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LC-MS/MS法测定人血浆中多粘菌素E浓度分析方法的建立
目的:建立人血浆中多粘菌素E浓度测定的LC-MS/MS方法 ,方法:样品处理:蛋白沉淀;采用Agilent Polaris C18(50*3 mm,3μm)色谱柱;流动相0.5％ 甲酸水溶液(A)-0.5％ 甲酸乙腈溶液(B);梯度洗脱;流速为0.65-2.4mL/min;内标物:多粘菌素B1;质谱检测,正离子模式.结果:多粘菌素E1的线性范围是20.0～2000 ng/mL(r2=0.9984),定量下限为20.0 ng/mL.批内精密度 ≤4.2％,批间精密度 ≤3.7％;提取回收率在100.3％-113.5％ 之间,总体变异系数(％CV)为6.2％.本方法定量下限低,血浆前处理方法操作简便,节约成本.结论:建立的方法准确精密、 稳定可靠,可用于人血浆中多粘菌素E1浓度的检测.
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肾综合征出血热双价纯化疫苗中残余DNA的去除
为了避免外源DNA与人染色体整合,保证生物制品的安全性,WHO及欧共体等均制定标准以控制生物制品外源DNA的含量.据2000版<中国生物制品规程>,标准为外源DNA含量不大于10 ng/剂量.用Vero细胞为基质制备肾综合征出血热(HFRS)双价纯化疫苗,是国家"九五"科技攻关课题.在完成了HFRS病毒株在Vero细胞上适应性的筛选及提高毒力滴度等一系列试验后,控制疫苗原液中残余DNA含量成为保证疫苗安全性的重要方面.在小量试验基础上,采用硫酸鱼精蛋白沉淀残余DNA获得有效结果.现报告如下.
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凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较
目的 探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响.方法 应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点.结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定.超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40％和4％,其他方法的蛋白回收率约为22％.丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失多.结论 丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法.
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H.E.L.P.系统压力监测护理
肝素诱导体外低密度脂蛋白沉淀(H.E.L.P.)疗法是难治性高脂血症及由此并发的心脑血管病变的直接、有效的治疗手段之一.
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LC-MS/MS法测定血浆中米屈肼浓度及其人体药代动力学研究
目的:建立以高效液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测法测定人血浆中米屈肼浓度的方法,并研究其在健康人体内的药代动力学.方法:以对乙酰氨基酚为内标,血浆样品经甲醇蛋白沉淀后,采用DIK-MA Inspire C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱进行分离,流动相为甲醇-10 mmol·L-1醋酸铵水溶液(55∶45,v/v),质谱采用ESI源,正离子检测模式,以选择性反应监测方式进行测定,用于定量分析的离子反应分别为:m/z 147.2→58.3和m/z 152.0→110.0.结果:米屈肼血药浓度在0.01～20 μg· mL-1范围内线性关系良好(r=0.997)；日内、日间精密度均≤7.6％；提取回收率(低、中、高)分别为(83.6±5.1)％,(89.7±5.0)％和(89.3±3.6％)％；介质效应(低、中、高)分别为(95.3±4.5)％,(93.6±2.4)％和(98.0±2.0)％.结论:本方法适用于米屈肼的人体药代动力学研究.
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HPLC 法测定人血浆中吉非替尼的浓度
目的:建立一种简便、快速的高效液相色谱法测定人血浆中吉非替尼的浓度.方法:在100 μL 含待测药物的血浆中加入内标厄洛替尼和乙腈混匀沉淀蛋白.采用Agilent Eclipse XDB-C18 柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-10 mmol·L-1 醋酸铵溶液(70∶30),流速为1.0 mL·min-1,进样量为20 μL,柱温为室温,分析时间为12 min.结果:吉非替尼在89.38 ~ 8938 ng·mL-1 的浓度范围内线性关系良好(r > 0.999),日内与日间精密度(RSD)< 7.02%,准确度(RE)<±8.84%,所有稳定性考察结果均符合要求.结论:本文采用蛋白沉淀预处理方法以及高效液相色谱法测定人血浆中吉非替尼的浓度,能够满足临床试验中生物样品分析的需要.
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LC-MS/MS法定量测定人血浆中普罗布考的浓度
目的:建立一种特异、灵敏的液质联用方法定量测定人体血浆中普罗布考的浓度.方法:在25.0μL含待测药物的血浆中加入内标Pr-1312及萃取液混匀沉淀蛋白.采用X-Terra RP C8(2.1mm×50 mm,3.5 μm)色谱柱;柱温50℃;流动相为10mmol·L-1碳酸氢铵水溶液-乙腈(20:80);进样量5μL;流速0.2 mL·min-1.质谱检测方式为ESI-,MRM扫描,监测普罗布考m/z 515.3→236.1,内标Pr-1312m/z 382.2→161.0,分析时间3.3min.结果:普罗布考在10.0～5 000.0ng·mL-1的浓度范围内线性关系良好(r>0.99),日内与日间精密度(RSD)<10.2%,准确度(RE)<±15.0%.所有稳定性考察项目结果均符合要求.结论:本文采用蛋白沉淀样品前处理以及液质联用定量测定人体血浆中普罗布考的浓度方法,能够满足临床试验中生物样品分析的需要.
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采用正负离子切换模式的LC-ESI-MS/MS法测定大鼠灌胃给药后京尼平苷的血浆浓度
建立了一种快速、专属性强的液相色谱-串联质谱方法(LC-MS/MS)测定中药栀子的主要活性成分-京尼平苷的大鼠血药浓度去评价其临床前药动学特征.京尼平苷血浆样品经沉淀蛋白后,采用Diamonsil(R) C18色谱柱进行分析,采用流动相10 mM醋酸铵-甲醇(20∶80,v/v),流速0.6 mL/min.样品测定采用“Truncated”多反应检测模式,采用正离子m/z411→411测定京尼平苷,采用负离子m/z415→295测定内标葛根素.线性浓度范围为10.0-5000 ng/mL,低定量下限为10.0 ng/mL,样品提取回收率范围为84.8％-90.5％.该确证方法成功应用于大鼠灌胃(给药剂量200 mg/kg)给予京尼平苷后的药动学研究.
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蛋白沉淀结合HPLC测定人血浆中尼美舒利及相对生物利用度
目的 建立人血浆中尼美舒利的HPLC-UV测定法,研究两种尼美舒利胶囊的相对生物利用度.方法 采用COSMOSILC18柱(4.6mm×250 mm,5 μm),柱温为30℃,流动相为乙腈-0.015 mol·L-的磷酸二氢钾缓冲液(氢氧化钠溶液调pH至7.3)(79:21),流速为1.0 mL·min-1,检测波长为404 nm.18名健康志愿者采用自身对照随机交叉给药方案.分别单次口服不同厂家尼美舒利胶囊0.1 g,在不同时间点取血,血浆样品以新建立的HPLC-UV测定,比较两药主要药动学参数的差异和相对生物利用度.结果 尼美舒利与血浆中内源性杂质分离完全,尼美舒利在0.05～6.0 mg·L-1内与峰面积比线性良好,血浆中尼美舒利低定量质量浓度为0.05 mg·L-1.方法 回收率为96.8%～103.6%,日内精密度(RSD) ＜13.4%,日间精密度(RSD)＜9.9%.单剂量口服尼美舒利0.1 g后,两种制剂的ρmax＜为(5.7±1.5)和(5.4±1.4)mg·L-1;tmax为(3.4±0.5)和(3.4±0.5)h;AUC0→24为(41.4±12.5)和(40.3±15.7)mg·h·L-1;AUC0-∞为(42.9±13.2)和(41.5±10.8)mg·h·L-1;t1/2为(4.1±1.6)和(4.1±1.5)h.结论 该方法简单快速,灵敏度高,可用于尼美舒利的体内过程研究.方差分析表明,两制剂之间药动学参数无明显差异,试验制剂与参比制剂为生物等效制剂.
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睡不好觉易痴呆
老年痴呆症在病理上主要表现为脑细胞损伤，β淀粉样蛋白在大脑过多沉淀。美国科学家发现，睡眠不好会促进该蛋白沉淀，加剧大脑损伤。这一发现为通过改善睡眠缓解老年痴呆症症状带来了希望。
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6种不同沉淀试剂对万古霉素去甲万古霉素血药浓度测定影响的比较
本文通过研究文献中6种蛋白沉淀试剂对万古霉素、去甲万古霉素血药浓度测定影响,进而找到一种回收率高、快捷、准确的沉淀试剂应用于其血药浓度测定.1 材料与方法
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维持性血液透析患者β2-微球蛋白沉淀病
维持性血液透析患者β2-微球蛋白沉淀病是长期透析病人常见而严重的并发症。该症主要表现为关节和关节周围骨组织的淀粉样沉淀，导致骨和关节的致残性病变。由于这类淀粉样纤维中的主要成分是β2-微球蛋白(β2-mi-croglobulin，β2M)，故又被称为：β2M淀粉样变”或透析相关性淀粉样变)[1] 。(dialysis related amyloidosis, DRA)[1] 。该并发症的发生率随透析年限和病人年龄增长而增加。透析超过10年的病人65％有β2M淀粉样变的临床或病理学征象，超过15年100％发生该并发症。随着透析疗法的普及和透析技术的发展，我国透析病人中长期存活者逐年增加，注重β2M淀粉样变的防治已成为提高这类患者生活质量的重要环节。
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074 阿尔茨海默病中的氧化过程-Aβ与金属的相互作用
[英]/ Lynch T…∥Exp Gerontol.-2000,35(4).-445～451当体内有害的活性氧化物超过了机体自身防御机能,将导致易损的细胞成分( 如DNA、蛋白质和脂类等)受到损伤.大脑中高速率氧化代谢、低浓度抗氧化酶类(如过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶)、高浓度不饱和脂肪酸、大量铁铜储备等特点使其对氧化应激格外敏感.氧化应激与大脑皮质中β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积是阿尔茨海默病(AD)的特征. 然而矛盾的是,在组织的淀粉样蛋白沉淀和组织的氧化标志间似乎并没有空间上的联系.而且,我们近发现,AD新皮质中总的Aβ负荷与疾病的严重程度或淀粉样蛋白斑块的数量无关.事实上,主要以可溶性寡聚物形式存在的可溶性Aβ的浓度是AD脑中神经元降解严重程度的精确决定因素.
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阿尔茨海默病动物模型的研究进展
阿尔茨海默病（Alzheimer＇s disease，AD）是一种病因不明确、发病机制繁杂的慢性、进行性、原发性脑部神经退行性疾病，主要临床表现有记忆力、分析判断、认知功能障碍、情绪及行为异常等。主要的病理改变为细胞外淀粉样蛋白沉淀形成老年斑、神经元纤维缠结以及广泛神经元突触的缺失、炎症、氧化甚至是坏死［1］。主要发生在与记忆及学习功能相关的前脑基底、海马和大脑皮质等部位。 AD是痴呆中常见的一种，全球发病率高，大约占据了痴呆疾病中的2／3。目前，尚无有效的治疗方法，因此建立理想及可靠的 AD 动物模型对于探明AD的病因、病理过程以及寻找和筛选有效药物是非常必要的。现将AD的动物模型相关文献综述如下。
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溴甲酚绿法测定血清白蛋白时吐温80的浓度
血清蛋白测定方法很多,目前国内临床实验室应用较广者还是溴甲酚绿法.该法在显色剂中需要加入适量的非离子型表面活性剂,其作用在于降低空白读数,防止蛋白沉淀以及增强蛋白与染料的结合,从而提高试验的敏感性.目前国内文献所介绍的表面活性剂当以聚乙烯月桂醚为首选[1],但该试剂市场上经常缺货,购买困难而又不经济,因此我们实验室采用1～2 ml/L的吐温80来代替,效果较好.
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LC-MS/MS法测定人血浆中利奈唑胺的浓度
目的 采用高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法建立用于检测人血浆中利奈唑胺浓度的方法.方法 以CAPCELL PAK C18(100mm×2.0mm,TYPE:MGⅡ,5μm)为色谱分析柱,流动相为乙腈-水-甲酸(30∶70∶0.1),流速为0.40 mL·min-1.以利奈唑胺-d3为内标,采用蛋白沉淀法进行样本处理.采用多反应监测(MRM),三重四极杆串联质谱仪正离子模式分析利奈唑胺(m/z 338.2→296.2).本方法学考察了选择性、标准曲线、精密度及准确度、提取回收率及基质效应、残留、稀释可靠性和稳定性.结果 利奈唑胺在0.020 00～20.00 mg·L-1范围内线性良好,回归方程为y=0.376x+0.002 69(r=0.9992),低定量下限为0.02000 mg· L-1.低定量下限、低、中、高质控浓度的准确度在84.95％～106.2％,批内和批间精密度(RSD)均＜15％.经内标校正后,低、中、高质控浓度的提取回收率分别为104.8％、98.49％和105.3％;低、中、高浓度的基质效应分别为98.50％、89.92％和96.30％.且经验证,在实际生物样本检测过程中各步骤均有足够的稳定性.结论 本方法可简便、灵敏、高效测定人血浆中利奈唑胺的血药浓度,且选择性良好,人血浆内源性杂质不干扰利奈唑胺的测定,可以满足临床药物监测及药动学研究的需要.
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LC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平的浓度
目的 建立LC-MS/MS法测定人血浆中卡马西平的浓度.方法 以卡马西平-d2作为内标,血浆经甲醇直接蛋白沉淀后进样分析,色谱柱为CAPCELL PAK C18(100 mm×2.0 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1 mmol· L-1乙酸铵水溶液(含0.02％乙酸)(70∶30),流速0.3 mL· min-1.电喷雾离子源,正离子多反应监测扫描分析.卡马西平和内标卡马西平-d2的离子对分别为m/z 237.1→194.1和m/z 239.1→196.1.结果 卡马西平在质量浓度3.0779～1 231.2 μg·L-1内线性良好(r=0.999 3,n=10);批内和批间精密度良好(RSD均＜7.0％);提取回收率为98.94％ ～ 108.84％,RSD＜ 15％;基质效应为92.76％～ 98.54％,RSD＜5％.结论 本方法灵敏度、重复性以及专属性均较好,样品处理简便易行,可用于卡马西平的血药浓度测定及药动学研究.
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直接蛋白沉淀-超高效液相色谱法测定氟尿嘧啶血药浓度
建立直接蛋白沉淀-超高效液相色谱法测定血浆中微量氟尿嘧啶的方法.以6％高氯酸为沉淀剂,5-氯尿嘧啶为内标物,样品经涡旋振荡等处理后,高速离心获取上清液作为供试液.供试液测定采用Acquity HSS T3色谱柱,水-乙腈为流动相,流速为0.2 mL/min,进样量为5μL,柱温为20℃.方法的专属性、准确度、精密度、线性等指标经验证后完全符合定量测定要求,与传统的测定方法相比,可显著缩短进样分析时间、降低试剂成本.本方法已经被成功用于临床病人的血药浓度检测,具有良好的临床应用前景.
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液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度
目的:建立液相色谱串联质谱法测定人血清中匹多莫德的浓度.方法:血清样品用甲醇沉淀蛋白,内标为格列吡嗪,色谱柱为Lichrospher C18(4.6mm×150mm,5μm),柱温为30℃,流动相为甲醇-2.5 mmol/L NH4Ac(90∶10,V/V),流速为0.5 mL/min.质谱采用ESI离子源负离子检测,定量分析的离子对为:m/z 242.9/153.0(匹多莫德),m/z 444.0/169.9(内标格列吡嗪).结果:匹多莫德在0.1～10 mg/L范围内线性关系良好(r=0.9995),批内批间RSD均小于15％,提取回收率为85.52％～98.30％.结论:该方法快速,灵敏,准确,可用于匹多莫德的临床药动学研究.
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液相色谱串联质谱法测定人血清中齐多夫定的浓度
目的 建立液相色谱串联质谱法测定人血清中齐多夫定浓度.方法 血清样品用甲醇沉淀蛋白,内标为格列吡嗪,色谱柱为Lichrospher C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温为30℃,流动相为甲醇-10 mmol·L-1 NH4Ac(90:10,v/v),流速为0.5 ml·min-1.质谱采用ESI离子源负离子检测,定量分析的离子对为:m/z 266.1/223.1(齐多夫定),m/z 444.0/169.9(内标格列吡嗪).结果 齐多夫定在0.020～2.5 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 1),批内批间RSD均小于15%,提取回收率为74.38%~82.70%.结论 该方法快速,灵敏,准确,可用于齐多夫定的临床药动学研究.
