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西安地区汉坦病毒L及S部分片段的编码序列分析
应用巢氏PCR法从陕西西安地区间接免疫荧光抗原初检为阳性的黑线姬鼠标本中扩增汉坦病毒的L和S片段部分序列.序列分析显示:不同标本来源的汉坦病毒均为汉滩型病毒,彼此之间L和S部分片段序列同源性较高,与贵州地区优势汉滩型病毒S2/L4群毒株同源性高,分别为95.0%～97.0%和97.7%～99.3%,但与该地区已报道的汉坦病毒同源性较低.系统发育树显示:所有来自西安的病毒株处在同一个进化分支上,但可分成两个较小的分支.证实目前检测到的西安地区流行的汉坦病毒株与贵州地区汉滩型病毒株亲缘关系近,而与当地既往流行毒株的差异较大,究竟是西安地区汉坦病毒流行株发生了变化还是当地同时流行多种毒株还有待于进一步研究证实.
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溶血磷脂酸增强人 CD34＋细胞在缺血环境下的存活能力
CD34＋细胞是一种造血干细胞，具有促血管生成功能，在早期临床试验中发现心肌回输同源性 CD34＋细胞可以有效改善慢性心肌缺血和心绞痛。但是回输的 CD34＋细胞在缺血缺氧环境下的存活时间不长。科学家尝试了多种物理化学生物方法试图增强 CD34＋细胞存活能力。本研究揭示了溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid，LPA）可以增强 CD34＋细胞在缺血环境下的存活能力和其中的机制。
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中枢甘氨酸受体分子特性的研究
甘氨酸受体(GlyR)介导的抑制性神经传递在哺乳动物中枢神经系统(CNS)反射活动、随意运动调节和感觉信号的处理中具有重要作用[1].GlyR五聚体由三个独立的多肽组成:两个糖蛋白(48 kD和58 kD),分别称为α和β亚单位,另一个为93 kD的细胞质蛋白,叫"gephyrin".GlyR与尼古丁型乙酰胆碱受体(nAChR)、GABAA受体(GABAAR)、5-HT3受体(5-HT3R)等具有很大的同源性.它们一起形成一个配体门控离子通道(LGICs)超家族.LGICs的五个跨膜亚单位形成离子通道孔区.就GlyR而言,该离子通道选择性地通透Cl-.
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青海省1999年脊髓灰质炎Ⅰ型野毒株的分子病毒学分析
自中国脊髓灰质炎(脊灰)监测网络建立以来,有报告的脊灰暴发和流行主要由脊灰Ⅰ型野病毒引起.1993年在新疆维吾尔自治区分离到1株Ⅲ型野病毒,但未发现Ⅱ型野病毒.此外,1995年、1996年在云南省发现2例Ⅰ型[1]、2例Ⅲ型境外输入野毒病例[2].1994年10月以来我国本土未发现脊灰野病毒.但是,1999年10月从青海省循化撒拉族自治县分离到2株脊灰Ⅰ型野病毒,1株来自1位16月龄的病例,另1株来自该病例的接触者.应用基因测序法对该毒株做了VP1片段序列的测定,并与疫苗株SabinⅠ型参考株、国内曾经流行的脊灰Ⅰ型野病毒代表株、我国周边国家部分脊灰Ⅰ型野毒株的序列作了基因同源性比较,并由计算机用Neighbor Joining和Bootstrap Test方法分析处理,构建出它们之间的关系树,初步揭示了该毒株很可能是由境外传入我国.
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母婴感染单增李斯特菌16S rRNA检测及RAPD指纹图谱研究
目的 研究母婴感染的单增李斯特菌分子生物学特性,并对其进行同源性分析,为流行病学调查提供参考.方法 取母婴的血液等临床标本,做常规细菌培养及染包检查,使用VITEK2 Compact全自动微生物分析仪进行鉴定,采用K-B纸片扩散法做药敏试验.提取分离菌的基因组DNA,采用通用引物PCR扩增16S rRNA片段,同收后测序,与GenBank中收录菌株的16S rRNA基因序列进行BLAST序列同源性比对.从200条随机引物中筛选10条随机引物(P1-P10),采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对分离菌DNA进行电泳图谱的同源性分析.结果 分离菌经常规鉴定为威氏李斯特菌.药敏试验显示分离菌氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、青霉素、红霉素、万古霉素、复方新诺明、利福平、左氧氟沙星、庆大霉素、环丙沙星均敏感,对头孢曲松与头孢他啶均耐药.PCR扩增分离菌16S rRNA全序列为1 471 bp,经BLAST序列比对,与F2365菌株的同源性达99.4％,确定为单增李斯特菌.RAPD指纹图谱表明10条随机引物中有5条引物扩增的电泳图谱带型一致.结论 16S rRNA序列分析技术及RAPD指纹图谱分析表明母婴感染的单增李斯特菌株间同源,对母婴感染的预防与诊治有重要意义.
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鲁西南地区间日疟原虫Pvmsp-1基因分型及序列同源性研究
目的 了解不同时期鲁西南地区间日疟原虫Pvmsp-1基因分型及序列同源性特征. 方法 收集不同时期采制的鲁西南地区间日疟患者厚、薄血膜标本,用巢式PCR方法扩增间日疟Pvmsp-1基因icb5～icb6片段,对产物进行 PvuⅡ酶切鉴定和序列比对分析及系统进化分析. 结果 25份间日疟样品巢式PCR产物大小均为470bp,经PvuⅡ酶切均获得350bp和120bp两条片段,为Sal-1型.进化树分析25个样品株处于同一个大分支,且与Sal-1型标准株株同属一个总分枝,而与Belem型标准株遗传距离较远. 结论 鲁西南地区不同时期流行株间日疟原虫Pvmsp-1基因均为Sal-1型,株间序列同源性较高.
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不同感染来源疟原虫虫株的18S sRNA基因同源性分析
目的 分析云南省不同感染来源疟原虫株的遗传差异. 方法 采集不同地区疟疾患者的血样,利用巢式PCR扩增疟原虫18S sRNA基因,扩增产物进行双向测序分析,以分子进化树描述18S sRNA基因序列的同源程度.结果 对2012年8月～2013年8月期间诊断为云南当地感染的全部疟疾患者22例及感染地为缅甸、非洲、老挝的13例疟疾患者血样进行18S sRNA基因巢式PCR扩增,8份检出恶性疟原虫目的基因片段(205 bp)、35份检出间日疟原虫目标片段(120 bp).对43份PCR扩增阳性产物进行测序分析,其中8株恶性疟原虫的18S sRNA基因进化树显示属云南本地感染的虫株与非洲虫株分布在不同亚支,但均与鸡疟原虫(P lasmodiumgallinaceum)(Accession:M61723)遗传进化关系较近;35株间日疟原虫的18S sRNA基因进化树显示所有虫株均集中在一个进化分支内,与食蟹猴疟原虫(P.cynomolgi)(Accession:L07559)遗传关系较近,89％的云南本地感染虫株与南美两个虫株(Accession:X13926、U03079)同在一个进化亚支. 结论 恶性疟原虫不同地理株的18S sRNA基因序列差异性较间日疟原虫株间的差异性更明显.
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医院肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮耐药机制研究
目的 研究质粒介导的喹诺酮耐药基因在医院内的流行情况,检测菌株的耐药性,分析菌株间的同源性. 方法 收集临床分离的耐喹诺酮产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌,利用PCR方法对质粒耐药基因进行检测,阳性菌株进行接合试验,然后检测药物对供体菌、受体菌和接合子小抑菌浓度(MIC)值的变化,通过脉冲场电泳检测菌株间的同源性. 结果 所有菌株均未检出耐药基因qnrA与qnrC,其他7种耐药基因如qnrB均阳性,且部分菌株携带多个耐药基因.阳性菌株接合子对喹诺酮的耐药性增强并且有些质粒携带多种耐药基因,脉冲场电泳分析大肠埃希菌喹诺酮耐药株主要以发散为主,肺炎克雷伯菌主要以相对暴发流行为主. 结论 携带β-内酰胺酶基因的菌株,质粒介导的喹诺酮耐药基因检出率高,二者呈一定程度的共存.携带喹诺酮耐药基因的质粒水平转移,细菌对喹诺酮的耐药性增强,在免疫力低下人群,耐药菌株的传播更为迅速.
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血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的研究进展
血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)是一组以谷胱甘肽为共同底物的具有解毒功能的同工酶,在血吸虫生长过程中起关键性的作用,是近来较受关注的一种血吸虫抗原.其中日本血吸虫和曼氏血吸虫体内的GST(SjGST和SmGST)是当前研究较深入的血吸虫候选疫苗,二者的同源性很高[1],构建的疫苗免疫小鼠和猪等都收到了较好的效果,除产生抗感染的免疫保护作用外还具有降低虫荷数及雌虫生殖率等作用,有些疫苗已进入临床试验阶段[M][2,3[M]].对于GST疫苗产生的保护性免疫效果已有较深的研究,故在此不再赘述.然而GST在虫体的具体位置,GST的理化性质及刺激机体产生抗体机制,GST的损害和抑制对血吸虫生理功能产生的具体影响,GST疫苗与某些药物联合使用产生的治疗效果等仍然有待进一步的研究.本文综述了GST以上诸方面的研究进展.
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吉林地区人群戊型肝炎病毒感染的流行病学调查
目的 调查吉林地区部分人群戊型肝炎病毒(HEV)感染情况. 方法 用ELISA检测人群血清中抗HEV抗体;对部分血清用RT-PCR检测HEV RNA,对PCR阳性产物进行测序,所得序列构建系统发育树. 结果 ELA-SA方法检测7 514份人血清,1 621份抗HEV抗体阳性,阳性率21.57％.其中男、女性阳性率分别为30.87％和12.01％,男、女性感染者之比为2.64:1.感染者抗体水平随年龄增加而升高.不同职业人群HEV率不同,以猪销售人员及养猪从业人员感染率高,分别为97.18％和97.09％.从戊型肝炎患者中检测HEV RNA,序列分析结果为HEV基因Ⅳ型. 结论 吉林地区人群HEV感染率较高.从进化关系角度分析,吉林地区人源HEV与猪源HEV可能分化于同一分支.
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医院ICU多重耐药鲍曼不动杆菌的分布及同源性分析
目的 对医院ICU多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-Ab)的分布及同源性进行分析,为临床MDR-Ab感染的控制与治疗提供参考.方法 采用纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)对本院2009年7月～2011年7月培养出的78株鲍曼不动杆菌(Ab)进行药敏试验,从中挑选出MDR-Ab,应用脉冲场凝胶电泳(PFDE)进行同源性分析,对同源性MDR-Ab感染者所在的床单元进行多部位取样培养及药敏试验,确定其感染来源、途径及分布特点.结果 1)共培养出的78株Ab,其中44株(56.4％)来自呼吸道标本；2)78株Ab对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦及米诺环素的耐药率相对较低,共分离出8株MDR-Ab,A型4株,B型3株,C型1株；3)医护人员的手及清理床旁仪器的抹布MDR-Ab检出率为66.7％.结论 本研究培养出的A、B型MDR-Ab有同源性且存在交叉感染现象；医务人员的无菌观念及无菌操作技术薄弱,手部卫生状况差是医院ICU MDR-Ab流行的重要因素.
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山东省汉坦病毒分子流行病学研究
目的 探讨山东省汉坦病毒(HV)的分子流行病学特点.方法 用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及核苷酸序列测定技术,对肾综合征出血热(HFRS)监测点的阳性鼠肺标本进行目的 基因扩增并测序,与国内外的HV毒株进行同源性分析及系统发生树分析.结果 有15份标本扩增出汉城(SEO)型S、M片段,对其中10份扩增片段进行序列分析认为均为SEO型HV,S片段之间的同源性≥96.3%,其推导的氨基酸序列同源性(JN5-153S和DY1S除外)≥96.8%;M片段之间及与山东省以往分离的ZB8同源性≥97.5%,其推导的氨基酸序列同源性为98.6%～100%.结论 近年来山东省流行的HV仍以SEO型S3亚型为主.同一地区或地理位置相邻的地区病毒基因组同源性较高,具有明显的地区聚集性,基因型别较为稳定.
关键词： 汉坦病毒 反转录-聚合酶链反应 同源性 系统发生树 -
黑龙江及吉林省边境口岸与境外全沟硬蜱线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列的比较研究
目的 利用线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ (COⅠ)基因对我国黑龙江省绥芬河、吉林省延边口岸全沟硬蜱的COⅠ基因序列和国外全沟硬蜱COⅠ序列进行分析对比研究,为了解蜱媒病及其防控奠定基础.方法 2013年6月至2016年8月从黑龙江省绥芬河口岸和吉林省延边口岸共采集全沟硬蜱106只,选取31只样本提取基因组DNA,采用PCR方法从蜱基因组中扩增COⅠ基因进行同源性分析,然后构建系统发生树,并对2个地理种群的全沟硬蜱进行遗传距离分析.结果 我国黑龙江省绥芬河口岸和吉林省延边口岸的全沟硬蜱COⅠ基因序列与俄罗斯多个地区同源性为99％～100％,与哈萨克斯坦边境口岸阿尔泰地区的全沟硬蜱COⅠ序列同源性也达到99％～100％;绥芬河口岸和延边口岸全沟硬蜱的遗传距离≤0.003.结论 我国绥芬河口岸和延边口岸的全沟硬蜱与周边邻近国家的全沟硬蜱COⅠ基因序列高度一致,可能存在极高的基因交流或迁移.
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伯氏疏螺旋体PD91外膜蛋白C克隆表达及序列分析
目的构建伯氏疏螺旋体PD91菌株外膜蛋白C(OspC)的表达载体,克隆表达OspC,用于莱姆病的预防、诊断和致病机理上的研究.方法用PCR扩增PD91 ospC基因,定向克隆到表达载体PET-11D,构建重组质粒.采用酶切分析及序列测定等方法鉴定重组质粒的正确性.结果 ospC基因被正确克隆到表达载体PET-11D中.序列测定结果证实与已报道的ospC基因序列同源性介于62%～86%之间.结论我国PD91菌株的ospC编码基因与已报道菌株的ospC菌株在同源性上存在较大的差异.PET-11D-ospC重组质粒的成功构建为我国莱姆病的进一步研究奠定了基础.
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恒河猴基因组测序工作完成
美国Baylor医学院George Weinstock博士领导的恒河猴基因组成功破译出了猕猴的基因组,这是继人类和黑猩猩之后,科学家破译出的第3种灵长类动物基因组.今年4月13日出版的Science以封面文章形式发表了这项新成果.研究结果证实,虽然早在约2.5亿万年前,恒河猴从向人类进化的灵长类动物中分离出来,但人类和恒河猴基因组仍有93%的同源性.此项研究将有助于科学家进一步探索人类与恒河猴相似性及差异性背后的遗传学基础.通过比较人类和恒河猴基因组的异同可以获得许多有意义的结果.
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汉坦病毒东方田鼠分离株ZT10的分子特性研究
目的 测定从东方田鼠分离到的汉坦病毒ZT10株的全基因序列,了解该株分子基础.方法 提取ZT10病毒总RNA,对L、M、S基因进行RT-PCR扩增,产物经琼脂糖电泳分析,回收纯化后,将其克隆至pGEM-T载体中,然后进行核苷酸序列的测定及分析.结果 L基因组片段长度为6530个核苷酸,编码2151个氨基酸,与3株Seoul型汉坦病毒的L片段同源性为95.8%～99.7%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低.将推导的ZT10株编码的氨基酸序列与其他汉坦病毒L片段氨基酸序列进行比较.显示ZT10编码的RNA聚合酶也有6个比较保守的区域.基因组M片段长度为3651个核苷酸,编码1133个氨基酸.结论 序列分析表明,与Seoul型汉坦病毒的M片段同源性为84.0%～96.3%,而与HTN型汉坦病毒的同源性则较低,与从田鼠分离的汉坦病毒(Prospect Hill virus,Tula virus,khabarovsk virus,Isla vista virus)M片段核苷酸同源性仅为57.5%～60.9%.S基因片段与SEO型病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为87.9%～96.0%和96.9%～97.9%,与HTN型病毒株76～118的核苷酸和氨基酸同源性分别为71.3%和81.9%,与其他型汉坦病毒的同源均很低.表明ZT10属于SEO型汉坦病毒.
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深圳市H5N6、H7N9流感病毒HA-UTR基因分子特征分析
目的 了解深圳市H5N6、H7 N9流感病毒HA基因非翻译区(Untranslated region,UTR)的分子特征.方法 使用MEGA7.0、DNAStar7.1.0等生物信息学分析软件对全球及深圳H5N6、H7N9流感病毒HA基因的UTR进行核苷酸序列同源性分析及基因多态性分析.结果 3株2014-2015年深圳市H5N6病毒与其他H5NX病毒株比较,HA-3'UTR核苷酸同源性为77.4％～100％,H5N6-HA-3'UTR未见明显突变位点;HA-5'UTR核苷酸同源性为91.7％ ～ 100％,H5N6-HA-5'UTR第24、31位发生突变.11株2013-2014年深圳市H7N9病毒与其他H7NX病毒株比较,HA-5'UTR核苷酸同源性为81.2％ ～100％,H7N9-HA-5'UTR在第2～6、9、10、12及15 ～ 17位发生多位点突变.结论 深圳市人感染H5N6及H7N9病毒HA的UTR保守区高度同源性及其可变区具有基因多态性.
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外周血TTV抗体检测及临床评价
我们根据目前国际上报道的多株TTV全序列,以Okamoto发表的序列为模板,对照选择其中同源性均在91%以上相对保守的ORF1区中一段克隆并表达,用这段表达产物作为抗原,建立了ELISA TTV IgG、IgM抗体检测方法,并检测一些人群.本院辨认健康体检人群124份,传染科各类肝炎人群55份(以慢性乙型肝炎为主),消化科胃肠病人群39份,传染科肝穿刺组织32份.
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硝普钠对TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡的影响
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)与FASL具有高度的同源性,又名APO-2L[1].研究发现,TRAIL可选择性杀伤多种组织来源的恶性肿瘤细胞、转化细胞和病毒感染细胞,而对正常细胞则无细胞毒性.
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霍乱弧菌的一种新的不含毒素基因 CTXФ基因组的复制功能研究
引起霍乱流行的霍乱弧菌菌株在遗传方面的一个重要特点是都带有霍乱毒素(CT)的基因ctxAB.对O139群菌株的分析中,发现一种新的不含ctxAB的CTXФ基因组,其中的rstR基因和ig-2区与已发现的CTXФ基因组的相应序列无明显同源性,其他的基因很保守,也不含ctxAB基因,命名为nct-CTXO139Ф.
