺血再灌注损伤.随机分为4组(n=24),正常对照组(N组)不作任何处理、缺氧复氧组(HR组)、LY294002预先给药+缺氧复氧组(LY294002组)、PDTC预先给药+缺氧复氧组(PDTC组),均进行缺氧2h复氧2h.复氧2h时后MTT法测定细胞活力,Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构.结果:与N组比较,HR组细胞活力降低(P＜0.01)；与HR组比较,LY294002组细胞活力降低(P＜0.05),PDTC组细胞活力降低(P＜0.01)；与LY294002组比较,PDTC组组细胞活力降低(P＜0.01).结论:缺氧复氧可导致MMECs活力明显降低；PI3K/Akt/NF-κB信号通路参与了缺氧复氧调控过程,该通路可促进MMECs活力增强.
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造血干细胞冻存时间与细胞活性关系的初步探讨
目的探讨造血干细胞冷冻保存时间与细胞活性之间的关系.方法造血干细胞中加入细胞冷冻保护剂,通过程控冷冻,放入液氮保存.根据保存的时间不同,复苏后测定细胞活力的变化.结果细胞液氮保存复苏后,绝大部分的细胞活力得以保存.结论造血干细胞贮存在液氮中,深低温阻断了酶的活性和细胞代谢,贮存时间长短与细胞活性无关.
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黄芩素对人胆囊癌细胞系SGC996细胞活力及细胞锌指X染色体蛋白表达的干预作用
目的：探讨中药黄芩提取物黄芩素对人胆囊癌的生物效应及机制。方法将人胆囊癌细胞系SGC996用黄芩素处理48h，采用MTT法检测治疗后SGC996的细胞活力；通过对透过tran-swell膜的SGC996细胞进行计数，评估黄芩素对胆囊癌侵袭转移能力的影响；通过流式细胞术检测黄芩素处理后，SGC996细胞的凋亡情况，并用Western blot方法检测细胞锌指X染色体蛋白（ZFX）的表达。结果40、80、160、320μmol/L黄芩素组对SGC996细胞活力的抑制率与对照组比较，差异有统计学意义[（19.3±3.8）%、（37.9±5.8）%、（61.6±7.8）%、（84.2±10.2）%比0，P<0.05]。40、80、160μmol/L黄芩素组对SGC996细胞的凋亡诱导率与对照组比较，差异有统计学意义[（7.5±1.2）%、（16.3±1.9）%、（31.2±2.8）%比（0.5±0.5）%，P<0.05]。40、80、160μmol/L黄芩素组对SGC996细胞转移抑制率与对照组比较，差异有统计学意义[（25.6±6.6）%、（57.3±7.9）%、（84.1±11.9）%比0，P<0.05]。Western blot结果显示，黄芩素对ZFX有显著的抑制作用。结论黄芩素有良好的抗胆囊癌生物活性，其抗肿瘤效应的机制可能与下调ZFX蛋白表达有关。
关键词： 人胆囊癌细胞系 SGC996 黄芩素 细胞锌指X染色体蛋白 细胞活力 -
微波对骨细胞活力和生物力学的影响
目的 研究微波辐射对大鼠股骨细胞活力和生物力学的影响,以探求杀灭所有骨、软骨细胞时骨组织生物力学的变化.方法 32只大鼠处死后,将其双侧股骨完整取出,左侧股骨为实验组,右侧股骨为对照组.应用微波对实验组股骨分别加热3、5、10、15min后,用特殊的乳酸脱氢酶活性染色,判断骨、软骨细胞的活力;用Instron万能材料试验机测定股骨的生物力学并同步记录;用原子吸收分光光度仪测定股骨钙的含量.结果 实验组与对照组的生物力学及钙含量差异无显著性(P＞0.05),股骨经微波加热10min后,温度可达62℃,能够杀灭骨、软骨所有的活细胞.结论 微波产生的高温,在较短的时间内能杀灭骨、软骨活细胞,而对骨的生物力学无显著损害;通过组织化学观察乳酸脱氢酶活性判断骨、软骨细胞活力的方法是特异和敏感的,体外微波加热可应用于骨肿瘤的保肢手术.
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bcl－2基因家族与创伤后神经元凋亡
随着国民经济的发展，交通手段日益发达，由此为主要原因所致的颅脑损伤的发病率也越来越高，已成为45岁以下人群的首位死因。如何提高颅脑损伤的治愈率、降低死亡率和致残率，以及关于其致损害的病理生理机制的研究，已成为目前神经外科临床和基础研究的热点。研究表明，创伤性脑损伤(TraumaticBrainInjuryTBI)后的迟发性神经元凋亡是颅脑损伤继发损害的主要病理过程之一，防止继发损害须从控制凋亡入手。在神经元凋亡调控机制方面，bcl－2基因家族是迄今为止研究得为深入和广泛的凋亡调控基因之一[1]。bcl－2属于一类新的癌基因家族，通过广泛抑制各种刺激剂诱导的细胞凋亡、延长细胞活力而发挥作用，但其具体调控机制目前还未完全明了[2]。这是一个非常复杂的相互作用体系，其阐明必将引起颅脑损伤治疗学的新突破。
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水解罗非鱼胶原促进人牙周膜细胞活力及成骨分化的效应
目的 探讨水解罗非鱼胶原促进人牙周膜细胞活力及成骨分化的作用.方法 制备水解罗非鱼胶原,原代分离培养人牙周膜细胞(hPDL细胞),分别利用MTT试验和real-time PCR试验检测水解罗非鱼胶原对细胞活力和成骨分化相关基因ALP,COL I,OCN和RUNX2的表达的影响,运用激光共聚焦显微镜观察成骨分化相关蛋白骨钙蛋白的表达,进一步采用western blot技术探讨水解罗非鱼胶原对整合素-ERK信号通路的作用.结果 水解罗非鱼胶原能促进hPDL细胞的增殖,使ALP,COL I,OCN和RUNX2的基因上调,诱导骨钙蛋白的产生,这些生物效应与水解罗非鱼胶原可激活整合素-ERK信号通路有关.结论 水解罗非鱼胶原具有骨诱导性,具有诱导hPDL细胞成骨分化的潜能.
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ATP-TCA法对胃癌常用化疗药物体外作用的评价
胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,位列全球第四大常见肿瘤,占全球癌症死亡原因的第二位[1].术前、术后化疗是胃癌的重要辅助治疗方式.近年来,各大制药企业不断研发新的抗癌药物,临床上肿瘤化疗的应用更加广泛合理,化疗药物在以手术为主的综合治疗中占有重要地位.术前化疗可使原发癌缩小,为手术切除创造有利条件,降低肿瘤细胞活力,消灭微波转移灶,提高综合治疗后患者的长期生存率[2-3].但化疗药物的选择和确定尚缺乏统一的标准,存在盲目性、随意性,无效药物可对人体造成损害,从而降低患者的生存质量.基于三磷酸腺苷生物荧光法(ATP-TCA)检测肿瘤体外的药物敏感性,是近年发展起来的对恶性肿瘤具有较高可评估率的方法,其有助于临床医师确定化疗药物组合及制定个体化化疗方案,减少治疗开支,降低药物的不良反应,提高化疗的有效率.本研究采用此方法对85例胃癌标本进行检测,比较7种常用化疗药物和3种联合化疗方案的敏感性,以期为临床胃癌化疗提供参考依据.
