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人乳头瘤病毒18型L1基因果蝇表达系统的构建和鉴定
目的:利用基因重组技术,构建人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1基因果蝇表达质粒.方法:以pUC18-HPV18为模板,运用PCR方法扩增不含核定位序列的HPV18L1 DNA片段;PCR产物连接至PGEM-T Easy质粒,并测序鉴定;将测序正确的HPV18L1 DNA片段亚克隆到果蝇表达载体pMT/BiP/V5-HisA中;利用酶切及PCR方法鉴定重组质粒.结果:经双酶切及PCR鉴定,证实成功构建重组果蝇表达质粒pMT/BiP/V5-HPV18L1.结论:pMT/BiP/V5-HPV18L1重组果蝇表达质粒为下一步转染果蝇S2细胞及制备HPV18VLPs奠定了基础.
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加单磷酰类脂A佐剂的呼吸道合胞病毒病毒体疫苗的效力与安全性
在婴儿以及免疫功能低下的成人和老人中，呼吸道合胞病毒感染仍然是一个严重的健康问题，没有有效的可利用的疫苗的原因是由于存在一些障碍：非复制性呼吸道合胞病毒疫苗可引起过度的Th2型应答，增强了疫苗接种者自然感染呼吸道合胞病毒而引起的呼吸系统疾病。作者以前发现含有Toll样受体4配体单磷酰类脂A的重组呼吸道合胞病毒病毒体可加强疫苗诱导的免疫应答，并且使免疫应答倾向于Th1型应答，也就不会引起呼吸系统疾病，由于黏膜免疫接种是诱导呼吸道合胞病毒特异性的全身与黏膜抗体应答的有吸引力的方法，并且TLR配体可以增强这种应答，作者通过鼻内接种途径免疫小鼠和棉鼠研究了含有单磷酰类脂A的呼吸道合胞病毒病毒体疫苗的有效性和安全性。在小鼠中发现在鼻内投递加有单磷酰类脂A的呼吸道合胞病毒病毒体后提高了全身性IgG抗体和局部分泌性IgA抗体的水平，并且使活病毒攻击后肺部的病毒滴度明显降低。此外，与福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒疫苗诱导的应答比较，上述病毒体疫苗诱导的应答更加倾向于Th1型应答。上述加有佐剂的呼吸道合胞病毒病毒体诱导的抗体应答以及Th1/Th2细胞因子应答同活的呼吸道合胞病毒感染所致应答是可比拟的。福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒诱导的血清IgG在攻击时可抑制病毒释放，同时该疫苗诱导倾向于Th2型免疫应答。在棉鼠模型中，病毒体疫苗加单磷酰类脂A免疫时观察到类似的全身性抗体应答和抑制肺部病毒的释放，但黏膜分泌性IgA应答只有小幅度加强。重要的是，用病毒体加佐剂单磷酰类脂A进行鼻腔免疫与活病毒感染一样，没有导致接种疫苗的动物在活病毒攻击时引发呼吸系统病症的任何征象，而在其他方面可比的条件下，肌肉注射福马林灭活的呼吸道合胞病毒疫苗会诱发严重的肺部免疫病理学改变。总之，这些资料表明，黏膜投递呼吸道合胞病毒病毒体加单磷酰类脂A佐剂有望成为抵御呼吸道合胞病毒的一种安全有效的疫苗。
