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重组MIF腺病毒载体的构建、包装与纯化及其意义
目的：采用分子生物学技术构建人巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor，MIF）基因腺病毒表达载体，检测AD-MIF腺病毒转染人气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cell，ASMC）后蛋白表达。方法用凝胶电泳、测序、Western blotting等方法鉴定MIF质粒。用PCR技术扩增MIF基因，构建MIF-EGFP基因载体，重组到pAd腺病毒，转染HEK293细胞后扩增病毒，经3轮扩增后病毒达到合适的滴度，Western blotting检测到腺病毒感染的气道平滑肌细胞内MIF蛋白表达明显增高。结果凝胶电泳、测序和Western blotting检测MIF基因分子量、序列以及蛋白表达正确，并且成功构建MIF腺病毒，病毒浓度达2E+9PFU/ml。结论成功构建MIF腺病毒，为MIF基因治疗支气管哮喘提供了实验基础。
关键词： 巨噬细胞移动抑制因子 腺病毒载体 气道平滑肌 支气管哮喘 -
平滑肌性质和排列改变对气道壁应力分布影响的数值模拟研究
气道平滑肌肥大、增生、力学性质和排列方向改变发生于许多慢性呼吸系统疾病中,引起气道内应力环境发生变化,成为导致气道狭窄的重要原因之一.本研究基于人体气道解剖结构,构建带有螺旋平滑肌层结构的气道三维有限元模型,并采用数值模拟的方法来研究平滑肌性质和排布变化对于气道在收缩过程中力学行为的影响.结果表明,气道内壁和平滑肌层在气道收缩过程中承受较大的应力;病理条件下平滑肌细胞数量和质量增加都将直接导致平滑肌层受力增大;平滑肌刚度的增加同样会引起该层组织承受更大应力;而在同等条件下,平滑肌细胞排列角度增加则会降低平滑肌层的应力值.
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支气管镜下射频消融支气管热成形术的临床应用
中、重度哮喘患者存在气道高反应性,往往伴随有气道平滑肌肥厚,其在哮喘恶化、慢性气流的限制中发挥着作用,一直被视为哮喘发病的重要角色.支气管镜下射频消融支气管热成形术是一种新型的支气管镜介入治疗技术,通过射频探针释放可控制的热能,减少积聚的气道平滑肌,并可降低支气管收缩、狭窄.可减少气道平滑肌数量和改善哮喘控制,在改善哮喘持续状态方面超过目前的治疗方法.
关键词： 支气管哮喘 支气管镜下射频消融支气管热成形术 气道平滑肌 支气管镜 射频消融 -
长效β2受体激动剂对气道平滑肌细胞 M3受体的影响
目的：探讨长期单独使用肾上腺素β2受体(β2 AR)激动剂及其与糖皮质激素联用时对气道平滑肌细胞胆碱能毒蕈碱受体3型(M3 R)的影响。方法使用免疫印迹法检测福莫特罗及糖皮质激素对原代培养的气道平滑肌细胞 M3 R 蛋白的影响。结果福莫特罗呈时间和剂量依赖性上调 M3 R 蛋白的表达，布地奈德能够抑制福莫特罗上调 M3 R 的作用。结论长期规律使用肾上腺素β2受体(β2 AR)激动剂导致严重哮喘恶化的风险增加可能与其上调 M3 R 蛋白有关，而糖皮质激素与其联用能够抑制这一作用。
关键词： 长效肾上腺素 β2 受体激动剂 胆碱能受体 M3 气道平滑肌 哮喘 -
参麦注射液对哮喘模型大鼠气道平滑肌钙通道活性的影响
目的:探讨参麦注射液对哮喘模型大鼠气道平滑肌L型钙通道活性的影响.方法:应用膜片钳全细胞记录技术,观察哮喘大鼠气道平滑肌L型钙离子通道活性的变化及静脉应用参麦注射液对其活性的影响.结果:①哮喘气道平滑肌钙通道活性较正常对照组显著升高(P＜0.05);②静脉应用参麦注射液可显著下调增强的钙通道活性(P＜0.05).结论:参麦注射液可显著下调哮喘大鼠气道平滑肌钙通道活性,可能对哮喘的防治具有一定的积极意义.
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沙丁胺醇对大鼠支气管平滑肌细胞容量性钙内流的影响
目的:观察沙丁胺醇对正常和IL-13刺激的大鼠支气管平滑肌细胞(rBSMC)胞质Ca2+信号的影响,探讨沙丁胺醇治疗哮喘的作用机制.方法:体外培养大鼠支气管平滑肌细胞,利用共聚焦显微镜测定胞质Ca2+水平,观察沙丁胺醇作用后正常和IL-13刺激后的rBSMC的钙池Ca2+释放和容量性Ca2+内流(CCE)的变化.结果:IL-13 10μg/L处理24 h后,rASMC的Ca2+释放和Ca2+内流均高于正常对照组;10μmol/L沙丁胺醇不影响正常rASMC的Ca2+释放,但是显著抑制CCE;10μmol/L沙丁胺醇对IL-13刺激后的Ca2+释放和CCE的上升均有抑制作用.结论:沙丁胺醇可以抑制Th2细胞因子刺激后的气道平滑肌细胞的容量性Ca2+内流,从而降低胞质Ca2+水平.提示容量性CCE在气道高反应性的发生以及beta 2受体激动剂的治疗效应中具有重要作用.
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异丙托溴铵的药理基础及临床应用现状
抗胆碱能支气管扩张剂异丙托溴铵是一种人工合成的非脂溶性季铵类药物,可竞争性抑制乙酰胆碱对气道平滑肌的收缩作用.肺内存在着3种乙酰胆碱能毒覃碱受体:M1、M2和M3,异丙托溴铵为非选择性M-胆碱受体阻断药,对各种亚型的受体均有阻断作用,但对M1、M3受体的阻滞作用远强于M2受体.通过抑制细胞内环磷鸟苷(cGMP)生成,减少环磷腺苷(cAMP)降解,降低细胞内钙离子浓度,使气道平滑肌松弛、肥大细胞释放炎性介质下降,终止气道扩张,呼吸阻力减小.一般认为迷走神经纤维及M胆碱受体的分布密度随气道口径变小而相应降低,故异丙托溴铵对中央气道的扩张作用较强.
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Rho激酶与哮喘气道高反应性
炎症细胞和结构细胞促进哮喘患者支气管的急性收缩和慢性气道重建.当前哮喘的治疗不能有效地抑制气道高反应性和气道重建.近来发现Rho激酶在哮喘的发病中起重要作用,而Rho激酶抑制剂可抑制气道平滑肌收缩、调节气道平滑肌特异性的基因转录、减轻气道壁增厚和气道炎症,从而减轻急性和慢性气道高反应性.
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支气管热成形术治疗重度哮喘的研究(附2例报道)
目的 报道支气管热成形术(BT)治疗重度哮喘的疗效.方法 回顾性分析2例接受BT治疗的重度持续性哮喘患者临床资料.结果 2例患者手术过程均顺利,耐受良好.除第2例患者第3阶段术后出现肺部感染外,其余均无特殊不适.3个阶段完成术后患者哮喘控制评分(ACT)、哮喘控制问卷(ACQ)评分、哮喘生命质量问卷(AQLQ)评分及肺功能均较术前基线水平改善.结论 BT治疗重度哮喘患者安全、有效、耐受性良好.
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缺氧促使鼠气道平滑肌细胞丝裂原活化蛋白酶表达
目的探讨缺氧情况下鼠气道平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MApK)的变化.方法雄性Wistar大鼠采用缺氧方法,用随机数字表法随机分为正常对照组、缺氧4周组,每组6只.按实验要求完成缺氧时间,12 h内留取肺叶组织,行免疫组织化学.结果免疫组织化学染色显示,对照组大鼠肺小动脉内膜有散在免疫阳性染色,低氧组大鼠肺气道内膜则可见明显的免疫阳性染色.经灰度扫描,低氧组大鼠肺气道壁MAPK免疫染色阳性强度较对照组明显增强(P＜0.01).结论MAPK在缺氧性肺病引起的气道平滑肌细胞增生中可能起着重要作用.
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钾通道与支气管哮喘
钾通道在气道平滑肌的收缩和松弛反应中起介导作用.本文总结了气道平滑肌上钾通道的分布和功能,各种收缩和松弛激动剂对钾通道的影响,钾通道在哮喘发病中的意义以及钾通道开放剂对支气管的作用及应用前景.
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参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病肺气虚证大鼠气道平滑肌中乙酰化组蛋白 H4、HDAC2和 NF-κB p65表达的影响
目的：观察参芪补肺汤对慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺气虚证大鼠支气管平滑肌（ASM）中乙酰化组蛋白H4、组蛋白去乙酰化酶-2（HDAC2）和核因子-κB p65（NF-κB p65）表达的影响。方法取 SD 大鼠40只，随机分为正常组、模型组、参芪补肺汤组、氨茶碱组，每组10只。运用气管内注射脂多糖加烟熏28 d 的方法建立 COPD 肺气虚证大鼠模型。光镜下观察肺组织的病理形态学变化，运用图像分析法测量小气道管壁和 ASM的厚度，采用免疫组化和 Western blot 方法检测大鼠 ASM 中乙酰化组蛋白 H4、HDAC2和 NF-κB p65的蛋白表达，实时荧光定量 PCR 方法检测大鼠 ASM 组织中 HDAC2 mRNA 和 NF-κB p65 mRNA 的表达。结果与正常组比较，模型组大鼠气道管壁和 ASM 厚度明显增高（P <0.05）；与模型组比较，参芪补肺汤组和氨茶碱组气道管壁和 ASM 厚度明显降低（P <0.05）；参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异无统计学意义（P >0.05）。与正常组比较，模型组乙酰化组蛋白 H4的蛋白表达、NF-κB p65 mRNA 和蛋白的表达明显增高（P <0.05）；HDAC2 mRNA 和蛋白的表达均明显降低（P <0.05）；与模型组比较，参芪补肺汤组和氨茶碱组乙酰化组蛋白 H4的蛋白表达、NF-κB p65 mRNA 和蛋白的表达明显增高（P <0.05）；HDAC2 mRNA 和蛋白的表达明显降低（P <0.05）。参芪补肺汤组与氨茶碱组比较差异均无统计学意义（P >0.05）。结论参芪补肺汤可抑制 COPD 肺气虚证模型大鼠 ASM 增殖，其机制与其提高 HDAC2的表达，使组蛋白 H4去乙酰化，从而抑制 NF-κB p65的表达有关。
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甘草酸二铵抑制慢性哮喘模型小鼠气道平滑肌增生
目的评价甘草酸二铵（DG）对气道重构的影响及可能的作用途径。方法30只雄性BALB/C小鼠随机平均分为3组，既空白组、卵清蛋白+甘草酸二铵组（OVA+DG组）和卵清蛋白组（OVA组）。在干预75 d后处死小鼠获得肺组织标本，并进行HE染色和Masson染色及气道上皮基底膜下胶原沉积测量。使用RT-PCR和Western blotting对α-SMA和PPARγ的mRNA和蛋白表达进行测定。结果HE染色发现OVA致敏和激发75 d后小鼠肺组织出现明显的病理改变，且OVA组较OVA+DG组更加明显。Masson染色和基底膜下胶原沉积分析发现OVA干预后小鼠基底膜下胶原沉积明显增加，且OVA组较OVA+DG组增加更显著。RT-PCR和Western blotting分析发现OVA干预后小鼠肺组织α-SMA表达明显增加，而PPARγ表达则明显下降，但与OVA+DG组相比较OVA组α-SMA表达增加和PPARγ表达下降更明显。结论DG可能通过上调PPARγ的表达减轻OVA诱导的慢性哮喘导致的气道肌成纤维细胞的增殖和基底膜下的胶原沉积。
关键词： 甘草酸二铵 支气管哮喘 气道平滑肌 过氧化物酶体增殖激活受体γ α-SMA -
紫草素抑制人气道平滑肌细胞的增殖
目的 研究紫草素对体外培养的人气道平滑肌细胞(HASMCs)增殖的影响.方法 组织块贴壁法原代培养传至4～8代的HASMCs,经40、20、10、5、2、1、0.5 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用12、24、48 h后,应用MTS法测定紫草素对HASMCs的细胞增殖的影响;经40、20、10、5 ?mol/L及0 ?mol／L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用流式细胞术分析紫草素对细胞周期的影响;经20 ?mol/L及0 ?mol/L(对照组)的紫草素分别作用24 h后,应用SP免疫细胞化学法检测紫草素对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,20 ?mol/L和40 ?mol/L的紫草素均可有效抑制细胞增殖(均P<0.05),以48 h为显著(抑制率分别为30.1％与42.9％),但两者之间无显著性差异(P0.05).(2)20 ?mol/L及40 ?mol/L的紫草素均可显著提高G0/G1期比例(P<0.05),阻滞细胞周期进程,但两者之间无显著性差异(P0.05).(3)20 ?mol/L的紫草素可显著下调PCNA的表达(P<0.01).结论 紫草素对HASMCs具有明确的抗增殖作用.
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哮喘大鼠模型气道重构的病理形态学改变
目的观察哮喘气道重构的病理特点,探讨气道重构的机制,为哮喘防治开辟新的思路.方法建立大鼠哮喘模型,行支气管肺泡灌洗,分析其气道炎症的变化;支气管-肺组织行HE、天狼猩红染色,光镜及图像分析系统研究支气管黏膜、管腔、气道平滑肌和上皮下胶原的病理改变.结果反复变应原吸入后哮喘大鼠出现①支气管肺泡灌洗液中白细胞总数和嗜酸粒细胞、淋巴细胞百分比较正常对照大鼠明显增多,②支气管内管壁厚度、平滑肌层厚度、上皮下胶原厚度较对照组明显增厚.结论气道重构是哮喘的重要病理特征,气道平滑肌增生和胶原沉积是气道重构的主要原因,气道重构随着时间的推移而加重.
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米力农治疗慢性肺源性心脏病心力衰竭30例临床分析
米力农系双脂吡啶类、非苷、非儿茶酚胺类正性肌力药,可使血管扩张,松弛气道平滑肌,改善呼吸功能.慢性肺源性心脏病(慢性肺心病)心功能不全经使用米力农后,心肺功能均有明显改善.作者于2000年1月～12月在百色地区人民医院进修期间,使用山东鲁南制药厂生产的鲁南力康治疗慢性肺心病心衰30例,疗效满意,现报告如下.
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加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道平滑肌中自噬蛋白表达的干预作用
目的 观察咳嗽变异性哮喘大鼠气道平滑肌中自噬蛋白表达情况及加味芎蝎散的干预作用.方法 40只大鼠随机分为4组:空白对照组,模型组,孟鲁司特钠组,中药组.Masson法检测胶原沉积、气道壁平滑肌细胞增生,免疫组化和WB法检测自噬蛋白LC3和Beclin1表达情况.结果 与对照组相比,CVA大鼠平滑肌组织增生、肥大,胶原沉积,纤维化程度增强.免疫组化和WB实验证实,CVA大鼠自噬蛋白Beclin1和LC3明显降低,而中药组有明显的缓解作用.结论 加昧芎蝎散可能通过增强气道平滑肌中自噬蛋白的表达来抑制气道重塑.
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加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘大鼠气道重塑及气道平滑肌相关凋亡分子表达的影响
目的 探讨加味芎蝎散对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠气道重塑的作用及相关凋亡分子表达.方法 40只大鼠随机分成对照组、模型组、顺尔宁组、加味芎蝎散组;造模后分组给予相应的药物干预;采用HE观察各组支气管上皮细胞损伤情况、Masson染色法对大鼠支气管厚度,平滑肌厚度及胶原纤维沉积进行检测,免疫组化法检测气道平滑肌凋亡相关分子Bax、Bcl-2、Fas、FasL、Caspase3的表达.结果 模型组支气管上皮变性、坏死,支气管厚度增加,胶原纤维沉积明显,气道平滑肌细胞Bax/Bcl-2、Fas、Caspase3表达减少,而顺尔宁组、加味芎蝎散组具有明显升高的作用.结论 加味芎蝎散可通过促进气道平滑肌凋亡分子的表达来减轻CVA大鼠的气道重塑作用,从而发挥对于CVA的治疗作用.
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哮喘患者深吸气诱导气道平滑肌再狭窄的机制
在正常人,支气管收缩时,深吸气(deep inspiration.DI)可以产生支气管扩张作用而减少气道狭窄,逆转气道阻塞,更重要的是DI具有支气管保护作用,即减弱随之的支气管收缩,阻止呼气气流的降低.而在哮喘患者,支气管的保护和舒张作用是减弱或缺失的,也就是说哮喘患者DI时支气管难以舒张,甚至会引起支气管的狭窄.本文就这一现象的机制做综述如下.
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新生期肺炎链球菌肺炎对气道平滑肌表型的影响
目的 研究新生期肺炎链球菌肺炎(Streptococcus pneumoniae pneumonia,S.pp)对气道平滑肌表型的影响.方法 Balb/c小鼠出生后第7天鼻腔滴注2×107 CFU肺炎链球菌5μl建立新生期S.pp模型,对照组滴注等量PBS.感染5周后收集肺组织标本,免疫组织化学检测气道平滑肌肌层厚度;RT-PCR检测气道平滑肌Acta2-mRNA、My11-mRNA、Tagln-mRNA表达量;Western blot检测α-SMA、SMMHC、SM22α蛋白表达量.结果 S.pp组气道平滑肌面积(α-SMA+ area/Pbm)较对照组显著增加(46.06±10.74 vs 22.50±9.131,P＜0.01),平滑肌收缩蛋白SMMHC面积(SMMHC+ area/Pbm)较对照组明显增加(58.33±29.40 vs19.75±13.10,P＜0.05),2组间平滑肌收缩蛋白SM22α面积(SM22α+ area/Pbm)无统计学差异(37.20± 10.67 vs 41.33±5.871,P＞0.05);Western blot分析发现S.pp组小鼠肺组织α-SMA、SMMHC蛋白较对照组显著升高(分别为1.352±0.5529 vs 0.633 0±0.157 5,P＜0.05;1.291±0.487 2 vs 0.776 8±0.279 3,P＜0.01),肺组织SM22α蛋白表达水平差异无统计学意义(1.435±0.436 5 vs 1.398±0.437 3,P＞0.05);RT-PCR检测发现S.pp组Acta2-mRNA、My11-mRNA表达水平较对照组显著增加(分别为2.704± 1.044 vs0.906 5±0.214 8,P＜0.01;1.780±0.454 6 vs 1.183±0.369 9,P＜0.05),而2组间Tagln-mRNA表达水平无统计学差异(1.438±0.321 3vs 1.207±0.334 5,P＞0.05).结论 新生期肺炎链球菌肺炎可诱导气道平滑肌表型改变,促进气道高反应性形成.
