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中国莱姆病螺旋体PD91重组OspC的鉴定和抗原性检测
目的重组中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C(OspC)并在大肠埃希菌中表达,用于早期莱姆病诊断的研究.方法用聚合酶链反应(PCR)扩增出PD91外膜蛋白C基因,定向克隆到表达载体PET-11D,构建重组质粒PET-11D-ospC.用PCR、限制性内切酶分析及序列测定等方法鉴定重组质粒.用Western Blot检测其抗原性.结果 OspC 基因被正确克隆到表达载体PET-11D中.序列测定结果证实与国外已报道的序列存在一定的差异.OspC具有强抗原性.结论该项研究为国内莱姆病的早期特异性诊断的研究奠定了基础.
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伯氏疏螺旋体PD91外膜蛋白C克隆表达及序列分析
目的构建伯氏疏螺旋体PD91菌株外膜蛋白C(OspC)的表达载体,克隆表达OspC,用于莱姆病的预防、诊断和致病机理上的研究.方法用PCR扩增PD91 ospC基因,定向克隆到表达载体PET-11D,构建重组质粒.采用酶切分析及序列测定等方法鉴定重组质粒的正确性.结果 ospC基因被正确克隆到表达载体PET-11D中.序列测定结果证实与已报道的ospC基因序列同源性介于62%～86%之间.结论我国PD91菌株的ospC编码基因与已报道菌株的ospC菌株在同源性上存在较大的差异.PET-11D-ospC重组质粒的成功构建为我国莱姆病的进一步研究奠定了基础.
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中国莱姆病螺旋体FP1外膜蛋白C克隆表达及免疫保护性初步研究
目的：克隆并表达中国莱姆病螺旋体( Borrelia afzelli)基因型代表菌株FP1的外膜蛋白C( OspC),并对其免疫保护性进行初步研究。方法聚合酶链反应( PCR)扩增莱姆病螺旋体FP1的ospC基因,克隆至原核表达载体pET-30a上,构建pET-30a-OspC重组质粒,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG诱导表达。表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化,SDS-PAGE电泳、Western blot分析。将rOspC免疫新西兰白兔,间接免疫荧光方法( IFA)检测免疫前、后兔血清中特异性抗体IgG的滴度,进行体外中和试验,从而对OspC的免疫保护性有初步的了解。结果重组质粒pET-30a-OspC构建成功并在宿主菌内高效表达；Western blot表明rOspC与莱姆病螺旋体FP1的多抗有明显的抗原抗体反应；rOspC免疫兔血清IgG效价显著升高(1∶3200或1∶6400)；体外中和试验表明实验组的免疫兔血清均能中和106个/ml的莱姆病螺旋体。结论莱姆病螺旋体的rOspC蛋白具有一定的免疫保护性,可作为研制莱姆病多价亚单位疫苗的一个成分。
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用基因工程抗原建立ELISA检测莱姆病特异IgM抗体
目的利用伯氏疏螺旋体基因工程抗原外膜蛋白C(OspC)建立间接ELISA，检测莱姆病特异性抗体IgM。方法基因工程抗原OspC的包被浓度和酶标抗μ链单抗所用浓度及血清稀释倍数，均由方阵滴定法确定，并进行精密度、特异性试验、阻断试验和干扰试验。结果 OspC佳浓度为150 μg/L，批内平均变异系数4.6%，批间平均变异系数14.2%，用ELISA测定临床已确诊莱姆病33例，57例正常体检者，同时与进口ELISA试剂盒比较，两方法符合率97.8%。结论该方法特异性强、敏感性高、实验结果可靠，是莱姆病早期诊断的好方法。
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中国莱姆病螺旋体PD91外膜蛋白C表达载体的构建及序列分析
目的构建莱姆病螺旋体PD91菌株外膜蛋白C(OspC)的表达载体,克隆表达OspC以便用于莱姆病诊断研究.方法设计引物,用PCR从PD91扩增出ospC基因,定向克隆到表达载体PGEX-5X-1,构建重组质粒.通过PCR、酶切分析及序列测定等方法鉴定重组质粒.结果 ospC基因被正确克隆到表达载体PGEX-5X-1中.序列测定结果证实与国外已报道的ospC基因序列同源性在65%～92%.结论 OspC的编码基因在不同菌株间的同源性存在较大的差异.PGEX-5X-1-ospC重组质粒的成功构建,为我国莱姆病特异性诊断试剂的研究奠定了基础.
