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PFD对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化治疗疗效和 CTGF表达的影响
目的：观察不同剂量PFD对二甲基亚硝胺（ Dimethylnitrosamine DMN）诱导大鼠肝纤维化的治疗作用和CTGF表达的影响，初步探讨其可能的作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠105只随机分为正常组21只，给予生理盐水10 mg／kg体重腹腔内注射，每周前三天连续给药，1次／日，连续注射3周；造模组84只，给予1％DMN溶液10 mg／kg体重腹腔注射，每周前三天连续给药，1次／日，连续注射3周。两周末将造模组随机分为4组，每组21只，分别是：模型组、IFN －α治疗组、PFD 120 mg、PFD 240 mg治疗组。各组大鼠均于造模第3周第一天给予药物治疗，每周七天，1次／日，治疗共4周。各组给药剂量及方法如下：正常组、模型组予以0．5％CMC－Na 6 mL／kg灌胃；PFD不同剂量组予以相应剂量PFD灌胃； IFN －α组予以IFN －α10万单位／只，皮下注射。治疗四周后处死所有大鼠，留取肝组织行Masson染色，免疫组织化学法测Ⅰ型胶原， CTGF表达。结果（1） Masson染色SSS半定量评分，模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05）。 IFN －α组、PFD组SSS半定量评分较模型组显著降低（ P＜0．05）。免疫组化法检测肝组织Ⅰ型胶原的表达，模型组与正常组比较显著升高（ P＜0．05），PFD组与模型组比较显著降低（P＜0．05），IFN －α组与模型组比较无统计学差异（P＞0．05），（2）免疫组化法检测肝组织CTGF的表达，模型组与正常组比较显著升高（P＜0．05）。 PFD 120 mg、PFD 240 mg各组与模型组比较显著降低（P＜0．05）。结论（1）PFD具有治疗DMN诱导的大鼠肝纤维化的作用，与α－IFN无明显差别。（2）PFD抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用机制可能与下调CTGF的表达，抑制促纤维化因子有关。
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隔药灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞CTGF、FN、Smad表达的影响
目的 观察隔药灸对克罗恩病肠纤维化大鼠结肠成纤维细胞(conlonic fibroblast,CFB)CTGF、FN蛋白和Smad3、Smad7 mRNA表达的影响,探讨隔药灸治疗克罗恩病肠纤维化的作用机制.方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组和西药组.在成功制备克罗恩病肠纤维化大鼠模型的基础上,隔药灸组取天枢穴(双)、气海穴进行治疗,西药组以美沙拉嗪灌胃治疗.各组治疗干预结束后,留取结肠组织,分离并体外培养大鼠CFB.采用免疫细胞化学法观察各组大鼠CFB的CTGF、FN蛋白表达,应用实时荧光定量PCR技术检测各组大鼠CFB的Smad3、Smad7 mRNA表达.结果 与正常组比较,模型组大鼠CFB的CTGF、FN蛋白表达升高(均P＜0.01);与模型组比较,隔药灸组CFB的CTGF、FN蛋白表达降低(均P＜0.01).各组大鼠比较,CFB的Smad3和Smad7 mRNA表达变化均不显著(均P＞0.05).结论 隔药灸能下调克罗恩病肠纤维化大鼠肠成纤维细胞CTGF、FN的蛋白表达.
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结缔组织生长因子与肝纤维化诊治研究进展
结缔组织生长因子(CTGF)于1991年由Bradham DM等在血小板源性生长因子(PDGF)诱导下的人类脐静脉内皮细胞条件培养基中发现,因能刺激纤维母细胞DNA合成及促进趋化作用而得名[1].CTGF又名CCN2,属于CYR61/CTGF/NOV/WISP-1/WISP-2/WISP-3(即刻早期基因CCN)家族,在细胞粘附、基质形成、组织重建、再生及分化中发挥重要的作用[2].
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结缔组织生长因子:肝纤维化形成的"总开关"
2008年Gressner等[1]在新发表的一篇文章中称结缔组织生长因子(CTGF)是肝脏疾病中扳动纤维化产生的"总开关"(master switch),说明CTGF在纤维化发生的过程起了关键性作用.
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基因芯片研究尿道下裂的基因表达差异
目的 筛选出与尿道下裂发病相关的基因.方法 尿道下裂病人的尿道或包皮组织,年龄配对的包皮过长患儿组织作为对照,提取组织mRNA,合成双股cDNA并纯化,再逆转录成cRNA,生物素标记的cRNA打成碎片后与人类基因芯片进行杂交,计算机工作站自动扫描并记录芯片上的信号强度,转化为EXCEL数据库,总共分析了22000个基因的表达差异.结果 发现一组表达有显著差异的基因,包括CYR61,CTGF,ATF3和GADD45.结论 这些表达差异的基因可能参与尿道下裂的发生和发展,为进一步研究关键基因提供了依据.
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TGF-β1-Erk-CTGF信号通路在体外骨骼肌肌源性干细胞分化作用中的研究
目的 探讨转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导骨骼肌肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSCs)向肌成纤维母细胞分化过程中的信号通路.方法 采用差速贴壁法分离出大鼠骨骼肌肌源性干细胞,培养基中加入TGF-β1和细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)特异性拮抗剂PD98059.将体外培养的细胞分为三组:对照组(A组),10 ng/ml TGF-β1组(B组),10 ng/ml TGF-β1+ 80μM PD98059组(C组).利用免疫细胞化学染色方法检测细胞表型的变化,RT-PCR、Western-blot检测细胞中CTGF和COL Ⅰ表达和合成水平.结果 在体外,TGF-β1能诱导MDSCs高表达α-SMA、CTGF和COLⅠ,抑制MDSCs合成Sac-1;Erk特异性拮抗剂PD98059能抑制TGF-β1的作用,显著降低细胞CTGF和COLⅠ mRNA的表达水平,减低CTGF和COLⅠ合成,增加Sac-1的合成.结论 TGF-31能在体外诱导骨骼肌MDSCs向肌成纤维母细胞分化,TGF-β1-Erk-CTGF信号传导通路参与细胞分化过程.
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沉默结缔组织生长因子基因重组腺病毒的构建及功能验证
目的:构建沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-siCTGF,并进行功能验证.方法:选取已验证的能高效沉默CTGF基因的靶序列,克隆入载体pSES-HUS中;将质粒线性化处理后与腺病毒骨架质粒pAdEasy共同转染大肠埃希菌BJ5183,构建重组腺病毒载体Ad-siCTGF;腺病毒载体用Pac I酶切线性化处理后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒;采用"乒乓交互感染法"提高病毒滴度.用此病毒感染4T1细胞,行实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative -PCR, RFQ-PCR)及Western 印迹法验证其沉默效果.结果:Pac I酶切电泳证实重组腺病毒载体Ad-siCTGF构建成功,扩增纯化后测定重组病毒Ad-siCTGF的滴度为2.6×10~(10) pfu/mL.感染此病毒后,4T1细胞中CTGF mRNA表达水平下调至36.27%,蛋白表达水平下调至31.56%.结论:成功构建能沉默CTGF基因的重组腺病毒,为进一步研究CTGF在肿瘤中的作用机制奠定了基础.
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甲状腺组织中CTGF基因的表达及其临床意义
目的:检测甲状腺组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)的mRNA和蛋白表达水平及其与临床参数的关系.方法:运用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogentic quantitative PCR, RFQ-PcR)技术和免疫组织化学染色法检测72例甲状腺癌、45例甲状腺瘤、71例单纯性甲状腺肿组织中CTGF mRNA和蛋白表达水平,并分析其与临床病理参数的关系.结果:RFQ-PCR结果显示59.7%(43/72)甲状腺癌组织中CTGF mRNA表达水平显著高于癌旁甲状腺组织,66.7%(30/45)甲状腺瘤和88.7%(63/71)单纯性甲状腺肿组织中CTGF mRNA表达水平低于病变周围甲状腺组织.免疫组织化学法检测结果与RFQ-PCR结果基本一致.Logistic回归分析显示:女性、淋巴结发生转移、高病理级别、肿瘤体积大和血清促甲状腺素(TSH)高水平是甲状腺癌CTGF mRNA高表达的危险因素,女性、高病理级别和TSH高水平是甲状腺癌CTGF蛋白高表达的危险因素;肿瘤体积大和FT4低水平是甲状腺瘤CTGF mRNA和蛋白高表达的危险因素;男性、FT4低水平和TSH低水平均是单纯性甲状腺肿CTGF mRNA和蛋白高表达的危险因素.结论:CTGF在甲状腺癌组织的高表达可能是肿瘤发生过程中的一个重要因素,其表达的蛋白产物可作为临床上甲状腺癌早期诊断和治疗的一个重要指标.
关键词： 甲状腺肿瘤 实时荧光定量聚合酶链反应 免疫组织化学 基因 CTGF -
老年慢性支气管哮喘患者血清NGF及CTGF水平的变化
支气管哮喘是气道的一种慢性变态反应性炎症性疾病,由肥大细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等多种炎症细胞介导的气道炎症,引起气道高反应性和广泛的、可逆性气阻塞.
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胃癌患者手术治疗前后血清CEA、CTGF和VEGF测定的临床意义
本文对胃癌患者手术治疗前后血清CEA、结缔组织生长因子(CTGF)和血管内皮生长因子(VEGF)进行联检,现将结果报告如下.
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结缔组织生长因子mRNA在硬皮病模型小鼠真皮中的表达
目的探讨博来霉素诱导硬皮病样改变.方法24只BALB/c小鼠随机分为模型组和对照组,每日分别于背部皮下注射0.1 mL博来霉素(300μg/mL)和0.1 mL生理盐水,共4周.然后取背部皮肤行组织病理检查及真皮厚度测量,比色法测定羟脯氨酸含量,原位杂交法检测结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达细胞及RT-PCR法测定α1前胶原(pro-COL1A1)和CTGF mRNA表达量.结果模型组小鼠皮肤表现出典型的硬皮病改变,其真皮较对照组显著增厚(P＜0.01),羟脯氨酸含量显著升高(P＜0.01);CTGF mRNA阳性杂交信号主要分布于真皮成纤维细胞胞浆中,模型组CTGF和pro-COL1A1 mRNA表达均较对照组显著增强(P分别＜0.05和0.01);模型组皮肤羟脯氨酸含量与pro-COL1A1 mRNA表达量呈正相关(P＜0.05),而pro-COL1A1mRNA又与CTGF mRNA表达量呈正相关(P＜0.01).结论博来霉素可能通过上调成纤维细胞CTGF mRNA表达而增强pro-COL1A1 mRNA表达,终导致皮肤胶原含量增多.
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蟾蜍灵对高糖诱导大鼠系膜细胞过表达纤维连接蛋白和结缔组织生长因子的影响
目的:观察不同浓度蟾蜍灵对高糖诱导的大鼠系膜细胞(MC)过表达FN及CTGF的影响,拟探讨其防治糖尿病肾病的可能作用.方法:体外培养MC,将细胞分为5组:正常对照组、高糖组、高糖+低浓度蟾蜍灵(5×10-9 mol/L)组、高糖+中浓度蟾蜍灵(5×10-8 mol/L)、高糖+高浓度蟾蜍灵组(5×10-7 mol/L).以台盘兰拒染法检测蟾蜍灵对MC的毒性作用,48 h后,采用RT-PCR法和Western-blot法检测各组MC中FN、CTGF mRNA和CTGF蛋白的表达及其变化.结果:蟾蜍灵在5×10-9～5×10-7 mol/L浓度间对MC无明显细胞毒作用.48 h后,与对照组相比,高糖组CTGF mRNA和蛋白以及FN mRNA表达均显著增加(P＜0.05)；高、中、低浓度蟾蜍灵干预能显著降低高糖诱导的上述指标表达,且呈浓度依赖效应(P＜0.05).结论:蟾蜍灵能部分抑制高糖诱导的MC过表达FN,呈浓度依赖效应,其作用可能部分是通过降低促纤维化因子CTGF合成而实现,提示蟾蜍灵在DN纤维化防治领域具有进一步研究的价值.
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丹参酮IIA对腹膜透析液诱导的大鼠腹膜组织学变化及CTGF表达的影响
目的 了解丹参酮IIA对腹腔注射4.25%腹膜透析液(PDS)大鼠腹膜组织学变化以及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 50只SD雄性大鼠随机分为5组:对照组,每日腹腔注射生理盐水20mL;PDS组,每日腹腔注射4.25% PDS 20mL;丹参酮低、中、高浓度组,每日分别腹腔注射含丹参酮IIA浓度为50mg/L、100mg/L、200mg/L的4.25%PDS20mL.于实验第30天,取壁层腹膜行光镜检查,并用免疫组织化学的方法 检测壁层腹膜CTGF的表达情况.结果 HE、Masson染色显示,在PDS干预下,腹膜显著增厚,胶原沉积显著增多(P<0.01).与PDS组比较,丹参酮组腹膜明显变薄,胶原沉积明显减少(P<0.01).在PDS干预下腹膜CTGF表达较对照组显著增加(P<0.01),丹参酮组CTGF表达与PDS组比较有显著下降(P<0.01).结论 丹参酮II A具有抑制葡萄糖PDS导致的实验大鼠腹膜纤维化及CTGF表达增加的作用.
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复肾汤对DN模型大鼠肾组织TGF-β1、CTGF及FN表达的影响
目的 观察复肾汤对糖尿病肾病(DN)模型大鼠肾组织TGF-β1、CTGF及FN表达的影响.方法 小剂量注射STZ+CFA建立DN模型,分为模型组、复肾汤不同剂量治疗组(FST2.5g/kg组、FST7.5g/kg组、FST22.5g/kg组),另设正常对照组,给药14周后,轻取肾脏,免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、CTGF、FN的表达.结果 FST7.5g/kg组、FST22.5g/kg组大鼠肾组织中TGF-β1、CTGF、FN的表达明显低于模型组(P<0.05或P<0.01).结论 复肾汤能够降低DN大鼠肾组织TGF-β1、CTGF、FN的表达.其作用机制可能是通过降低肾组织TGF-β1、CTGF、FN的表达,减少ECM聚积而改善DN肾脏病理结构.
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川芎嗪纳米喷雾剂调控TGF-β/Smad信号通路抗术后大鼠腹腔粘连的实验研究
目的 检测川芎嗪纳米喷雾剂调节腹腔粘连组织中TGF-β/Smad信号通路下游靶基因TGF-β1、FN和CTGF的水平,研究川芎嗪对TGF-β/Smad信号通路的调控,从而探讨其对防治腹腔粘连的作用机理.方法 取SD雄性大鼠60只,随机分为6组:假手术组、模型组、透明质酸钠阳性对照组、川芎嗪纳米喷雾剂低、中、高剂量组.除假手术组外,其余各组大鼠均制备腹腔粘连模型.透明质酸钠凝胶组按0.5 mL/kg腹腔涂抹1％透明质酸钠凝胶,川芎嗪纳米喷雾剂低、中、高剂量组分别按2.5、5 mg/kg和10 mg/kg腹腔喷涂川芎嗪纳米喷雾剂.各组于术后第8天取粘连组织检测TGF-β1、CTGF的含量,同时记录大鼠肠粘连级别.RT-PCR检测粘连组织中FNmRNA的表达.结果 模型组粘连组织中TGF-β1、FN、CTGF表达增加.与模型组相比,川芎嗪纳米喷雾剂低、中、高剂量组的肠粘连程度明显减轻(P＜0.05～0.01),粘连组织中TGF-β1和CTGF含量明显下降(P＜0.05),粘连组织FNmRNA表达降低(P＜0.05～0.01).结论 川芎嗪纳米喷雾腹腔喷涂可减轻腹腔粘连的程度,对腹腔粘连有防治作用.川芎嗪纳米喷雾剂能够抑制术后大鼠腹腔粘连组织TGF-β1和CTGF的合成,减少FN mRNA的表达,其可能的靶点途径是TGF-β/Smad信号通路.
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MNNG诱导的胃癌前病变大鼠胃黏膜CTGF及ET-1表达的变化
目的 研究大鼠胃癌前病变形成过程中胃黏膜CTGF及ET-1的变化.方法 72只乳鼠随机平均分为正常组及模型组,每组各36只.模型组乳鼠每天以0.1ml?1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(800mg/L)灌胃,正常组灌服等量生理盐水,共10d.于实验第4周、16周、28周末每组处死大鼠12只,雌雄各半.HE染色检测胃黏膜组织病理学变化,qRT-PCR法检测雄性大鼠胃黏膜CTGF及ET-1?mRNA的表达.Western?blot检测雄性大鼠胃黏膜CTGF及ET-1/2/3蛋白表达.结果 随造模时间的延长,模型组大鼠胃癌前病变程度逐渐加重,胃黏膜内CTGF及ET-1?mRNA表达较正常组有升高趋势,CTGF蛋白4周时较正常组显著降低,其余时相点较正常组不同程度增加,ET-1/2/3蛋白16周时较正常组降低趋势,其余时相点较正常组不同程度升高.结论 大鼠胃癌前病变的形成过程中存在CTGF及ET-1的激活,这两者可能通过促进血管的生成参与胃癌前病变的发生与发展.
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结缔组织生长因子与糖尿病肾病及中药干预
糖尿病肾病(DN)是常见的糖尿病微血管并发症,其主要病理特征为肾小球系膜基质积聚、肾小球和肾小管基底膜增厚及肾间质纤维化,已经成为终末期肾功能衰竭和糖尿病患者死亡的主要病因[1].DN的发病机制尚不十分明确,近年研究,肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)在DN发展进程中起着重要作用,对两者进行干预,可以延缓DN所致的肾功能衰竭.
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肺纤维化前期肺组织中ICAM-1、TGF-β、CTGF的表达及其镜下形态改变的动态观察
目的 动态观察博莱霉素诱发大鼠肺纤维化模型从肺损伤到肺纤维化前期肺组织中细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)水平的变化,探讨肺纤维化前期的发病机制.方法 雌性SD大鼠108只,随机分为肺纤维化模型组、内毒素组、空白对照组(每组36只),并于干预后第3、7、14天取各组肺组织进行免疫组化SABC法观察.结果 造模后各组TGF-β、ICAM-1、CTGF的表达依次为空白对照组＜内毒素组＜肺纤维化模型组.肺纤维化模型组显著高于空白对照组及内毒素组(P＜0.05).光镜下观察空白对照组中肺组织结构正常;肺纤维化模型组第7天未见明显肺纤维化改变,第14天VG染色可见少量胶原纤维形成;内毒素组第7天有轻度肺泡炎,第14天肺泡炎消失.结论 肺纤维化前期纤维化的发生与TGF-β、ICAM-1、CTGF三种细胞因子均有密切关系,三者可能起协同作用.
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肿瘤中CCN蛋白的表达及作用机制
CCN蛋白家族目前共有6个成员,分别是Cyr61、CTGF、Nov、WISP-1、WISP-2、WISP-3.它们结构相似,均富含保守的半胱氨酸,具有广泛的生物学特性,都与机体组织创伤修复密切关联,与机体多种疾病的发生、发展相联系.近年来关于CCN家族蛋白在肿瘤的生长和转移中所起作用的研究成为热点,并有望成为肿瘤治疗的新思路.
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COPD患者治疗前后血液细胞因子变化的检测与意义
目的 探讨COPD患者治疗前后血液中TNF-α、IL-6、NGF和CTGF等细胞因子的变化.方法 分离40例COPD患者常规治疗前后血清,采用放射免疫分析法检测各细胞因子的量,同时选择38名正常健康人做对照.结果 COPD患者治疗后TNF-α、IL-6、NGF和CTGF的量较治疗前有所降低(P<0.05),但COPD患者治疗前后血清中TNF-α、IL-6、NGF和CTGF的量均明显高于正常健康组(P<0.05).结论 TNF-α、IL-6、NGF和CTGF与COPD疾病的发生有一定的关系,与COPD疾病的严重程度有一定的相关性,各因子含量的变化可用来作为一种判断预后的辅助手段.
