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慢病毒载体介导 GFP 基因转染犬脂肪干细胞的实验研究

王营;傅强;邓晨亮;赵仁淹;刘伟

摘要: 目的研究慢病毒载体介导绿色荧光蛋白(GFP)转染犬脂肪干细胞(ADSCs)的理想条件,检测转染后细胞的生物学特性及分化能力。方法酶消化法获取ADSCs ,流式细胞技术检测细胞表面抗原,慢病毒载体介导GFP以50、100、150和200的感染复数( MOI)作用24 h转染ADSCs,荧光显微镜及流式细胞检测荧光强度和转染效率,CCK-8法检测转染对ADSCs生长和增殖的影响,将转染ADSCs经成肌诱导后,免疫荧光检测成肌细胞特异性抗原结蛋白(desmin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果流式细胞仪检测结果CD90、CD44、CD105表达均为阳性,CD34、CD45表达均为阴性,MOI为50、100、150和200,转染效率分别为75.88%、90.99%、97.42%和99.17%。 MOI为150时,转染对ADSCs增殖无明显影响。病毒转染ADSCs经成肌诱导分化后,表达desmin和α-SMA阳性。结论慢病毒载体介导的GFP能高效标记ADSCs,且标记后细胞的增殖分化能力无明显影响。

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