血管内皮生长因子D和血管内皮生长因子受体3在人结肠癌中的表达及淋巴道转移中的作用

目的 观察血管内皮生长因子D(VEGF-D)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)在人结肠癌组织中的表达,检测结肠癌组织中的微淋巴管密度(LMVD),探讨VEGF-D和VEGFR-3在淋巴管生成以及结肠癌淋巴道转移中的作用.方法 选择55例不同时期,不同分化程度的人结肠癌组织样本,应用免疫组织化学染色的方法,观察VEGF-D和VEGFR-3在人结肠癌组织中的表达,应用Podoplanin标记淋巴管,检测结肠癌组织中的淋巴管密度.结果 在55例结肠癌组织中,VEGF-D的阳性表达率为54.5%,明显高于在癌周正常组织内的表达(P＜0.05);结肠癌组织中VEGFR-3表达的阳性率为69.1%,明显高于在癌周正常组织内的表达(P＜0.01);并且VEGFR-3的表达与VEGF-D的表达具有显著相关性(P＜0.01).在结肠癌组织中,淋巴结转移阳性组,浸润深度超过肌层组,DukeC、D期的VEGF-D的表达水平和LMVD明显高于淋巴结转移阴性组,浸润深度未超过肌层组,Duke A、B期(P＜0.01),经计数淋巴管数量,癌组织中的LMVD明显高于癌周正常组织(P＜0.01),并且LMVD与VEGF-D的表达显著相关(P＜0.01).结论 结肠癌组织中VEGF-D的表达水平随着癌的浸润和转移程度的增强而增高,并且通过上调其受体VEGFR-3的表达而促进癌组织中淋巴管的生成,从而促进癌的浸润和转移.

胰岛素样生长因子-1抑制β淀粉样蛋白25～35诱导的神经干细胞凋亡

目的 观察β-淀粉样蛋白(Aβ)对神经干细胞(NSCs)增殖和凋亡的影响,探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对Aβ介导的NSCs毒性作用的保护机制.方法 从E14 SD大鼠大脑中分离神经干细胞,分别用Aβ、IGF-1和Aβ加IGF-1处理,锥虫蓝(trypan blue)染色确定细胞死亡数量和细胞死亡率,BrdU标记并分析细胞增殖能力,免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和新生细胞,TUNEL技术检测凋亡细胞.结果 IGF-1处理时细胞死亡率低下,有大量BrdU阳性细胞生成,但无TUNEL阳性细胞.Aβ处理组细胞死亡率在6～48 h快速上升,并形成大量TUNEL阳性细胞.而IGF-1加Aβ处理时,细胞死亡率较Aβ组显著下降.TUNEL阳性细胞显著减少.结论 Aβ促进神经干细胞死亡和凋亡;而IGF-1促进神经干细胞增殖并抑制由Aβ诱导的神经干细胞凋亡.

人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞及T细胞的免疫组织化学定量分析

目的 研究人宫颈上皮内瘤变和浸润癌组织中树突状细胞和T细胞的数量、分布变化,为人宫颈癌的诊断和生物治疗提供实验依据.方法 采用免疫组织化学和图像分析技术,测定人宫颈上皮内瘤变、宫颈浸润癌和正常宫颈组织中树突状细胞表型抗原CD1a、S-100及T细胞表面分化抗原CD3、CD8阳性细胞的数量、分布和表达强度.结果 与人正常宫颈组织比较,宫颈上皮内瘤变中CD1a+、S-100+、CD3+、CD8+细胞数量增多(P＜0.05),与组织分级呈正相关(P＜0.05),抗体表达强度增高;宫颈浸润癌中4种抗体阳性细胞数量减少,与临床分期呈负相关(P＜0.05),强度略有下降.结论 人宫颈上皮癌前病变至浸润癌变过程中树突状细胞和T细胞数量及抗体表达强度发生变化,提示宫颈病变局部的免疫功能发生了改变.

大鼠心肌缺血后心肌组织端粒酶的表达变化

目的 探讨盐酸异丙肾上腺素和冠状动脉结扎术致大鼠心肌缺血后心肌组织端粒酶(TMA)的表达.方法 60只SD大鼠随机分为A、B、C 3个实验组,每组均设对照组.实验组经腹腔注射盐酸异丙肾上腺素8 mg/kg后、随机分为A组(缺血30 min组)和B组(缺血60 min组),A、B对照组腹腔注射8 ml/kg注射用水.C组为冠状动脉结扎30 min组,3组均查心电图,左心室取血查心肌酶.组织学和免疫组织化学方法观察心肌组织TMA的表达,计算机图像分析测定TMA含量的变化.结果 A、B、C 3个实验组TMA的表达均较对照组增强.计算机图像分析测定TMA的含量均较各自对照组升高,且具有显著的统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).3个实验组之间比较有显著的统计学差异.结论 心肌缺血能刺激心肌组织TMA的表达增强.

大鼠骨髓间充质干细胞L-型钙通道的表达及电流检测

目的 探讨L-型钙通道基因和蛋白在骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达及离子电流,以进一步研究其在MSCs增殖和分化中的作用.方法 分离、培养和纯化大鼠骨髓间充质干细胞,细胞免疫荧光化学方法检测表面分子CD14、CD29、CD34,CD44、CD45、CD106的阳性率和L-型钙通道蛋白的表达;采用RT-PCR技术观察MSCs细胞中钙离子通道不同亚基α1C、α1D、α1G、α1H、α1S mRNA的表达;全细胞膜片钳技术记录单个细胞离子电流.结果细胞免疫荧光化学方法检测CD29、CD44、CD106阳性率在93%左右,CD14、CD34、CD45表达阴性.RT-PCR结果显示,可见L-型钙通道α1C亚基的mRNA高表达;但未见L-型钙通道α1D、α1S亚基和T-型钙通道的α1G、α1H亚基mRNA的表达.L-型钙通道蛋白(α1C)呈阳性表达.在36例细胞中16例细胞记录到电压依赖性内向电流,此电流激活电位-30 mV,大激活电位为0～10 mV,可被nifedipine(10 μmol/L)阻断,细胞外液中以10 mmol/L Ba2+作为负载离子,记录的电流强度明显大于2 mmol/L Ca2+时,证实为L-型钙电流.结论 MSCs不仅有L-型钙通道的基因和蛋白的表达,并且具有功能电流.

慢性复合应激增强大鼠海马Doublecortin的表达

目的 探讨慢性复合应激性学习记忆增强大鼠海马齿状回(DG)新生神经元数量变化以及Doublecortin(DCX)在海马组织中表达的变化及其意义.方法 成年雄性大鼠随机分为复合应激组和正常对照组.复合应激组动物每天交替暴露于复合应激原中达6周.实验结束后,所有动物分别进行3d的Morris水迷宫测试,记录其学习和记忆成绩.运用免疫细胞化学方法观察海马DG新生神经元数量的变化,同时运用Western blotting和RT-PCR技术分别检测DCX在海马的表达及其mRNA水平的变化.结果 与对照组相比,复合应激组动物的学习与记忆成绩优于对照组(P＜0.05);其海马DG新生神经元数明显增多(P＜0.05);海马DCX蛋白的表达明显增加(P＜0.05);海马DCX mRNA水平明显上调(P＜0.05).结论 慢性复合应激致大鼠的学习与记忆能力增强,海马DG内DCX阳性细胞数增多,提示新生神经元数量增加是导致大鼠学习记忆能力增强的原因之一.

外源多胺对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶基因转录的调节

目的 研究天然多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因转录的调节,探讨多胺在肝再生中的作用.方法 大鼠部分肝切除术诱导再生肝,采用原位杂交技术分析ODC mRNA的表达量,外源多胺(溶于0.9%NaCl)的处理用皮下注射法.结果 外源多胺处理后,再生肝ODC mRNA水平的变化趋势与对照组相似,但不同种类、剂量的多胺,结果差异明显.在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在部分肝切除后2、4和10 h与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);低剂量(0.02 mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4 h和12 h显著高于对照组.高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的ODC mRNA水平始终低于对照组(在10 h例外);而低剂量(0.03 mg/kg体重)处理组则不同,ODC mRNA水平表现出先抑制(在2 h)后促进(在4 h和6 h)的特点.精胺的作用与精脒相似.结论 不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录存在着反馈调节作用.

灵芝孢子防止妊娠高血压大鼠的胎鼠及其生后幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少

目的 探讨灵芝孢子对妊娠高血压大鼠的胎鼠及幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少的干预作用.方法 40只SD妊娠大鼠分为正常对照组、N硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)+蒸馏水组、L-NAME+精氨酸组、L-NAME+灵芝孢子组.采用免疫组织化学、Western blottin、RT-PCR、流式细胞计数和电镜等技术对海马组织进行检测.结果 应用L-NAME后,E21海马低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达增加,直到P30时仍有表达.E21海马微血管密度增高,P30海马毛细血管结构异常.E21海马细胞的增殖下降,P30海马神经元减少.应用灵芝孢子后,E21海马HIF-1α和VEGF低水平表达,在P30时则未见表达.E21海马微血管密度达到正常水平,P30海马毛细血管结构正常.E21海马细胞增殖上升,P30海马神经元恢复性增多.结论 灵芝孢子能防止妊娠高血压大鼠的胎鼠及幼鼠海马细胞增殖下降和神经元存活减少.

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞

目的 采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21 d和28 d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达.结果 MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5 μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱.αMHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显.结论 骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源.

不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞比率的研究

目的 比较不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例.方法 取胎龄8～12 周的人胚胎脑海马,机械分离成单细胞悬液,以2×106 个细胞/ml接种到含h-EGF、h-bFGF和h-LIF的DMEM/F12培养液中.用1%FBS诱导神经干细胞球分化,12 h后行RNA-结合蛋白(musashil)免疫细胞化学鉴定,分别在2、5、7、14和23 d时行β-Ⅲ微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin/Tuj1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(galc)免疫细胞化学鉴定.结果 诱导分化12 h时细胞球中绝大部分细胞为Musashil阳性细胞,第2 d时有少量的β-ⅢTubulin和GFAP阳性细胞,未见galc阳性细胞;第7 d时β-Ⅲ Tubulin阳性细胞数目多,约为细胞总数的48.2%,以后逐渐下降,而GFAP阳性细胞数目在第2～23 d内呈逐渐增加趋势,到第23 d时达细胞总数的65.3%;随分化时间延长,只能检测到极少量的galc阳性细胞.结论 1%FBS可促使人神经干细胞分化为中枢神经系统的3种主要细胞类型,且其分化为神经元和胶质细胞的比例在不同时间点上有显著差异.

干细胞体外自发分化和相关基因表达状况的研究

目的 在人胚胎干细胞(hESC)体外自发分化过程中,检测子宫内膜发育相关基因的表达以及子宫内膜样组织结构,子宫内膜样细胞的存在.方法 悬浮法培养类胚体14 d,10%中性甲醛固定,常规石蜡包埋切片,取具有子宫内膜样组织结构的切片行雌激素受体(ER)免疫组织化学染色.hESC贴壁分化10 d,免疫荧光双标检测雌激素受体/波形蛋白(角蛋白)的表达.hESC贴壁分化5 d,RT-PCR方法检测子宫内膜发育相关基因:Wnt4、Wnt7a、Wnt5a、Hoxa10、Hoxa11、ER的表达.结果 hESC贴壁分化5 d后可检测到Wnt4、Wnt7a、Wnt5a、Hoxa10、Hoxa11、ER的表达.hESC贴壁分化10 d后,部分细胞同时表达ER/波形蛋白(角蛋白).培养14 d类胚体内存在子宫内膜样的腺体结构,部分腺体结构ER表达阳性.结论 hESC自发分化过程中,可能部分细胞具有自发分化为子宫内膜干细胞,子宫内膜细胞的倾向,但需对整个发育过程进行进一步鉴定.

大鼠骨骼肌纤维组织化学分型与肌球蛋白重链的功能

目的 研究分析了成年SD大鼠外侧腓肠肌各肌亚体内肌纤维的分布与肌球蛋白重链异构体(MHCs)的构成.方法 应用琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学染色分析其4型肌纤维构成比例与横切面积,并以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺小孔梯度凝胶电泳(SDS-PAGE)检测肌球蛋白重链异构体.结果 Ⅰ型慢缩氧化(SO型)肌纤维、ⅡX型快缩氧化(FO型)肌纤维、ⅡA型快缩氧化酵解(FOG型)肌纤维及ⅡB型快缩酵解(FG型)肌纤维的构成比例在内侧亚体分别为(10.2±4.1)%、(2.8±2.1)%、(25.7±9.6)%、(61.3±10.1)%;在外侧浅亚体分别为(15.9±8.2)%、(6.1±2.6)%、(22.8±11.5)%、(55.2±12.6)%;而在外侧深亚体则分别为(21.3±9.2)%、(9.8±2.5)%、(18.5±8.7)%、(50.4±10.9)%.4型肌纤维均呈交错式镶嵌型分布.Ⅰ型肌纤维横切面积较小,ⅡX型肌纤维横切面积小,ⅡA型肌纤维横切面积中等,ⅡB型肌纤维横切面积大.与使用SDS-PAGE在内侧亚体、外侧浅亚体及外侧深亚体分别发现的肌球蛋白重链异构体(MHCs)所确定的MHCsⅠ、MHCsⅡx(或Ⅱd)、MHCsⅡa、MHCsⅡb相对应.结论 大鼠外侧腓肠肌的重要功能是屈膝关节和伸跗关节,在提踵推进躯体向前和需少量肌力活动时,主要依靠外侧浅、深亚体的肌纤维完成.只有快速运动使肌力需要25%以上时,才有内侧亚体的参与.

成年大鼠骨髓基质细胞转分化为胰岛样细胞的实验研究

目的 探讨二甲基亚枫(DMSO)对成年大鼠骨髓基质干细胞(MSC)定向诱导分化为胰岛样细胞团的作用.方法 用长骨骨髓腔冲洗的方法对Wistar大鼠MSC进行分离和培养,加入1%DMSO诱导3 d后,HDMEM培养7～10 d.通过形态学观察、双硫棕(DTZ)染色、免疫细胞化学染色、葡萄糖刺激实验和RT-PCR,对诱导细胞进行体外结构和功能鉴定.结果 1%DMSO诱导后第3 d有胰岛样结构出现;免疫细胞化学显示,诱导后第1 d MSC呈nestin免疫反应阳性,诱导后第10 d细胞团表达胰岛素、胰高血糖素,而未诱导组细胞不表达上述蛋白;RT-PCR结果表明,诱导后第10 d检测到胰岛素1(Ins1)、胰岛素2(Ins2)、胰高血糖素(glu)和生长抑素(SS)基因的表达.结论 体外经DMSO诱导,大鼠骨髓基质干细胞可定向分化为胰岛样细胞.

血管内皮生长因子C及其受体在MNNG诱发的大鼠大肠癌细胞及淋巴管的表达

目的 观察大鼠大肠癌组织内血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体3(VEGFR-3)的表达情况,探讨VEGF-C及其受体VEGFR-3在肿瘤淋巴转移中的作用.方法 采用甲基硝基亚硝基胍(MNNG)诱发的大鼠大肠癌模型,应用免疫组织化学(SABC法)技术检测29例大鼠原发性大肠癌组织中VEGF-C及VEGFR-3蛋白,观察VEGF-C及VEGFR-3在大肠癌组织内的表达.结果 正常大肠组织内未见VEGF-C阳性表达,但可见淋巴管内皮细胞VEGFR-3阳性表达.在大肠癌组织内,VEGF-C蛋白表达于癌细胞,早期和中晚期癌的阳性表达率分别是75%和100%,(P＜0.05).VEGFR-3主要表达于淋巴管内皮细胞,早期和中晚期癌组织内淋巴管的阳性表达率分别是58.33%和94.12%(P＜0.05).结论 大鼠大肠癌VEGF-C的表达与肿瘤进展有关,推测VEGF-C通过受体VEGFR-3诱导淋巴管生成:VEGFR-3在淋巴管的阳性表达均随肿瘤进展增高,可能与大肠癌淋巴转移有关.

NMDA受体1和雌激素受体在白细胞介素-2致痫大鼠脑内的表达变化和共存

目的 探讨白细胞介素2(IL-2)致痫与NMDA受体(NMDAR)和雌激素受体(ER)的关系.方法 应用免疫组织化学、免疫荧光双标和激光共焦显微镜技术研究IL-2致痫大鼠及经免疫抑制剂预处理后再致痫大鼠脑内NMDAR-1、ER的表达变化以及NMDAR/ER和NMDAR/IL-2R共存情况.结果 大鼠侧脑室注射IL-2以后,动物出现明显的癫痫发作,其大脑皮质和海马部位NMDAR-1及ER表达较对照组明显增多,免疫反应平均吸光度(A)值与对照组相比有极显著性差异;而用IL-2抑制剂环胞霉素(CsA)或糖皮质激素(G)预处理后再注射IL-2,动物未出现或仅出现轻微的癫痫发作,其NMDAR-1和ER表达较IL-2组明显减少(P＜0.05).研究还观察到大鼠脑内大脑皮质和海马部位NMDAR/ER或NMDAR/IL-2R之间存在着广泛共存.结论 IL-2有致痫作用,NMDAR-1、IL-2R和ER在致痫活动中可能存在协同和互动作用.

大鼠松果体囊上皮表面的扫描电镜观察

目的 探讨松果体激素释放到蛛网膜下隙脑脊液途径的结构基础.方法 对1.5月龄和12月龄大鼠松果体浅部,进行松果体囊表面的扫描电镜观察.结果 在大鼠松果体囊表面发现存在筛状囊上皮孔和喇叭口状囊上皮孔.筛状囊上皮孔主要存在于1.5月龄大鼠的松果体囊上皮,是由许多密集排列的囊上皮细胞周边部细胞膜凹陷形成的圆形孔洞,筛孔直径200～500 nm;喇叭口状囊上皮孔见于1.5月龄和12月龄大鼠的松果体囊表面,由相邻上皮细胞向松果体内部凹陷,形成圆形或椭圆形开口,孔径1～4 μm.在两组动物的松果体囊表面,可见到直径800～1 000 nm的球形分泌颗粒样结构.结论 松果体分泌颗粒的释放形式,可能存在连同颗粒被膜的整体释放;松果体激素或分泌颗粒,可能会通过松果体囊上皮孔,直接进入蛛网膜下隙的脑脊液.

大鼠Sertoli细胞与精原细胞的分离及共培养

目的 分离纯化14 d大鼠Sertoli细胞与精原细胞,用Sertoli细胞作为饲养层对大鼠精原细胞进行体外培养研究.方法 酶消化法制备大鼠睾丸组织单细胞悬液,采用牛血清白蛋白(BSA)不连续密度梯度沉降法分离Sertoli细胞和精原细胞.结果 经分离的Sertoli细胞与精原细胞的纯度分别达到92.73%和78.36%.Sertoli细胞与精原细胞共培养,可见精原细胞发生分裂增殖等行为.结论 在添加EGF、bFGF和GDNF等细胞因子的10%胎牛血清DMEM/F12培养基中,精原细胞能够存活一定时间;而Sertoli细胞表现为旺盛的生长状态,并可促进精原细胞的分裂与增殖.

转染Nurrl基因的大鼠骨髓基质细胞的诱导分化

目的 通过克隆孤儿核受体(Nurrl)基因并转染大鼠的骨髓基质细胞(MSCs),探讨Nurrl基因对MSCs在三七总皂甙(tPNS)和全反式维甲酸(ATRA)的联合诱导下向神经元分化的影响.方法 构建pcDNA3.1-hygro-Nurrl表达质粒,应用脂质体Lipofectamine 2000转染MSCs.转染前MSCs以相同的密度铺6孔板,并随机设置4个实验组,分别是:Nurrl+tPNS/ATRA组、tPNS/ATRA组、Nurrl组和对照组,利用免疫细胞化学方法检测Nurrl基因的表达.转染48 h对Nurrl+tPNS/ATRA组和tPNS/ATRA组的细胞,依次给予β-疏基乙醇(BME)预诱导和tPNS/ATRA诱导,而Nurrl组和对照组的细胞除给予培养基代替tPNS/ATRA诱导剂外,其余步骤均相同;检测4组细胞的酪氨酸羟化酶(TH)、乙酰胆碱酯酶(AChE)和γ-氨基丁酸(GABA)抗体的免疫细胞化学结果并统计各组阳性细胞的比例.结果 免疫细胞化学显示,转染的骨髓基质细胞表达Nurrl蛋白;Nurrl+tPNS/ATRA组TH阳性细胞比例明显高于tPNS/ATRA组,分别是(38.4±4.6)%和(5.9±3.4)%.结论 用tPNS/ATRA作诱导剂,转染Nurrl的MSCs诱导后TH阳性细胞的比例明显高于未转染组,差别有统计学意义;tPNS/ATRA诱导MSCs分化成神经元细胞的作用明确.

17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白介导的多药耐药机制

目的 探讨17β-雌二醇逆转乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的非典型多药耐药的机制.方法 分别通过药物诱导和转基因的方法建立由BCRP和巨细胞病毒(CMV)启动子启动表达BCRP的两种耐药细胞系MCF-7/MX20和MCF-7/BCRP,将耐药细胞培养在含有17β-雌二醇的培养基中,通过细胞毒性实验,外排实验以及定量PCR观察对不同耐药细胞系的逆转作用.结果 培养基中加入17β-雌二醇48 h后,MCF-7/BCRP细胞中的米托蒽醌的强度明显低于MCF-7/MX20,MCF-7/BCRP细胞中BCRP mRNA的含量明显高于MCF-7/MX20.17β-雌二醇可以抑制细胞中BCRP的表达和功能,但是不能抑制MCF-7/BCRP细胞中BCRP的表达和功能.结论 17β-雌二醇不是作为BCRP的底物而抑制BCRP功能的,而可能是通过调控BCRP基因的启动子发挥作用.

星形胶质细胞条件培养基对培养海马神经元GluR2和PICK1 mRNA表达的调控

目的 探讨癫痫发病过程中,星形胶质细胞对神经元AMPA受体亚单位表达的调节机制.方法 收集谷氨酸刺激的星形胶质细胞条件培养基,作用于培养的海马神经元,用RT-PCR方法检测神经元GluR2和PICK1 mRNA表达的变化.结果 在星形胶质细胞条件培养基作用2h、8h、12h后,培养的海马神经元GluR2mRNA表达明显下降,而PICK1 mRNA表达则升高,与对照组相比,差异有显著意义(P＜0.05).离子型谷氨酸受体拮抗剂D-AP5和CNQX不能完全阻断条件培养基的作用.结论 在癫痫发病过程中,星形胶质细胞激活能通过上调PICK1的表达,实现下调神经元AMPA受体GluR2亚单位的表达.

蛋白激酶Cγ在成年大鼠延髓和脊髓白质中的分布

目的 观察蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)在成年大鼠延髓和脊髓白质内的分布.方法 免疫组织化学ABC法显示PKCγ免疫阳性物质在延髓和脊髓颈、胸、腰、骶段白质内的表达和分布.结果 PKCγ免疫阳性物质分布于锥体、锥体交叉及脊髓颈、胸、腰、骶段后索腹侧中;延髓和脊髓背角神经元中也有PKCγ免疫阳性物质存在.结论 PKCγ免疫阳性反应产物广泛分布于成年大鼠延髓和脊髓白质内的皮质脊髓束中.PKCγ免疫阳性反应产物在延髓锥体和脊髓后索内的定位与大鼠皮质脊髓束的位置和走行一致,提示其在运动神经传导通路中可能起着重要作用.

抗CD81抗体对星形胶质细胞增殖的抑制作用

目的 研究抗CD81抗体在星形胶质细胞增殖中的作用.方法 将纯化的星形胶质细胞分为6组,加入不同浓度抗CD81抗体,其浓度依次为0、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L、5mg/L、10mg/L,以四甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性.在此检测结果的基础上,选出3个有意义的浓度组,加入浓度分别为0、0.5mg/L、5mg/L的抗CD81抗体,采用流式细胞术观察抗CD81抗体对星形胶质细胞周期的影响并进行统计学分析.结果 抗CD81抗体对星形胶质细胞的增殖有抑制作用,并呈一定的剂量依赖性.加入抗CD81抗体培养24 h后,实验组的星形胶质细胞处于G0/G1期的细胞指数减少,S期细胞指数增多.结论 抗CD81抗体抑制了星形胶质细胞的增殖,使星形胶质细胞的细胞周期受阻,阻滞于S期.

转移程度不同的小鼠肝癌细胞株对腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 研究转移程度不同的小鼠肝癌细胞株对腹腔巨噬细胞功能的影响.方法 在两株转移程度不同的小鼠腹水型肝癌模型中,取荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞,检测其在干扰素γ(IFN-γ)和脂多糖(LPS)刺激下产生一氧化碳(NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,并检测其活化后的杀伤能力.进一步采用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,研究不同荷瘤小鼠腹水中IFN-γ与转化生长因子β1(TGF-β1)的水平,并用相应抗体封闭TGF-β1后,检测活化巨噬细胞产生NO能力及杀伤活性.结果 经IFN-γ和LPS活化后,荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和TNF-α能力明显低于正常巨噬细胞,杀伤能力下降.高转移性肝癌小鼠巨噬细胞分泌NO水平和杀伤能力均低于低转移性小鼠,但其分泌TNF-α量较高.此外,荷瘤小鼠腹水含较高水平IFN-γ与TGF-β1,不同转移程度荷瘤小鼠IFN-γ水平接近,但高转移性肝癌小鼠腹水含更多TGF-β1,而且TGF-β1的封闭可导致与肿瘤细胞共培养的巨噬细胞分泌NO的能力部分恢复.结论 肿瘤细胞可以通过分泌TGF-β1等抑制性因子下调巨噬细胞的活性和免疫功能.肿瘤的转移程度可能与其分泌免疫抑制因子的能力相关.

大理市白族指嵴纹数和t三叉的研究

目的 研究300名正常白族人指嵴纹数和t三叉,为医学、遗传学、人类学提供正常参数.方法 在知情同意手续下,捺印调查对象的手纹.结果 总指嵴纹数(TFRC)为126.88±32.28,男性大于女性(P＜0.05),无手别差异(P＞0.05).各指指嵴纹数(FRC)高低为:拇指＞环指＞食指＞中指＞小指,均为男性大于女性(P＜0.05),无手别差异(P＞0.05).对应指FRC差值变化趋势为,随着差值增加频数逐渐减少,绝大部分差值在3以内(占88.2%).TFRC的频数分布近似正态分布.atd角为(40.27±4.34)度,tPD为(12.46±4.66)%,均为女性大于男性(P＜0.05),无手别差异(P＞0.05).72.5%的个体tPD低于15%,无大于30%的.结论 对应指FRC和t三叉的分布具有对称性,白族和其他民族有共性也有其特异性.

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的 研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响.方法 培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组.运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位.结果 Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100 μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P＜0.01).Western blotting表明,当LPS作用浓度为100 μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平.免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集.在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异.结论 在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位.这些改变与PKC的功能相关.提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导.

诱导大鼠间充质干细胞形成的神经元样细胞的形态特征

目的 研究诱导大鼠骨髓间充质于细胞(MSCs)形成的神经元样细胞的形态特征.方法 通过贴壁法培养鉴定大鼠骨髓MSCs,体外培养扩增纯化后加入新生鼠脑匀浆上清诱导48 h.倒置显微镜和透射电镜下观察诱导前后细胞的形态结构变化,免疫细胞化学方法鉴定诱导后细胞的性质.结果 倒置显微镜下可见MSCs呈纺锤形和多角形,核居中,有1或2个核仁,诱导后细胞呈神经元样,细胞伸出较长的轴突样和树突样突起;免疫组织化学方法显示NSE、NF阳性,GFAP阴性.透射电镜下可见诱导前MSCs胞质较丰富,有较多的细胞器,细胞核呈圆形或椭圆形,也可见不规则形核,核染色质较疏松,有明显核仁,多为1个.有的MSCs表面可见较多的微绒毛.诱导后细胞胞质丰富,细胞核多为不规则形,染色质疏松,核仁较大,1～3个不等,细胞表面有发达的微绒毛.结论 MSCs是一种多分化潜能的细胞,诱导后分化成为具有成熟细胞器的神经元.

高湿热环境下谷氨酸及其受体在大鼠下丘脑的表达变化

目的 探讨高湿热环境下大鼠的耐热极限时间和下丘脑内谷氨酸(Glu)和N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2(NMDAR2)的表达及其意义.方法 将大鼠置于仿真气候舱[干球温度(40.0±0.5)℃,相对湿度(60±5)%]内,观察动物的行为反应,动物出现昏迷或抽搐则立即取出动物,常规固定、取脑制片,用免疫组织化学方法显示Glu、NMDAR2和加压素(VP)在下丘脑的室旁核(PVN)和视上核(SON)的表达.结果 动物在高湿热环境下表现躁动不安、呼吸加快、前爪抓挠面部,持续120min左右时部分动物死亡.切片观察湿热刺激组的下丘脑PVN和SON中Glu、NMDAR2以及VP表达比对照组明显上调(P＜0.01).结论 高湿热环境下大鼠的耐热极限时间约是120 min.下丘脑内的谷氨酸代谢参与机体对高湿热刺激的反应及其调节过程.

灰鹤(Grus grus)消化系统各器官蛋白水解酶的种类和活性研究

目的 研究灰鹤(Grus grus)消化系统各器官蛋白水解酶的种类和性质,为探讨野生鸟类的分类地位、系统演化提供基础资料.方法 采用蛋白水解酶复性电泳(G-PAGE)技术.结果 1.灰鹤消化系统蛋白水解酶种类多,在各种pH条件下,共计有26种;2.灰鹤消化系统蛋白水解酶的活性受pH值的影响和制约,在中性条件下酶活性强,酸性条件下弱,总的酶活性表现为中性＞碱性＞酸性;3.同一器官在不同的pH条件下,蛋白水解酶的种类和活性有较大的变化,不同器官蛋白水解酶的适pH条件各不相同;4.在各种pH条件下,19 kD酶带普遍存在于除腺胃以外的各器官中,在中性条件下,各消化器官都分布有66和22 kD两条酶带.结论 灰鹤消化系统蛋白水解酶的适pH为7.0;66、22、19 kD酶带的分布、活性及pH依赖性特点是灰鹤消化系统蛋白水解酶的主要特征.

祝贺趙敏學教授百年华诞