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耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的耐药机制研究
目的：探讨耐亚胺培南肺炎克雷伯菌的流行病学特征和β‐内酰胺酶基因型，为临床合理用药和感染控制提供依据。方法收集2014年2－11月临床分离25株耐亚胺培南肺炎克雷伯菌，采用VIT EK‐2微生物系统检测菌株的药物敏感性；改良 Hodge试验检测碳青霉烯酶；PCR检测β‐内酰胺酶基因 KPC‐2、SHV、CTX‐M、IM P、VIM、NDM‐1、OXA‐48；采用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链技术（ERIC‐PCR）对菌株进行同源性分析。结果在检测的18种药物中，哌拉西林／他唑巴坦、氨苄西林／舒巴坦、头孢唑林、头孢曲松、氨苄西林、厄他培南、亚胺培南、氨曲南的耐药率均为100．0％，磺胺甲噁唑／甲氧苄啶的耐药率低为32．0％，其次为阿米卡星和妥布要素均为（68．0％）；改良H o dg e试验阳性20株（80．0％）；25株菌均检测到 S H V基因，20株菌检测到CTX‐M基因，15株检测到KPC‐2基因，1株菌检测到 IMP‐4基因，3株菌检测到NDM‐1基因，未检测到 VIM、OXA‐48基因；25株菌分为6型，为A、B、C、D、E、F ，分别有15、5、2、1、1、1株。结论耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌多药耐药严重，产生β‐内酰胺酶是菌株对多种药物耐药的主要机制，且菌株存在克隆性传播，3株菌检测到NDM‐1基因，应引起相关部门的重视。
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NICU患者肺炎克雷伯菌感染的环境传播与定植状态研究
目的 分析肺炎克雷伯菌(KP)在神经危重症监护病房(NICU)环境中的传播情况和定植状态,从而为临床KP感染的预防控制提供理论依据.方法 对医院NICU2015年1月-10月空气环境和KP感染患者的周围空气和病床单位进行细菌学目标监测,并应用脉冲场凝胶电泳法对于分离出的KP菌株进行同源性分析.结果 在收治221例患者中有154例感染患者,感染率为69.68％,其中148例进行病原学检查,检出非重复病原菌99株,其中KP 25株,占25.25％,在NICU感染患者的病房环境细菌学监测中共检出KP 3株,有2株分别来源于1例病毒性脑炎患者的空气和床头柜表面采集标本,1株来源于KP感染患者周围空气标本,对其中27株KP分离株成功分型.在27株菌PFGE谱型中,1521Y和1521、1501和1513、1520和1525为同一型;A'和T'为同一型,且与1503菌株相似度为86.7％.结论 NICU病房环境不但是KP感染的重要传播途径,而且KP能够在NICU的病房空气和床头柜等病床单位环境中定植生存,从而成为重要的感染源.
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MALDI-TOF MS技术在多重耐药大肠埃希菌同源性分析及自建库中的应用研究
目的 评价基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术对多重耐药大肠埃希菌同源性分析的能力,并建立多重耐药大肠埃希菌同源性质谱分型及药敏参考数据库.方法 对2016年3月-2017年3月医院632株多重耐药大肠埃希菌(ESBLs) Eco进行MALDI-TOF MS鉴定,利用MALDI-Biotyper软件进行同源性分析及自建库;使用VITEK 2.0全自动细菌鉴定及药敏分析仪进行药敏实验,用WHONETS.6软件进行药敏结果分析.结果 2016年3月-2017年3月医院临床送检的标本中共检出(ESBLs) Eco 632株,检出率35.91％,检出标本主要有痰、尿液和血液,各科室检出(ESBLs) Eco的检出率分别为泌尿外科10.27％、肾内科8.69％、老年病科7.11％、急诊外科5.21％、血液风湿科4.90％;632株(ESBLs) Eco经MALDI-TOF MS同源性聚类分析,分为质谱数据差异性较大的两大簇六个分型,其中Ⅰa型27.00％、Ⅰ b1型11.00％、Ⅰ b2型9.00％、Ⅱa1型4.50％、Ⅱa2型33.5％、Ⅱb型15.00％;whonet5.6软件药敏分析显示六个分型的药敏结果也存在一定的差别;普外Ⅰ、普外Ⅱ、血液风湿科、急诊外科五个科室(ESBLs) Eco同源性相对较高(≥50％),提示以上科室可能存在院内交叉感染;初步建立了(ESBLs) Eco同源性质谱分型及药敏参考数据库并进行验证,质谱鉴定合格率83.3％;药敏比对合格率76.0％.结论 MALDI-TOF MS同源性聚类分析快速、准确,建立了(ESBLs) Eco同源性质谱分型及药敏参考数据库,大大缩短了实验室多重耐药菌的鉴定及同源性分析时间,并且在菌株鉴定的同时为临床提供药敏结果参考,指导临床第一时间经验用药,为临床多重耐药菌感染的快速诊断及治疗赢得宝贵时间.
关键词： MALDI-TOF MS 多药耐药 大肠埃希菌 同源性 -
N IC U耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药及多位点序列分析
目的 分析NICU 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药及同源性,为临床防控CRKP 提供实验依据.方法 收集2016 年1 - 12 月某教学医院NICU 首次分离的CRKP ,使用PCR 方法检测常见ESBLs 基因(SHV ?TEM ?CTX-M1 ?CTX-M2 ?CTX-M8 ?CTX-M9 ) ?AmpC 酶基因(HAD ?CMY) ?碳青霉烯酶基因(KPC ?NDM ?SME ?GES ?VIM ?IMP ?OXA-48)和多粘菌素耐药基因MCR-1 等,并采用多位点序列分析(MLST)方法分析同源性.结果 共收集44 株CRKP ,KPC-2 基因携带率为100% ,DHA-1 携带率为70 .5% ,CTX-M 基因携带率为68 .2% ,MLST 共有4类分型,ST11 型35 株,ST48 型6 株,ST134 型1 株,未分型4 株.结论 NICU 病区分离CRKP 均为多重耐药,NICU 以携带KPC-2 基因的ST11 型菌株流行为主,应规范抗菌药物使用,加强消毒隔离措施,控制流行传播.
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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌第1类整合子可变区启动子检测及同源性分析
目的 了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)中第1类整合子可变区启动子的种类和排列方式,分析其与介导的耐药基因表达之间的关系;并明确整合子阳性菌株的同源性情况.方法 运用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳以及测序的方法,以2012-2014年医院临床分离42株第1类整合子阳性CR PA为对象,检测其可变区启动子和同源性.结果 42株实验菌株中强启动子PcS为2株、弱启动子PcW为2株,剩余38例皆为杂合1型启动子PcH1;位于Pc下游的P2启动子42例皆为-35到-10区间隔有14个碱基序列的无活性型的启动子;42株CR-PA经肠杆菌基因间重复共有序列PCR (ERIC-PCR)基因分型,主要分为A、B、C、D、E5型,其中A1型32株,A2型6株,B、C、D和E型各为1株,A型菌株主要是来源于ICU及神经外科.结论 本地区临床分离CR PA中第1类整合子可变区的启动子主要以杂合1型启动子PcH1为主,P2启动子全为无活性型;整合子阳性菌株的基因分型间呈现高度的同源性,可能存在着医院的克隆传播.
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碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌医院暴发流行的耐药机制及同源性研究
目的：研究临床分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）时间分布规律、耐药机制及菌株同源性，为预防控制医院感染提供依据。方法自2011年1月分离出第1株CRKP后，对随后分离的所有CRKP实时监控；检测各分离株的主要耐药基因、膜孔蛋白基因突变及插入序列 ISKpn6表达状况；对暴发流行期间分离的22株CRKP分别用凝胶电泳（PFGE）及多位点序列分型（MLST）法探讨其菌株同源性。结果2011年1月－2013年12月共分离38株CRKP ，其中2011年分离率为13．2％；2012年上半年分离率为57．9％，呈暴发流行；2012年下半年及2013年全年分离率分别为18．4％及10．5％。38株菌株皆产K PC‐2酶，T EM‐1、S H V的携带率及插入序列ISKpn6阳性率均为100％；DHA‐1及LAP‐2阳性率分别为47．4％及50％；膜孔蛋白编码基因 OmpK35及OmpK36的突变率分别为94．7％及100％。PFGE显示，暴发流行期间22株 CRKP分属 A1～E 7个克隆，其同源性达75％以上；MLST显示，22株菌株的优势型为ST11及ST258，各占31．8％。结论本次暴发流行CRKP同时存在多种耐药机制，以S T 11及S T 258型为主，加强综合预防控制措施能有效遏制该菌株传播流行。
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血流感染洋葱伯克霍尔德菌多位点序列分型研究
目的 探讨血流感染洋葱伯克霍尔德菌的同源性,以便更好地控制短时间内洋葱伯克霍尔德菌引起的院内感染.方法 对医院2013年5-6月分离的15株血流感染洋葱伯克霍尔德菌的菌株应用多位点序列分型方法(MLST),聚合酶链式反应(PCR)扩增atpD、gltB、gyrB、recA,lepA、phaC和trp B 7个管家基因片段,测序结果与MLST数据库中的数据比对分析,获得菌株各管家基因的编号和ST型,研究其同源性.结果 15株菌中,13株菌的7个管家基因完全相同,同时g y r B管家基因出现新的序列型,为新的序列型(S T).15株洋葱伯克霍尔德菌被分为3个基因型,分别为S T 482、S T 608和一个新的S T序列,来自神经外科的13株菌为同一个S T型.结论 医院短时间内洋葱伯克霍尔德菌引起的血流感染属医院感染暴发,神经外科的13株菌为同一S T型.其中13株菌的ST型不仅相同且是新的ST型,与另外两科室的菌株不同.MLST在洋葱伯克霍尔德菌的分子生物学分型中的应用,表现出了较高的分辨率,对医院洋葱伯克霍尔德菌血流感染暴发的调查有重要意义.
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血液感染多药耐药鲍氏不动杆菌的同源性分析
目的：通过对引起血液感染的多药耐药鲍氏不动杆菌（MDRAB）临床分离株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分子分型分析，探讨各耐药菌株之间的同源性，了解MDRAB的流行和分布特征。方法收集医院2007年4月－2013年6月引起血液感染MDRAB临床分离株95株，采用PFGE技术并结合Bionumerics Applied Maths软件分析各耐药菌株之间的同源性。结果95株菌株分为A －N共14型克隆株，以克隆C、E、J为主，分别占20．00％、29．47％、20．00％，主要分布于呼吸内科病区、重症监护室和急诊病房，从克隆的时间分布显示，大部分克隆存在散在流行。结论2007年4月－2013年6月期间引起血液感染的MDRAB有14型克隆株，其中以克隆C、E、J为主，主要分布于呼吸内科病区、重症监护室和急诊病房，应在这些科室展开医院感染目标性监测和控制。
关键词： 多药耐药鲍氏不动杆菌 血液感染 同源性 -
耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因检测及同源性分析
目的：探究医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）临床分离株碳青霉烯酶基因及其同源性，为临床治疗提供参考依据。方法收集医院2015年2－11月临床分离的非重复CRKP菌株76株，采用MIC法检测菌株对药物的敏感性，PFGE法分析阳性菌株同源性。结果均为肺炎克雷伯菌；头孢唑林、头孢噻肟、哌拉西林和氨苄西林／舒巴坦耐药率均为100．00％；76株CRKP 51株携带blaKPC-2；7株携带blaIMP-4；4株携带blaNDM-1；3株同时携带blaKPC-2和blaIM P-4，2株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1；51株菌株除携带blaKPC-2外，还产ESBLs和AmpC酶。结论医院耐CRKP耐药机制以携带blaKPC-2为主，还同时产ESBLs和AmpC酶，且接近半数为同一克隆株，应重视细菌耐药监测及医院感染的防控。
关键词： 碳青霉烯酶酶基因 CRKP Carba NP试验 blaKPC-2 同源性 -
医院感染鲍氏不动杆菌耐药分析及同源性研究
目的 了解鲍氏不动杆菌的分布和耐药情况,分析其同源性,为临床治疗提供依据.方法 收集2014年1月-2016年12月临床分离的1489株鲍氏不动杆菌,采用VITEK-Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及耐药分析,同时选取60株耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)进行同源性分析,使用SPSS18.0软件进行统计分析.结果 3年内临床住院患者检出病原菌13828株,其中有1489株鲍氏不动杆菌,分离率为10.8%;主要来自ICU;以痰液标本为主;头孢唑林、头孢曲松、氨曲南、呋喃妥因的耐药率均>95%;CRAB对阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林/他唑巴坦、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦、庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星、妥布霉素、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、替加环素耐药率均高于碳青霉烯类药物敏感的鲍氏不动杆菌(CSAB),其差异有统计学意义(P<0.05);60株CRAB的同源性分析主要有6型,其中A型32株、B型7株、C型6株、D型7株、E型5株、G型3株.结论 医院分离鲍氏不动杆菌集中分布在ICU和神经外科,其耐药性现象严重,存在着耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌A型克隆株的散播流行,应重视鲍氏不动杆菌感染的预防和监测.
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泛耐药肺炎克雷伯菌聚集性检出的调查与控制
目的 对泛耐药肺炎克雷伯菌聚集性检出进行流行病学调查,控制其医院内传播,防止引起医院感染的暴发.方法 收集检出泛耐药肺炎克雷伯菌的4例病例临床资料,进行流行病学调查分析,并对检出的4株泛耐药肺炎克雷伯菌进行同源性鉴定,分析是否存在医院内传播及其原因,制定控制措施.结果 检出的4株菌为同源菌株,其中1例为院外带入,2例为定植,1例为院内获得性泌尿系感染,存在医院内的接触传播,加强控制措施后,其传播得到有效控制,未引起医院感染的暴发.结论 该事件为一起同种同源泛耐药肺炎克雷伯菌的聚集性检出事件,应警惕多药耐药菌的聚集性检出,及时发现并采取有效的控制措施,可防止其引起医院感染的暴发.
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临床与环境分离肠球菌属的耐药性及同源性分析
目的 利用分子分型方法,调查住院患者各类标本中分离到的肠球菌属与环境中肠球菌属分离株之间的同源性,探寻肠球菌属医院感染的传播途径及潜在高危环节.方法 收集于同时期医院医疗环境及临床标本的51株粪肠球菌和16株屎肠球菌作为研究对象,用VITEK-32微生物鉴定药敏分析系统进行菌种鉴定和药敏；利用Diversilab基因分型系统进行同源性分析.结果 肠球菌属分离未发现万古霉素耐药株,同时为耐高水平氨基糖苷类粪肠球菌9.8％、屎肠球菌12.5％；Diversilab基因分型系统将51株粪肠球菌分成5组流行克隆和17株散发克隆,16株屎肠球菌分成3组流行克隆和4株散发克隆.结论 粪肠球菌对一般所选抗菌药物敏感性高,屎肠球菌对抗菌药物的耐药率明显高于粪肠球菌；肠球菌属的医院感染形式有交叉感染、自身感染、母婴垂直感染,其中以粪肠球菌G1组克隆的产科交叉感染为主要存在感染形式,此外环境中感染菌定植也是医院感染播散的重要环节.
关键词： 肠球菌属 Diversilab基因分型系统 同源性 耐药率 -
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型及同源性研究
目的 对下呼吸道标本中分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药机制、同源性及分子生物学分型进行研究,从分子水平了解其耐药特点,为临床用药提供参考依据.方法 于2012年7月-2013年4月住院患者送检的下呼吸道标本中分离出金黄色葡萄球菌66株,常规方法进行分离鉴定,根据2013年CLIS规定检测其耐药性;PCR技术检测mecA基因,对其进行SCCmec分子生物学分型及耐消毒剂基因(qacA/B)检测;利用RAPD技术对其进行同源性分析.结果 凝胶电泳结果表明,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分子分型全部为ccrAB3型,mecA、qacA/B基因的携带率100.0％,并且同源性分析有5个克隆型.结论 临床分离的下呼吸道标本耐甲氧西林金黄色葡萄球菌全部为ccrAB3型,并对普通消毒剂有相当程度的抗性;分离到的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中同源性分型不同菌株耐药率与其基因型之间存在有一定的关系,且这些菌株均为多药耐药株.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 葡萄球菌染色体分型 同源性 下呼吸道标本 -
19株产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌同源性分析
目的 通过对19株产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌进行同源性鉴定,分析产ESBLs大肠埃希菌在医院的分布及传播.方法 收集医院1个月内检出的产ESBLs大肠埃希菌菌株,采用rep-PCR法对其同源性 进行鉴定,根据检出病例是否为院内获得,分析其在医院的分布及传播.结果 共收集19株产ESBLs大肠埃希菌,其中10株为医院感染,2株为定植病例,7株为院外获得感染.19株菌均非同源.结论 医院产ESBLs大肠埃希菌为非同源菌株,医院控制措施有力,未引起产ESBLs大肠埃希菌的广泛院内传播.
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37株耐万古霉素屎肠球菌基因型及同源性分析
目的 检测37株耐万古霉素屎肠球菌(VREFm)的基因型以利于临床治疗选药,重复基因外回文序列-聚合酶链反应(REP-PCR)同源性分析为分子流行病学提供依据.方法 依据2006年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)推荐的纸片扩散法和琼脂稀释法对VREFm进行药敏试验;PCR方法检测万古霉素的耐药基因;用REP-PCR进行同源性分析.结果 37株屎肠球菌对万古霉素、替考拉宁、红霉素和氨苄西林均100.0%耐药,万古霉素MIC＞512 μg/ml,基因型均为vanA;耐药率左氧氟沙星为89.2%、庆大霉素为86.5%、环丙沙星为91.9%、呋喃妥因为59.5%、氯霉素为5.4%;37株VREFm扩增出3～14条带,大小在100～2 000 bp之间,分为6个型.结论 37株VREFm表型与基因型一致;VREFm对多种抗菌药物耐药;REP-PCR方法简便、快速、花费低,可用于肠球菌属同源性检测.
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50株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PVL基因检测及同源性分析
目的 调查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药谱及其同源性和杀白细胞素(PVL)携带情况,为临床治疗、选药和流行病学调查提供依据.方法 根据CLSI指南中的纸片扩散法做药敏试验,用PCR法检测mecA基因和PVL基因,用重复基因外回文序列-聚合酶链反应(Rep-PCR)进行同源性分析.结果 50株MRSA均检测出mecA基因,对苯唑西林和头孢西丁均耐药,对替考拉宁和万古霉素的敏感性为100.092.5%、20.8%、1.9%、3.8%;22株MSSA对以上抗菌药物的敏感率明显高于MRSA)50株MRSA中20株检测出PVL基因,阳性率为40.0%,部分MRSA菌株有100.0%同源性.结论 MRSA对抗菌药物的耐药性明显高于MSSA,尚未发现对万古霉素和替考拉宁的耐药菌株,MRSA携带PVL基因较高,部分MRSA菌株有较高同源性.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 同源性 杀白细胞素 耐药 -
耐碳青酶烯类鲍氏不动杆菌blaOXA基因型检测及同源性分析
目的 了解碳青酶烯类耐药鲍氏不动杆菌的耐药性、blaOXA基因型及同源性.方法 琼脂稀释法测定鲍氏不动杆菌对14种抗菌药物的低抑菌浓度(MIC),PCR扩增ISAbal、blaOXA23和bla 0XA-66/OXA-51基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析基因同源性.结果 20株鲍氏不动杆菌对亚胺培南和美罗培南均耐药,其中19株为多药耐药株,1株ISAbal和blaOXA-23阳性,2株blaOXA一66阳性,16株ISAbal、blaOXA-23和blaOXA-66均阳性,1株以上3种基因全部阴性;PFGE分析结果显示,A型(12株)、B型(2株)、C型(2株)、D型(3株)、E型(1株).结论 医院感染的鲍氏不动杆菌对碳青酶烯类耐药可能与产0XA-23酶有关,并存在院内的克隆传播.
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广州地区多药耐药鲍氏不动杆菌的同源性分析
目的 分析广州地区多药耐药鲍氏不动杆菌的同源性,为临床预防治疗和控制医院感染提供依据.方法 收集广州地区多所三级甲等医院临床标本分离的非重复多药耐药鲍氏不动杆菌113株,并用纸片扩散法进行药敏试验,使用细菌基因组重复序列PCR(REP-PCR)技术以及DiversiLab细菌同源性分析技术对菌株进行同源性分析.结果 113株多药耐药鲍氏不动杆菌对阿米卡星耐药率为11.5％、亚胺培南75.2％、美罗培南73.5％、头孢哌酮/舒巴坦69.0％,对其他头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹喏酮类等抗菌药物均显示出高水平的耐药,耐药率为80.0％～100.0％；REP-PCR将113株鲍氏不动杆菌分为4组基因型(A～D),其中A型62株,为主要的流行型别,分别为A1型31株、A2型12株、A3型10株、A4型9株；B型29株分别为B1型18株、B2型11株；C型19株分别为C1型11株、C2型8株；D型3株.结论 广州地区多药耐鲍氏不动杆菌耐药率较高,且大多数菌株具有高度同源性.
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地震患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌基因分型及同源性比较研究
目的 了解从地震受伤患者分离到的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因特征,并与同期非灾区患者分离的MRSA进行比较.方法 用葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)多重PCR分型技术进行基因分型,并检测其杀白细胞毒素基因(PVL),采用Diversilab进行同源性比较,并进行药敏分析.结果 地震受伤患者与非灾区患者分离到的MRSA均表现为SCCmecⅢ型,PVL阴性;同源性分析显示,分离到的MRSA与社区获得性MRSA代表株中MLST分型ST8型同源性相对较好.结论 医院获得性MRSA与社区获得性MRSA可能存在交叉传播,在灾后急救现场及当地医院要加强无菌观念,高度警惕医源性交叉感染的传播.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 基因分型 同源性 -
多药耐药鲍氏不动杆菌基因同源性分析及流行病学调查
目的 了解重症监护病房(ICU)流行的多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-AB)耐药谱特征及其同源性,为临床防治提供依据.方法 MDR-AB分离自2007年5月,4株系住ICU肺部感染患者的痰标本,4株系病房物体表面;按<全国检验技术操作规程>要求操作,用全自动微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对8株鲍氏不动杆菌进行基因分型,明确其是否为同一菌株的克隆.结果 4株痰标本的鲍氏不动杆菌对包括碳青酶烯类在内的多种抗菌药物耐药,经DNA分型同为A型,另4株物体表面的鲍氏不动杆菌经DNA分型亦同为A型,8株有高度同源性,证实为同一克隆株.结论 鲍氏不动杆菌为多药耐药株,同一克隆株在不同感染个体间的相互传播导致了ICU内感染的流行;1号株可能是交叉感染的源头,医护人员标准预防未到位,尤其是手卫生问题是可能的传播途径.
