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IRIVs:具有免疫增强作用的重组流感病毒体
具有免疫增强作用的重组流感病毒体(immunopotentiating reconstituted influenza virosomes,IRIVs)作为一种脂质体运载体系,已获准用于人体,它能安全有效地运送和特异性地靶向抗原,其中包括灭活的病毒蛋白、合成肽、DNA和RNA等现代疫苗,从而诱导细胞免疫或体液免疫应答[1].
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加热蛋白溶菌酶能杀灭诺如病毒
据新华报道,日本东京海洋大学的一个研究小组日前宣布,在实验中发现,加热处理鸡蛋蛋白含有的溶菌酶,能灭活诺如病毒。这是由于溶菌酶能破坏包裹诺如病毒基因的外壳。
诺如病毒会引发急性肠胃炎和食物中毒。这种病毒具有强大的感染力,只要有10~100个病毒体进入人体,就会导致感染,目前还没有有效的抗病毒剂。 -
人乳头状瘤病毒(HPV)16L1病毒样颗粒蛋白与HPV16L1基因联合免疫的体液免疫反应及其抗体的体外中和实验
目的用含有编码人乳头状瘤病毒(HPV)16L1和HPV16L1病毒样颗粒(VLP)蛋白联合免疫小鼠,与用HPV16L1重组表达质粒比较,观察VLP蛋白免疫对免疫小鼠产生抗体的增强作用,以及抗体的体外中和作用,寻找研制HPV16感染的预防性疫苗的有效途径.方法将C57BL/6小鼠,随机分为4组:Ⅰ组:pcDNA-L1(100 μl/鼠), Ⅱ组:pcDNA-L1(70 μl /鼠)+HPV16L1 VLP,Ⅲ组:pcDNA3.1(100 μl/鼠)空质粒,Ⅳ组:PBS缓冲液.质粒免疫3次,间隔3周.ELISA法检测其血清抗体,红细胞凝集实验和HPV16病毒样颗粒结合抑制实验体外检测抗体的中和活性.结果pcDNA-L1+ HPV16L1 VLP较pcDNA-L1免疫组,3次免疫后的抗体水平均增高,尤其以第2次和第3次免疫后的抗体水平增加更显著.pcDNA-L1+ HPV16L1 VLP联合免疫组血清的抑制活性高于pcDNA-L1免疫组,且HeLa细胞结合抑制实验染色呈阴性.结论 HPV16L1 VLP联合免疫可以增加目的抗原的中和抗体产生,可能是HPV16有效预防性疫苗研制的更有希望的策略.
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人乳头瘤病毒16型结构蛋白在昆虫细胞中的表达
目的在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)结构蛋白,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础.方法将目的基因克隆至杆状病毒转移载体,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9,通过同源重组获得重组杆状病毒,用SDS-PAGE凝胶电泳和Western blot法检测重组子在昆虫细胞中表达的目的蛋白.结果获得了稳定高效表达HPV16结构蛋白的重组杆状病毒,L1和L2蛋白的相对分子质量分别为57 000和97 000,L1蛋白的表达产量约占昆虫细胞总体蛋白的25%~30%.结论人乳头瘤病毒16型结构蛋白可在昆虫细胞内高效表达.
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乙型脑炎病毒持续感染对模型中变异株部分性状及病毒抑制实验
我们利用人肝癌细胞株KN73建立乙型脑炎(乙脑)病毒体外持续性感染模型,并探讨乙脑病毒变异株部分性状变异机理,通过病毒抑制实验和观察,提示该模型体系可为今后抗病毒药物的开发提供帮助.
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含风疹病毒部分核酸序列的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达
目的构建原核表达系统,表达内含风疹病毒部分核酸序列的由噬菌体包膜蛋白构成的病毒样颗粒,并包被重组RNA,使其具耐核糖核酸酶(RNase)的特性.方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增风疹减毒活疫苗中风疹病毒糖蛋白E1的部分保守区域,进行TA克隆后,用限制性内切酶Hind Ⅲ酶切,获得所需要的目的片段,并与用Hind Ⅲ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1-Ru.再转化E.Coli BL21-DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白后,再自我组装成病毒样颗粒,并将风疹病毒部分序列包裹到病毒样颗粒内.结果成功构建了新的表达载体pNCCL1- Ru,其原核表达产物病毒样颗粒中所包裹的风疹病毒RNA序列与风疹BRDⅡ株同源性高达98%,所包裹的RNA具有耐RNase消化的特性以及良好的稳定性.结论我们构建的表达载体pNCCL1- Ru及原核表达系统,可作为构建和制备耐RNase的风疹病毒核酸标准品和质控品的平台,可为实验室进行风疹病毒核酸的检测提供稳定的无传染性的标准品和质控品.
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶末端蛋白研究进展
0引言乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA的长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原蛋白、X蛋白以及HBV DNA聚合酶(HBV DNA P)[1].HBV DNA P基因在ORF中长,并且与C、S、X基因区有重叠,其编码的P蛋白含有3个功能域和1个无意义的隔离片(spacer,SP),排列顺序为N-末端蛋白(TP),隔离片,RT/DNA聚合酶和RNase H.由于受到不能从病毒体直接纯化和在不同的系统中表达有活性酶的限制,目前对聚合酶及其所编码的各个功能区域蛋白质的功能的认识还不是很清楚.
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宫颈癌的流行病学现状和预防
宫颈癌是世界范围内常见的女性恶性肿瘤之一,发病率及其导致的患者死亡率在全世界范围内呈现明显的地域、人群等差异.在全世界范围内,宫颈癌的综合防控受到高度重视.目前,预防宫颈癌的有效措施包括一级预防和二级预防.注射人乳头瘤病毒(HPV)疫苗以预防HPV感染的一级预防已应用于全世界多个国家.开展针对适龄妇女的人群宫颈癌筛查,进行宫颈癌及其癌前病变的早期诊断和治疗,可有效降低宫颈癌的发病率及其导致的患者死亡率.通过制定适宜于各国的宫颈癌综合防治策略,并有效地应用于目标人群,宫颈癌有望成为人类通过综合防控战胜的第一个恶性肿瘤.
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博尔纳病病毒与人类神经精神疾病
博尔纳病(Borna disease)是一种中枢神经系统感染性疾病,表现为明显的行为、情感异常,炎症细胞在中枢神经系统内浸润及特异性的病毒蛋白在边缘系统中积聚.该病的病原体为博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV).初认为BDV仅感染马,现证实它具有广泛的温血宿主群,包括绵羊、牛、猫及鸵鸟等[1-5].近年来,BDV的抗原、特异性抗体及RNA已频繁地在神经精神疾病患者的外周血单核细胞(PBMCs)和脑组织中被检测到,并在PBMCs和脑组织中已成功分离出病毒体.这些研究结果显示,此"动物病毒"同人类的神经精神疾病的发生和发展存在着密切的联系[6-9].
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预防尖锐湿疣复发问题之探讨
1尖锐湿疣的复发原因尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染所致.人乳头瘤病毒是一直径43~55nm环状双螺旋结构的DNA病毒,HPV病毒颗粒外面有72个壳颗粒,为20面立体对称外形,约有8000对碱基,病毒颗粒的分子量为5×106道尔顿,为一无包膜裸露型的病毒体[1].
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慢性病毒性肝炎干扰素α抗病毒治疗临床应用现状
干扰素的发现至今已有50年历史,随着临床医学研究的发展,目前,干扰素α已经被广泛应用于抗肿瘤和抗病毒的治疗.在抗病毒的治疗中,尤其是慢性乙型肝炎和慢性丙型肝炎的干扰素α抗病毒治疗,近些年取得了长足的进展.干扰素α是人体内自然存在的生物分子,具有免疫调节和直接抗病毒活性的双层效应.在抗病毒效应中,由于不同病毒的生物特性不同,而对不同病毒体现出不同的抗病毒效应能力.
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人乳头瘤病毒6b型病毒样颗粒免疫活性的研究
目的了解人乳头瘤病毒(HPV)6b型病毒样颗粒(VLP)的免疫活性及其诱导的保护性抗体对HPV11型VLP和牛乳头瘤病毒1型(BPV1)VLP的交叉免疫反应.方法将HPV6b、 HPV11和 BPV1 晚期基因L1的开放读码框架(ORFs)分别重组到杆状病毒中,该重组病毒在感染的昆虫细胞(Sf-9细胞)中表达, 表达的L1蛋白可自行组装成HPV6b、HPV11和BPV1 VLP.取50 μg 纯化的HPV6b VLP分别在第0天和第21天经肌肉免疫Balb/c鼠.第二次免疫后1周及3个月取血,检测血清抗HPV6b VLP、HPV11 VLP和 BPV1 VLP IgG滴度;血凝集抑制试验检测HPV6b VLP免疫产生的抗血清是否能阻止HPV11 VLP和 BPV1 VLP与鼠红细胞凝集.结果免疫后1周,应用ELISA方法检测抗HPV6b VLP、HPV11 VLP和 BPV 1 VLP 血清IgG滴度分别为1∶6 400、1∶1 600和1∶1 600.3个月后,抗HPV6b VLP、HPV11 VLP和 BPV 1 VLP 血清IgG滴度分别为1∶800、1∶400和1∶100.血凝集抑制试验显示HPV6b VLP产生的抗血清能够阻止高度同源性的HPV6b VLP和HPV11 VLP与鼠红细胞结合.结论 HPV6b VLP具有很强的免疫原性,免疫后产生的抗血清具有阻止HPV6b VLP和HPV11 VLP与细胞结合的能力.HPV6b和11型间确实存在交叉反应的中和表位,HPV6b VLP有可能用于防治HPV6b及HPV11感染的疫苗.
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单纯疱疹病毒的检测研究进展
单纯疱疹病毒(HSV)是早发现的人类疱疹病毒,也是所有人类病毒性疾病中常见的病毒.HSV为双股DNA病毒,可分为HSV-1和HSV-2两种血清型.HSV病毒体中有6种同包膜相关的糖蛋白gB、gC、gD、gE、gG和gH,其中gG为型特异性抗原.
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流感病毒体是RSV-F抗原的有效递送系统
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检测黑猩猩腺病毒68型抗原的双抗体夹心ELISA的建立
目的 建立定量黑猩猩腺病毒68型(chimpanzee adenovirus type 68,AdC68)含量的双抗体夹心ELISA,并验证其可行性.方法 用表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的非复制型AdC68(AdC68GFP)感染HEK293细胞,收获病变细胞并进行超速离心纯化AdC68GFP.用纯化AdC68GFP免疫家兔制备抗AdC68GFP抗体.以抗AdC68GFP抗体为包被抗体,辣根过氧化物酶标记的抗腺病毒HEXON IgG为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA,确定该法的线性范围,并验证该法的准确度、精密度、专属性和适用性.结果 纯化AdC68GFP的蛋白浓度为38.8 μg/ml,其中HEK293细胞蛋白浓度低于0.3 μg/ml.双抗体夹心ELISA的适包被抗体和酶标抗体浓度分别为1∶50和1∶500.该法的线性范围为0.06~3.88 μg/ml,线性相关系数为0.999 6.高、低浓度AdC68GFP样品的回收率分别为93.17%和94.33%,变异系数分别为6.72%和3.44%.该法可特异性检测AdC68GFP抗原,未发现与HEK293细胞蛋白发生交叉反应.应用该法检测AdC68GFP纯化过程中的样品可反映病毒的纯化效果.结论 建立的双抗体夹心ELISA具有良好的准确度、精密度和专属性,可用于AdC68纯化工艺过程中对病毒蛋白含量的快速检测.
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HCV NS3蛋白酶及抑制剂的研究进展
丙型肝炎呈全球性流行,感染HCV后常呈慢性化,且易使病情进一步发展为肝硬化、肝功能衰竭或肝细胞癌,至今仍缺少理想的治疗药物和方案.HCV NS3蛋白酶在病毒体的成熟和复制中起着重要的作用,是近年来抗丙型肝炎药物研究的重要靶点.本文从NS3蛋白酶结构、功能及与NS4A的相互作用和抑制剂等几方面,介绍NS3蛋白酶及抑制剂的研究进展.
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丙型肝炎病毒E1、E2蛋白表达及诊断丙型肝炎的临床研究
丙型肝炎病毒(ECV)基因编码的E1和E2是病毒体包膜糖蛋白,该蛋白在昆虫细胞中已成功进行表达[1,2].本研究应用重组杆状病毒在昆虫细胞中表达HCV包膜糖蛋白E1和E2,并用于丙型肝炎患儿血清抗体检测.
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五种肝炎病毒的分子生物学比较
1989年在日本召开的国际病毒性肝炎会议上已正式将病毒性肝炎分甲、乙、丙、丁、戊五型,并将相应的病毒定名为HAV、HBV、HCV、HDV和HEV.本文对这五型肝炎病毒的基本结构、基因组、复制酶、病毒蛋白的合成、基因组的复制、病毒体的组装及病毒感染的生物学特征等作了比较.
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对病毒性疱疹疾病的新认识
在传染病中,由病毒引起的感染占70%~80%,对人类的危害极大.疱疹病毒目(herpesviruses)为一组具有包膜的DNA病毒,病毒体呈球形,外被包膜,衣壳呈二十面体立体对称,直经120~300 nm,自然界分布极为广泛.人类疱疹病毒已发现8种之多,主要有单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、单纯疱疹病毒2型(HSV-2)及水痘-带状疱疹病毒(VZV).由于感染这些病毒而发生的疾病都有着共同的特点,且发病涉及多个器官,为了便于研究和治疗理应将其分为一门专门的学科,较为合理.
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低氧诱导因子-1α基因重组腺病毒体外转染胚鼠神经干细胞研究
低氧诱导因子(HIF)-1α是低氧应答时基因表达和维持内氧环境稳定的调节中心~([1])神经干细胞(NSCs)是进行基治疗的良好载体~([2])我们将Hif-1a基因重组腺病毒体钋转染NSCs后~([3]),过免疫原位杂交和Western blot检测等方法证明成功建立基因工程化NSCs.