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曲格列酮诱导胃癌MKN45细胞株凋亡
目的:研究不同浓度曲格列酮对胃癌MKN45细胞过氧化物酶体增殖激活受γ(PPARγ)激活水平变化及细胞凋亡的作用.方法:胃癌MKN45胞培养后分为4组,分别为生理盐水对照组和1、5、10 μmol/L曲格列酮实验组.用EMSA测定不同浓度曲格列酮对胃癌MKN45细胞PPARγ激活水平的变化,用流式细胞术检测caspase-3蛋白的表达、细胞周期的变化及凋亡.结果:随曲格列酮浓度的增加.PPARγ活性明显升高,以对照组活性为100,1、5、10μmol/L曲格列酮组的PPARγ平均活性分别为155.8、218.7和307.6(P＜0.01).流式细胞术证实MKN45细胞经1,5,10μmol/L曲格列酮的作用后,随着曲格列酮剂量的增加,Caspase-3蛋白的表达均值分别为4.51,10.95,20.49,33.56(P＜0.01),G0/G1期细胞逐渐增加,S期细胞下降,凋亡细胞增多.结论:曲格列酮通过对胃癌MKN45细胞PPARγ的激活可引发胃癌MKN45细胞株细胞周期抑制及凋亡,可为胃癌的治疗提供新的靶点.
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PPAR-γ对动脉粥样硬化中单核/巨噬细胞的作用
过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor gamma PPARγ)是核受体超家族成员之一,参与体内多种生理病理过程,近年来研究表明,该类受体激活后还可以对动脉动脉粥样硬化病变所涉及的病理途径进行调节.目前其对血管局部单核/巨噬细胞的调节作用仍存在许多争议之处,其激活剂可能对动脉粥样硬化的防治具有重要意义.
关键词： 过氧化物酶体增殖激活受体γ 动脉粥样硬化 单核/巨噬细胞 -
PPARγ激活剂罗格列酮对兔动脉粥样硬化斑块消退的影响
过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)是一个核受体,在血管壁内皮细胞、巨噬细胞/泡沫细胞及血管平滑肌细胞都有较高表达.PPARγ通过对这些细胞的调控作用,还影响着炎性因子的水平,在动脉粥样硬化(AS)疾病中发挥着重要的作用[1].本实验通过高选择性PPARγ激动剂罗格列酮对高胆固醇饮食家兔动脉粥样硬化模型的干预,探讨罗格列酮激活PPARγ途径后对动脉粥样硬化斑块消退的影响.
关键词： 罗格列酮 动脉粥样硬化 胆固醇 过氧化物酶体增殖激活受体γ -
原发性高血压患者颈动脉内膜与炎症的关系及罗格列酮防治机制
目的 探讨原发性高血压患者颈动脉内膜中层厚度(IMT)与PPARγ、TNF-α、IL-6 mRNA水平的关系及罗格列酮干预后对PPARγ、TNF-α、IL-6 mRNA的影响.方法 用彩超测量原发性高血压患者颈动脉IMT,将50例原发性高血压患者分成IMT正常组(24例)和IMT增厚组(26例),用逆转录PCR法测定罗格列酮体外干预外周血单核细胞(PBMC)前、后PPARγ、TNF-α和IL-6 mRNA水平.结果 IMT正常组IMT值为(0.68±0.09)mm,IMT增厚组1MT值为(1.2±0.38)mm.与IMT正常组比较,IMT增厚组PPARγ降低(P=0.001),TNF-α、IL-6升高(P=0.002),且PPARγ与TNF-α、IL-6均呈负相关(r=-0.900,r=-0.916,p=0.000).罗格列酮干预后两组PPARγ mRNA较干预前升高,TNF-α、IL-6 mRNA较干预前降低(P<0.01),且IMT增厚组干预前、后的差值较IMT正常组干预前、后的差值更明显(P<0.01).结论 原发性高血压IMT增厚与炎症相关,外周血单核细胞PPARγ可能参与了炎症的调控;罗格列酮通过上调PPARγ mRNA水平,下调TNF-α、IL-6 mRNA水平而影响颈动脉IMT厚度.
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不同分子亚型乳腺癌中PPARγ的表达及临床意义
目的:探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ(peroxidase body proliferation activated receptorγ,PPARγ)在不同分子亚型乳腺癌中的表达及其与乳腺癌预后的关系.方法:采用免疫组织化学法检测120例乳腺癌组织和20例乳腺良性肿瘤组织中PPARγ的表达.采用蛋白印迹法(western blotting)和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测正常乳腺上皮细胞株和具有不同转移潜能的乳腺癌细胞株中PPARγ蛋白和mRNA表达的情况,分析PPARγ与患者临床预后的关系.结果:在不同分子亚型的乳腺癌组织中,PPARγ蛋白在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)癌组织中表达低(P＜0.05)；在不同分子亚型的乳腺癌细胞株中,PPARγ mRNA和PPARγ蛋白在TNBC细胞株MDA-MB-231中表达低；PPARγ在良性乳腺疾病、TNM Ⅰ期乳腺癌和TNM Ⅲ 期乳腺癌中表达依次降低；PPARγ的表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤直径和Ki-67呈显著负相关(P＜0.05)；PPARγ的高表达与患者总体生存率呈正相关(P＜0.05).结论:PPARγ的高表达是乳腺癌患者预后良好的指标.
关键词： 乳腺癌 过氧化物酶体增殖激活受体γ 分子分型 -
大鼠PPARγshRNA慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰慢病毒载体并鉴定.方法 设计针对PPARγ的小发夹RNA(shRNA)序列,应用基因重组技术插入到pLentiLox3.7(pLL3.7)慢病毒载体中,XbaⅠ和XhoⅠ双酶切和DNA测序鉴定重组克隆.将pLL3.7空载体(NC组)、pLL-PPARγ-sh1RNA(S1组)、pLL-PPARγ-sh2RNA(S2组)三组质粒分别与辅助包装质粒共转染人胚肾293T细胞,并测定病毒滴度;病毒感染大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞和大鼠海马神经干细胞后,分别用RT-PCR和Western blot检测PPARγ mRNA和蛋白表达.结果 PPARγ shRNA成功插入慢病毒载体.慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度为5×106IU/ml.与NC组相比,S1、S2组PPARγmRNA水平下降(P＜0.05),且S1组PPARγ蛋白表达亦明显下降(P＜0.05).结论 成功构建PPARγ基因RNA干扰慢病毒载体.
关键词： 过氧化物酶体增殖激活受体γ RNA干扰 慢病毒载体 -
曲格列酮诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究
目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPAR γ)的配体曲格列酮(troglitazone,TGZ)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,SGC-7901细胞分为对照组和曲格列酮不同浓度(5、10、15、20 μmol/L)加药组,应用流式细胞仪检测曲格列酮不同浓度对胃癌SGC-7901细胞凋亡率的影响;RT-PCR及Western blot方法 观察PPARγ、p53的mRNA及蛋白表达变化.结果 曲格列酮可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;曲格列酮干预后,p53的mRNA及蛋白在胃癌SGC-7901细胞中表达上调,而PPARγ的mRNA及蛋白表达水平无明显改变.结论 曲格列酮依赖激活PPARγ能在体外诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调抑癌基因p53表达而实现,提示PPARγ可能是胃癌治疗的一个新分子靶点.
关键词： 曲格列酮 过氧化物酶体增殖激活受体γ P53 胃癌 凋亡 -
PPARγ参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床意义
目的 研究过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)是否体外参与调节胃癌MKN45细胞VEGF mRNA的表达及临床意义.方法 体外培养人胃癌细胞系MKN45,不同浓度的PPARγ激动剂(曲格列酮),PPARγ特异性抑制物体外作用细胞,EMSA测定细胞PPARγ的活性,RT-PCR检测细胞VEGF mRNA的表达.结果 相对于对照组,随曲格列酮浓度的增加,胃癌MKN45细胞株PPARγ活性显著性升高(P＜0.01),VEGF mRNA的表达显著性降低(P＜0.01),且呈剂量依赖关系;PPARγ特异性抑制物能显著性抑制曲格列酮诱导的胃癌MKN45细胞株PPARγ的活化和VEGF mRNA的表达的下调(P＜0.01).结论 PPARγ可能参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,曲格列酮通过激活PPARγ,抑制胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,可能为胃癌的治疗提供新的靶点.
关键词： 过氧化物酶体增殖激活受体γ 胃癌 血管内皮生长因子 -
乳腺癌中过氧化物酶体增殖激活受体γ和β-连环蛋白表达及临床意义
目的 探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)和β-连环蛋白(β-catenin)在乳腺癌组织中的表达、相关性及与乳腺癌临床和预后的关系.方法 采用免疫组织化学法检测70例乳腺癌组织和20例乳腺良性肿瘤中PPARγ和β-catenin的表达,并进行临床分析.结果 乳腺癌PPARγ高表达率为34.3%(24/70),明显低于乳腺良性肿瘤;β-catenin在乳腺癌中异常表达率为67.1%(47/70),PPARγ和β-catenin蛋白表达呈显著负相关(r=-0.398,P<0.05).PPARγ蛋白表达水平与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小及Ki-67表达负相关(P<0.05),与雌激素受体(ER)状态及总体生存率正相关(P<0.05);β-catenin蛋白异常表达与乳腺癌组织学分级、TNM分期、淋巴结转移正相关(P<0.05),与总体生存率负相关(P<0.05).结论 PPARγ和β-catenin表达与乳腺癌发展有关,检测PPARγ和β-catenin表达对判断乳腺癌生物学行为和预后具有参考价值.
关键词： 乳腺肿瘤 过氧化物酶体增殖激活受体γ β-连环蛋白 预后 -
罗格列酮延缓慢性肾病进展的机制研究
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动药罗格列酮对5/6肾切除肾衰竭大鼠的肾脏保护作用及可能作用机制.方法 选用180 ～ 200 g健康雄性SD大鼠建立5/6肾切除肾衰竭模型,分为假手术组、模型对照组和罗格列酮组.第12周时采用断头法处死大鼠,并检测各组大鼠血清尿素氮、肌酐及24 h尿蛋白水平;取残余肾组织行病理检查,判断肾小球硬化、肾小管间质损伤程度;采用免疫组化方法观察PPARγ和神经型一氧化氮合酶(nNOS)在肾脏组织的分布;利用RT-PCR和Western Blot检测PPARγ和nNOS蛋白和mRNA的表达水平.结果 与假手术组比较,模型对照组和罗格列酮组大鼠24h尿蛋白、血清尿素氮及肌酐均显著升高(P＜0.01);但与模型对照组比较,罗格列酮组各指标则明显降低(P＜0.05).病理学检查示模型对照组大鼠肾组织有明显的肾小球硬化及肾小管间质损伤,肾小球硬化指数及肾小管间质损伤指数均较假手术组明显增高(P＜0.01);而罗格列酮组上述指标则较模型对照组明显降低(P＜0.05).免疫组化结果显示5/6肾切除大鼠PPARγ主要分布在肾小管上皮细胞、系膜细胞和浸润的巨噬细胞,nNOS主要定位在致密斑,内髓集合管也有表达.模型对照组PPARγ、nNOS蛋白和mRNA的表达较假手术组明显下降(P＜0.05),而罗格列酮组PPARγ和nNOS的表达则较模型对照组明显升高(P＜0.05).结论 大鼠5/6肾切除后,给予罗格列酮可以明显减轻肾小球硬化和肾间质纤维化的程度,其作用机制可能与其上调PPARγ和nNOS基因的表达有关,且有明显的相关性.
关键词： 罗格列酮 过氧化物酶体增殖激活受体γ 肾切除 一氧化氮合酶 神经型 -
过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂在终末期肾脏病中的研究进展
过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)是一种细胞核受体,除了能够凋节机体糖脂代谢外,在抗炎、抗纤维化、调节免疫及抗动脉粥样硬化等方面也发挥着重要作用.终末期肾脏病(ESRD)患者由于疾病本身和肾脏替代治疗的介入常存在胰岛素抵抗和微炎症状态,心血管疾病的发病率和死亡率显著高于普通人群.新近关于PPAR-γ激动剂应用于ESRD的研究结果提示PPAR-γ激动剂能够改善ESRD患者上述病理生理.本文就这方面的研究进展以及目前有关热点问题进行综述.
关键词： 过氧化物酶体增殖激活受体γ 激动剂 噻唑烷二酮类 终末期肾脏病 心血管系统 -
甘草酸二铵抑制慢性哮喘模型小鼠气道平滑肌增生
目的评价甘草酸二铵（DG）对气道重构的影响及可能的作用途径。方法30只雄性BALB/C小鼠随机平均分为3组，既空白组、卵清蛋白+甘草酸二铵组（OVA+DG组）和卵清蛋白组（OVA组）。在干预75 d后处死小鼠获得肺组织标本，并进行HE染色和Masson染色及气道上皮基底膜下胶原沉积测量。使用RT-PCR和Western blotting对α-SMA和PPARγ的mRNA和蛋白表达进行测定。结果HE染色发现OVA致敏和激发75 d后小鼠肺组织出现明显的病理改变，且OVA组较OVA+DG组更加明显。Masson染色和基底膜下胶原沉积分析发现OVA干预后小鼠基底膜下胶原沉积明显增加，且OVA组较OVA+DG组增加更显著。RT-PCR和Western blotting分析发现OVA干预后小鼠肺组织α-SMA表达明显增加，而PPARγ表达则明显下降，但与OVA+DG组相比较OVA组α-SMA表达增加和PPARγ表达下降更明显。结论DG可能通过上调PPARγ的表达减轻OVA诱导的慢性哮喘导致的气道肌成纤维细胞的增殖和基底膜下的胶原沉积。
关键词： 甘草酸二铵 支气管哮喘 气道平滑肌 过氧化物酶体增殖激活受体γ α-SMA -
PPARγ的配体罗格列酮诱导肝癌细胞凋亡的实验研究
[目的] 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体罗格列酮(RSG)对肝癌细胞凋亡的影响.[方法] 体外培养人肝癌HepG2细胞,将HepG2细胞分为对照组和RSG不同浓度(25、50.100、200 μmol·L-1)加药组.应用流式细胞仪检测RSG不同浓度对肝癌细胞ItepG2凋亡率的影响;应用Hoechst33258荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;实时荧光定量PCR方法观察Bcl-2、Bax的mRNA表达变化;免疫细胞化学法检测Bcl-2、Bax、PPARγ的蛋白表达. [结果] 流式细胞仪和荧光染色法显示RSG诱导肝癌HepG2细胞凋亡,凋亡率与浓度呈正相关;RSG干预后,Bcl-2的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达下调,Bax的mRNA及蛋白在肝癌细胞中表达均上调. [结论] .RSG依赖激活PPARy能在体外诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能是通过下调抗凋亡基因Bcl-2表达以及上调促凋亡基因Bax而实现的,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点.
关键词： 罗格列酮 过氧化物酶体增殖激活受体γ 肿癌 凋亡 -
shRNA干扰PPARγ基因表达预防兔激素性股骨头坏死的研究
目的 研究激素性股骨头坏死(steroid-induced avascular necrosis of the femoral head,SANFH)的发病机制,观察靶向过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)基因shRNA腺病毒载体预防兔SANFH的作用效果.方法 健康新西兰兔48只,随机分为4组,每组12只.单纯激素组(M组)仅肌注地塞米松;实验组(S组)在肌注地塞米松同时,加用靶向PPARγ基因shRNA腺病毒载体感染兔活体股骨头内骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs);无关序列组(E组)在肌注地塞米松同时,加用搭载无关序列的shRNA重组腺病毒感染兔活体股骨头内BMSCs;对照组(N组)肌注等量生理盐水.测定4组兔血清甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)含量.观察股骨头组织病理学改变.应用RT-PCR 技术检测PPARγ mRNA和Runx2 mRNA表达;应用免疫组化技术检测PPARγ和Runx2蛋白表达情况.结果 M、E、S组血清中TG和CHO含量增高,与N组比较差异均有统计学意义(P<0.05).M组和E组可见明显骨坏死,脂肪细胞增生肥大,骨小梁变细和稀疏,大量空骨陷凹,S组和N组未见骨坏死及上述改变.S组中PPARγ mRNA和蛋白均呈低表达,Runx2 mRNA及蛋白呈高表达,与M组和E组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与N组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 靶向PPARγ基因shRNA腺病毒载体可有效阻断BMSCs内PPARγ mRNA表达,抑制其成脂分化;增强Runx2 mRNA表达,促进其成骨分化,预防SANFH的发生,为通过基因靶向治疗SANFH提供新思路.
关键词： 骨髓基质干细胞 shRNA 过氧化物酶体增殖激活受体γ 激素 股骨头坏死 -
PPARγ激动剂对抗经氟诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化损伤
目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂15d-PGJ2对氟诱导人神经母瘤SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响.方法:将体外培养的SH-SY5Y细胞,分为对照组、染氟组(NaF组)、单纯PPARγ激动剂组(R组)、干预组(R+ NaF组,先加入15d-PGJ2 2 h后再加NaF),各组处理后培养48 h,用蛋白印记法检测SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平,微量酶标法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,分析PPARγ蛋白与SOD活性及MDA含量的相关关系.结果:与对照组相比,R组SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白水平、SOD活性及MDA含量无明显改变(P＞0.05),NaF组SH-SY5Y细胞PPARγ蛋白水平和SOD活性明显降低,MDA含量明显增加(P ＜0.05);R +NaF组SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平及SOD活性明显高于NaF组、MDA含量明显低于NaF组(P＜0.05);SH-SY5Y细胞中PPARγ蛋白表达水平与SOD活性呈正相关关系(r =0.771,P＜0.05),与MDA含量呈负相关关系(r=-0.762,P＜0.05).结论:过量氟会导致体外培养的SH-SY5Y细胞发生氧化损伤,而PPARγ激动剂15d-PGJ2处理后可减轻氟诱导的细胞氧化损伤.
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罗格列酮对大鼠脊髓损伤后的保护作用及其机制
目的:探讨罗格列酮对脊髓损伤后的保护作用以及对表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化和胶质瘢痕形成的影响.方法:65只SD大鼠随机分为假手术组、溶媒对照组(1、3、7、14、21 d和28 d)与罗格列酮组(1、3、7、14、21 d和28 d).溶媒对照组和罗格列酮组进行T10节段半横断(右侧),假手术组只行椎板切除,不损伤脊髓;罗格列酮组在术后5 rmin、6h、24 h均以2.5 mg/kg剂量腹腔注射罗格列酮,其他组注射等量的生理盐水.术后行BBB评分.各时间点取材后采用免疫组化法检测脊髓组织过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)、p-EGFR及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,并经Motic Images Advanced 3.2系统处理后对免疫组化阳性区域的平均光密度值进行t检验、F检验.结果:BBB评分显示,罗格列酮治疗后运动功能明显恢复.免疫组化结果及统计学分析显示,脊髓损伤后PPARγ、p-EGFR及GFAP表达增高.罗格列酮组经治疗后PPARγ较溶媒对照组表达明显增多,尤其是7、14 d和28 d(P ＜0.05);p-EGFR在各个时间点的表达均减少,尤其1、3、7d差异明显(P＜0.05);GFAP随时间增长,呈现先增高后减少的趋势(P＜0.05),峰值出现在14 d.结论:罗格列酮能够促进脊髓损伤后PPARγ表达,下调p-EGFR及GFAP表达抑制星形胶质细胞的活性,这些可能是脊髓损伤后运动功能恢复的机制.
