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中药逆转肿瘤多药耐药非经典机制的研究进展
目前认为,由肿瘤多药耐药(MDR)基因编码的P-糖蛋白(P-gp)过度表达介导的药物外排是产生MDR的经典机制[1].除此外,MDR还与多药耐药相关蛋白(MRP)、谷光甘肽-S-转移酶(GST)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、细胞凋亡等多种非经典机制密切相关.
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阿霉素纳米粒对MRP介导的膀胱肿瘤多药耐药细胞株EJ/MRP多药耐药性的逆转作用
目的 研究阿霉素纳米粒对多药耐药相关蛋白(MRP)介导的膀胱肿瘤多药耐药的逆转作用.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果 阿霉素纳米粒对EJ细胞的细胞毒作用与阿霉素相似,EJ/MRP 细胞对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感4.00倍.结论 阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度而有效逆转多药耐药.
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多药耐药相关蛋白和P-糖蛋白在口腔鳞癌中的表达及其对新辅助化疗敏感性的预测研究
目的:探讨新辅助化疗前后P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-pg)和多药耐药相关蛋白1(Multiple resistance-associatedprotein-1,MRPI)在口腔鳞癌组织中的表达及其与化疗敏感性和相关临床病理因素的关系.方法:采用sP免疫组化法,对106例口腔鳞癌患者新辅助化疗前后P-pg和MRPl的表达水平进行检测,分析其表达水平与化疗疗效的关系.结果:(1)化疗后口腔鳞癌组织中P-pg阳性表达率为74.53％,显著高于化疗前41.51％(P＜O.05);化疗前P-pg表达阴性患者有效率为56.45％,显著高于P-pg表达阳性患者的有效率34.09％(P＜0.05);P-pg的表达水平与口腔鳞癌的分化程度呈正相关(P＜0.05),但与临床分期和是否有颈淋巴结转移不相关(P＞0.05);(2)MRPl在口腔鳞癌组织中的阳性表达率在化疗前后分别为49.06％、57.55％,两者问无显著性差异(P＞0.05);化疗前MRPi表达阴性患者和阳性患者的有效率分别为50.00％、44.23％,两者间无显著性差异(P＞0.05);MRPl的表达水平与El腔鳞癌的分化程度、临床床分期和颈淋巴结转移均不相关(P＞O.05).结论:P-pg和MRPl在口腔鳞癌组织中均有较高的表达水平,但只有P-pg的表达水平与新辅助化疗疗效具有显著的相关性,认为P-pg的表达水平可作为预测口腔鳞癌对化疗敏感性的分子标记物.
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大肠癌组织中肺耐药蛋白和多药耐药相关蛋白的表达及临床病理意义
目的:检测肺耐药蛋白(LRP)和多药耐药相关蛋白(MRP)在60例大肠癌组织中的表达,探讨其与组织学类型、浸润深度、淋巴结转移的关系.方法:应用免疫组化S P法,检测60例大肠癌组织,10例正常大肠粘膜中MRP和LRP的表达情况.结果:MRP、LRP在60例大肠癌组织中的阳性表达率分别为68.3%和70%,均高于正常大肠粘膜中阳性表达率(P＜0.05),在各组织学类型之间的表达无明显差异(P＞0.05),不同浸润深度及是否有淋巴结转移间表达率无差异(P＞0.05).结论:MRP、LRP在大肠癌中均呈高表达,在大肠癌原发性多药耐药中起重要作用,这可能是大肠癌对化疗不敏感的原因之一.
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膀胱癌化疗耐药机制的研究进展
膀胱癌是人类常见恶性肿瘤之一,严重威胁着人们的生命和健康.在手术基础上辅以化疗已成为膀胱癌的主要治疗方案.合理的化疗方案虽可大限度发挥抗癌药物的细胞毒作用,但由于膀胱癌易复发的生物学特性,术后复发率一直居高不下,原因之一是对抗癌药物耐药性的产生.因此对抗癌药物耐药已成为膀胱癌化疗的一大障碍,而要消除肿瘤细胞对抗癌药物耐药性,必须弄清其耐药性产生机制.像大多数恶性肿瘤一样膀胱癌对抗癌药物耐药表现为多药耐药(Multidrug Resistance,MDR).有关这一方面的研究报道颇多,本文就近年来的研究进展作一综述.
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4种耐药相关蛋白在颅内肿瘤的表达及意义
颅内肿瘤发病率较高,是一种严重危害人类健康的疾病,化疗在颅内肿瘤的治疗中有着极其重要的意义.然而,临床化疗实施过程中常发现效果往往不理想,究其原因,主要在于化疗药物通过血脑屏障及血肿瘤屏障时受到阻滞和肿瘤细胞产生多药耐药.近年国内外研究表明肿瘤的多药耐药主要由P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)等因素引起.本研究旨在通过对80例不同类型的颅内肿瘤中多药耐药相关因素(P-gp、MRP、LRP、TopoⅡ)的定位检测分析,探讨血脑屏障与颅内肿瘤耐药性的关系,从而为提高颅内肿瘤化疗疗效找出一条有效的途径.
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重视对肿瘤多细胞耐药的研究
肿瘤细胞耐药是影响化疗疗效和患者预后的主要原因之一.为克服肿瘤耐药,多年来人们对肿瘤的耐药机制进行了大量研究,并在细胞乃至分子水平有了诸多进展,这其中包括某些耐药基因(如MDR)和细胞表面蛋白(如ρ-糖蛋白和多药耐药相关蛋白等)等介导的多药耐药[1].然而针对这些耐药机制所设计的治疗方法,尽管在体外研究中非常有效,但在临床上却难以奏效,特别对实体瘤的治疗更是令人失望.因此不难想象体内情况下肿瘤作为一个细胞群集体,其生物学特性和对药物的敏感性可能与体外单层培养时的单个癌细胞有着明显的差异.
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多药耐药相关蛋白与药物耐受性
药物耐受性是导致多种疾病治疗失败的主要原因,而多药耐药( MDR)的产生是发生耐药的主要形式, MDR包括三种形式:( 1)典型 MDR,即多药耐药基因( MDR1)及其编码的细胞膜 P-糖蛋白( PgP)表达增强所致;( 2)非典型 MDR,由谷胱甘肽解毒酶系统( GST)活性增高, DNA拓扑异构酶Ⅱ (TOPOⅡ )活性降低或结构异常, DNA操作修复能力增强组成;( 3)多药耐药相关蛋白( MRP)基因的扩增或过度表达.近年来,对多药耐药相关蛋白的研究较多,获得了大量成功,综述如下:
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恶性肿瘤多药耐药标记的检测及其临床意义
化学药物治疗(化疗)是恶性肿瘤综合治疗的主要手段之一.患者对化疗药物原发性或继发性的耐受是大多数肿瘤化疗失败的主要原因,也是当今肿瘤治疗的一大难题.肿瘤对化疗的耐药性可分为先天性耐药和获得性耐药;又根据耐药谱可分为原发耐药和多药耐药.多药耐药(multidrug resistance,MDR)是指肿瘤细胞在对一种化疗药物产生抗药性的同时,会对许多结构上无关的、作用机理不同的其他抗癌药物产生交叉耐药性.MDR表型涉及的化疗药物主要是天然来源的植物碱类抗肿瘤药物和抗肿瘤抗生素.由于这两大类药物是目前肿瘤治疗的主流药物,因此对各类恶性肿瘤组织进行MDR表型的检测,已为恶性肿瘤病人的个体化化疗提供了新的依据.目前在全国各大中型医院病理科应用免疫组化技术检测恶性肿瘤的MDR表型(标记),已成为临床肿瘤学的研究热点之一,并对肿瘤治疗工作有较大的指导作用.从临床应用情况来看MDR表型的检测包括P-糖蛋白(多药耐药基因蛋白)、MRP(多药耐药相关蛋白)、LRP(肺耐药相关蛋白)、TopoⅡ(DNA拓扑酶Ⅱ)、GST-π(谷胱苷肽-S-转移酶).下面将其耐药机理、耐药种类及治疗预后意义分析如下.
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非霍奇金淋巴瘤中CD40、CD40L和MRP1的表达及意义
目的 探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者淋巴瘤组织中CD40配体(CD40L)、CD40、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的过度阳性表达率与NHL多药耐药以及预后之间的关系及其意义.方法 选择2006年5月至2010年2月,于遵义医学院附属医院首诊为NHL的患者65例作为研究对象,纳入研究组(n=65);选择同期确诊的淋巴结反应性增生患者28例,纳入对照组(n=28).通过本院病理科收集研究组淋巴瘤组织以及对照组淋巴结增生组织标本.采用免疫组化Envision二步法检测组织标本中CD40L、CD40、MRP1的过度阳性表达率.结果 ①研究组的CD40L过度阳性表达率为30.77％,低于对照组的71.43％,两组相比差异有统计学意义(x2=13.199,P＜0.05);研究组的CD40过度阳性表达率为66.15％,高于对照组的35.71％,两组相比差异有统计学意义(x2=7.938,P＜0.05);研究组的MRP1过度阳性表达率为69.23％,高于对照组的28.57％,两组相比差异有统计学意义(x2=9.098,P＜0.05).②研究组MRP1与CD40L的表达呈负相关关系(r=-0.680,P＜0.05);与CD40的表达呈正相关关系(r=0.581,P＜0.05);CD40L与CD40的表达呈负相关关系(r=-0.410,P＜0.05).③研究组NHL组织中CD40L、CD40、MRP1的过度阳性表达率与淋巴结外浸润以及恶性程度、临床分期有关(P＜0.05).结论 NHL患者CD40L、CD40、MRP1的过度阳性表达可能影响NHL的预后;CD40L的缺乏、CD40的表达可能与NHL多药耐药相关;抗CD40单抗和重组人CD40L可能对治疗NHL有效.
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人参皂甙Rg3对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP逆转作用及其机理的研究
目的探讨人参皂甙Rg3对耐顺铂(CDDP)人肺腺癌细胞系A549DDP的逆转作用及其机理.方法以A549DDP及其亲本细胞A549为研究对象,MTT法观察Rg3对A549DDP耐药的逆转作用,采用免疫组化及RT-PCR方法分别在蛋白质和mRNA水平检测耐药相关蛋白MDR1、MRP、LRP表达.结果 MTT法显示低细胞毒浓度Rg3(10 μmol)有效逆转A549DDP细胞耐药7.3倍,而20、30 μmol Rg3分别逆转耐药1.3、1.2倍;10 μmol Rg3预处理A549DDP细胞12、24、36及48 h后分别逆转耐药1.0、1.6、7.6及10.4倍,表明Rg3逆转耐药呈时间依赖性.免疫组化和RT-PCR显示:A549DDP细胞MDR1、MRP、LRP呈过量表达,以Rg3(10 μmol)预处理A549DDP 12、24、36及48 h后,MDR1、MRP表达减弱,呈时间依赖性,而LRP表达无明显时间依赖性.结论 Rg3具有中度逆转肿瘤耐药作用,并呈时间依赖性.
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携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒的构建及其应用的初步研究
目的构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)的重组腺病毒并转染人肝癌耐药细胞株,为肝癌耐药的基因治疗提供实验研究基础. 方法将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒在细菌体内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASmrp,再用其转染人肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM.结果成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒,病毒滴度为2.5×109 efu/ml,多重感染复数为100时对SMMC-7721/ADM细胞株转导效率可达90%以上.结论构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASmrp可望有效地将反义MRP导入人肝癌耐药细胞株,为肝癌耐药机理及其逆转方式的研究提供实验基础.
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多药耐药相关蛋白在阿霉素诱导人肝癌细胞SMMC-7721耐药性产生中的作用及机理
目的 动态观察阿霉素(ADM)诱导肝癌细胞SMMC-7721耐药性的产生，了解多药耐药相关蛋白(MRP)在其耐药机理中的作用。方法 分别用逐步提高培养基中ADM的浓度诱导SMMC-7721细胞和用含不同ADM浓度的培养基直接短期培养SMMC-7721细胞的方法，诱导细胞产生耐药性，绘制剂量反应曲线，确定细胞耐药倍数，RT-PCR法测定细胞MRP mRNA的表达水平，流式细胞仪检测细胞内柔红霉素(DNR)的浓度。结果 随着培养基中ADM浓度的逐步提高，MRP mRNA的表达也逐渐增强，细胞内DNR浓度明显下降，SMMC-7721细胞的耐药性逐渐增加；用含不同ADM浓度的培养基直接培养亲代细胞后，虽然MRP mRNA表达明显升高，但细胞内DNR浓度仍维持较高水平，并且绝大部分细胞短期内死亡。结论 ADM可以逐步诱导肝癌细胞产生耐药性，其机理主要是由于MRP基因过度表达，其蛋白产物能明显降低细胞内化疗药物浓度，从而细胞获得耐药性。
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多药耐药真核表达载体的构建及其生物学特性
目的构建携带多药耐药相关蛋白(MRP)全长基因的真核表达载体,并研究其在人肝癌细胞株HepG2中的表达特性.方法双酶切克隆质粒pGEM-mrp1,获得含mrp1全长的cDNA片段,再将此片段定向克隆到哺乳动物真核表达载体pCI-neo的多克隆位点,经脂质体法转染HepG2细胞,G418筛选获得稳定表达的转基因细胞系HepG2/mrp1.RT-PCR检测HepG2/mrp1细胞mrp1 mRNA表达,流式细胞仪检测HepG2/mrp1细胞MRP的含量.结果本实验所构建的携带mrp1全长基因的表达载体pCI-mrp1能在HepG2细胞中表达,形成稳定的多药耐药细胞系HepG2/mrp1,其多药耐药性、MRP含量及mrp1 mRNA表达均较未转染该载体的HepG2细胞显著增加.结论将携带全长人多药耐药相关蛋白基因mrp1的载体导入人肝癌细胞株能够建立高效、稳定的多药耐药细胞株,为进一步研究多药耐药的机理及逆转多药耐药提供理想的细胞模型.
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多药耐药蛋白-P-gp的研究进展
多药耐药(MDR)表现为肿瘤细胞对多种结构不同、靶位元不同、作用方式不同的抗肿瘤药物,具有抵抗性.近年来研究发现,主要有两种基因表达与人类肿瘤细胞上的多药耐药表现有关,一种是多药耐药基因(Multidmg Resistance Gene 1 MDR1),即编码分子量为170KD的跨膜糖蛋白P-gp(P-出copro-tein);另一种是多药耐药相关蛋白(Multidrug RelatedProtein MRP)基因,即编码分子量为190KD的跨膜糖蛋白.近年来对P-gp研究较多,也较深入,现将有关P-gp的研究进展作一综述.
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耐药基因相关蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义
背景与目的肿瘤的多药耐药是肺癌化疗失败和导致患者死亡的重要原因之一.本研究的目的是探讨P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷胱甘肽-S-转移酶π(GST-π)在肺癌中的表达及其临床意义.方法采用免疫组织化学染色链亲和素-生物素-过氧化物酶法(streptavidin-biotin immunoperoxidase,SP)检测98例非小细胞肺癌组织中5种耐药蛋白的表达.结果P-gp、MRP、LRP、TopoⅡ、GST-π的阳性表达率分别为27.6%、11.2%、75.5%、50.0%和64.3%.LRP、TopoⅡ在鳞癌、腺癌、腺鳞癌间的表达有显著性差异(P＜0.05).5种耐药蛋白的表达与临床分期无明显关系(P＞0.05).47例接受化疗的非小细胞肺癌患者中,P-gp、LRP、GST-π的表达与化疗疗效有密切关系(P＜0.05).结论肺癌的耐药由多种耐药蛋白介导,联合检测肺癌组织中耐药蛋白的表达有助于选择合理的化疗方案及判断化疗疗效.
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肿瘤耐药蛋白在舌鳞癌中的表达及意义
目的检测P-糖蛋白(Pgp),多药耐药相关蛋白(MRP),肺耐药相关蛋白(LRP),谷胱苷肽-S转移酶(GST-π)及DNA拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)在舌鳞癌组织中的表达水平及与化疗疗效的关系.方法采用卡铂、平阳霉素和氨甲喋呤化疗方案对40例舌鳞癌患者进行化疗,分别于化疗前和化疗后用免疫组织化学LsAB法检测Pgp,MRP,LRP,GST-π,TopoⅡα在80例舌鳞癌组织中的表达,其中40例为化疗前,40例为化疗后.结果在检测的舌癌组织中,化疗前Pgp,MRP,LRP,GST-π,TopoⅡα的阳性表达率分别为47.5%,50%,35%,45%,82.5%,它们的表达与临床病理无关(P>0.05);Pgp,MRP化疗前后水平上升(P<0.05);Pgp,MRP与化疗耐药效果有关(P<0.05);共表达现象普遍,Pgp,MRP,GST-π及MRP,GST-π联合表达率在化疗无效者中为40%和50%,而在化疗有效者中为0.结论 Pgp,MRP,GST-π的共表达与舌鳞癌的原发性耐药有关.
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包载反义RNA重组腺病毒微球体外逆转肝细胞癌MRP的表达
目的了解包载反义RNA重组腺病毒微球对肝细胞癌多药耐药相关蛋白(MRP)的作用. 方法采用可降解的生物材料聚乳酸-聚乙烯醇(PELA)包被携带反义MRP基因的重组腺病毒制备的微球转染人肝癌耐药细胞株HepG2/ADM,48 h及120 h后以MTT法检测耐药细胞的阿霉素半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测细胞内红色荧光强度,以荧光指数代表柔红霉素(DNR)浓度;以β-actin为内参照,用RT-PCR法观察转染48 h及120 h后耐药细胞MRP mRNA表达量的高低.结果 HepG2/ADM耐药细胞48 h及120 h阿霉素IC50为 9.72 mg/L和4.15 mg/L;HepG2/ADM细胞内DNR红色荧光强度明显升高,转染Adv微球后48 h及120 h MRP mRNA/β-actin的比值分别较转染前降低16.7%及63.6%.结论包载反义RNA重组腺病毒微球可有效抑制MRP mRNA的表达,增加HepG2/ADM耐药细胞内化疗药物的浓度,提高耐药细胞对化疗药物的敏感性,为进一步研究体内逆转肝癌耐药提供实验基础.
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多药耐药相关蛋白1在骨肉瘤中的表达
目的探讨骨肉瘤组织中多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达及其与临床病理特征的关系.方法采用免疫组织化学方法检测6例正常成年骨组织和45例骨肉瘤组织中MRP1,结合临床病理指标进行分析.结果6例正常骨组织中MRP1的表达均为阴性.45例骨肉瘤中MRP1阳性32例(71.11%),其中高分化骨肉瘤阳性率28.57%(2/7),中、低分化骨肉瘤阳性率78.95%(30/38),两组间差异有显著性(P<0.05).且随着骨肉瘤分化程度的降低,MRP1表达率升高,MRP1的表达与骨肉瘤的恶性程度呈正相关(r=0.844).根据肿瘤大小、Enneking外科分期、血清碱性磷酸酶(ALP)含量、患者性别、年龄及就诊前病程长短等分组,MRP1表达无统计学意义.结论正常成年骨组织中MRP1表达阴性.骨肉瘤组织中有MRP1的表达,MRP1的表达与骨肉瘤的恶性程度呈正相关,提示 MRP1可能为骨肉瘤原发耐药的重要原因之一.
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携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒载体的构建
目的构建携带反义多药耐药相关蛋白(MRP)的重组腺病毒载体以用于肝癌耐药的基因治疗研究.方法将MRP基因片段反向克隆到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带反义MRP的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASmrp.结果成功地构建了携带反义MRP的重组腺病毒载体系统,经测定病毒滴度可达2.5×109. 结论构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-ASmrp可望有效地将反义MRP导入人肝癌耐药细胞株,为进一步研究肝癌耐药机制及其逆转方式提供实验基础.
