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免疫分型分化抗原与儿童B-ALL早期微小残留病的相关性研究
目的:探讨CCCG-ALL-2015方案治疗儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)中免疫分型分化抗原与临床特征及早期微小残留病(MRD)的相关性.方法:回顾性分析132例初诊B-ALL患儿临床资料,应用多参数流式细胞术行免疫分型检测;将诱导化疗后d19和/或46 MRD＞0.1％作为早期治疗效应截点将患儿分为2组;应用秩和、卡方检验行组间差异比较.结果:CD19 (100％)、CD22(99.3％)及cCD79a(97.9％)是诊断B-ALL的特异性指标,交叉髓系抗原主要为CD13和CD33;CD45-与CD45+在初诊WBC(Z=6.845,P=O.000)、危险度分级(x2=8.260,P=0.016)、泼尼松敏感试验(x2=18.420,P=0.000)间差异有统计学意义;CD10-与CD10+在年龄(Z=6.253,P=0.013)、危险度分级(x2=6.699,P=0.044)、早期MRD(x2=4.951,P=0.026)间差异有统计学意义;结论:在CCCG-ALL-2015方案中,CD10+与早期MRD有相关性,提示有良好预后,并削弱了CD20与交叉髓系抗原对预后的不良影响.
关键词： 急性B淋巴细胞白血病 免疫分型 分化抗原 微小残留病 儿童 -
巨幼细胞性贫血患者粒细胞分化抗原表达特征
本研究探讨巨幼细胞性贫血(megaloblastic anemia,MA)患者骨髓(bone marrow,BM)粒细胞的分化抗原(cell differentiation antigen,CD)变化.结合骨髓象、血象、血清叶酸、Vit B12含量、细胞遗传学以及有关分子生物学检查等资料,对13例MA患者骨髓细胞的流式细胞术检测结果进行回顾分析,总结MA患者骨髓粒细胞相关特异性分化抗原CD13、CD33、CD15的表达及粒细胞前向散射光(forward scattering light,FSC)、侧向散射光(side scatter light,ssc)的信号强度变化特点并与正常人群比较.结果表明:MA患者和正常人的粒细胞表面CD13、CD15、CD33的表达率分别为(44.53±16)％、(96.16±2.67)％、(80.81±14.71)％和(62.33±11.02)％、(99.53±0.46)％、(70.00±7.81)％,其中MA粒细胞CD13、CD15表达率下降(P＜0.01),CD33表达率增高(P＜0.01).MA患者和正常人的粒细胞CD13、CD15、CD33、SSC、FSC的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)分别是3.39±1.41、14.29±6.59、1.95±0.94、478.78±70.43、633.46±75.53和5.12±1.15、20.67±5.13、1.04±0.17、332.00±38.16、537.00±16.70,其中MA粒细胞CD13、CD15的MFI值下降(P＜0.01);而FSC、SSC和CD33的MFI值增高(P＜0.01和P＜0.05).结论:MA患者粒细胞不仅在形态学上表现为成熟障碍,而且其分化抗原的表达也呈现成熟障碍的特征,这对于临床上诊断MA具有一定的意义.
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编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探
目的 编码5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索.方法 构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11 cDNA文库,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆,作核苷酸序列分析,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析,Northern blot测5C5 mRNA转录本长度,用RT-PCR检测5C5 mRNA在不同细胞株的表达,观察单抗5C5-G1对3D5细胞增殖的影响.结果 从人活化B细胞株3D5的λgt11 cDNA文库筛选到长905bp的5C5-1 cDNA及754bp的5C5-2 cDNA.5C5-1 cDNA序列内有1个开放阅读框架(19～537bp),编码179个aa的蛋白质.此蛋白质内有一穿膜螺旋结构(94～114aa),其N端在胞内.5C5-2 cDNA从163到459为开放阅读框架,编码99个aa的蛋白质.从Northern blot见0.9kb左右和0.7kb左右2条杂交带.由RT-PCR见5C5 mRNA在3D5细胞强表达,在Daudi细胞表达次之,在Jurkat细胞表达弱.单抗5C5-G1有增强cpBCGF诱导3D5细胞增殖的作用.结论 长905bp的5C5-1 cDNA为1个全长cDNA.编码1个膜蛋白,可能参与3D5细胞的增殖反应.
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分化抗原gp42在人免疫细胞的表达
目的明确gp42蛋白为分化抗原,检测它在人免疫细胞的表达. 方法用gp42蛋白免疫小鼠,制备抗gp42蛋白的单抗.用反义技术制备gp42蛋白表达抑制的3D5细胞.用免疫荧光染色和Western印迹确定gp42单抗的特异性.用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp42蛋白为分化抗原.用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp42分化抗原在多种人免疫细胞的表达. 结果制备了抗gp42蛋白的特异性单抗.用gp42单抗作探针,从3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量(Mr)为42*!000的一条蛋白带,并在活3D5细胞见阳性免疫荧光染色.gp42分化抗原在人外周围血CD19+、CD14+、CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率分别为59.71%±11.36%、89.08%±4.87%、26.03%±9.75%、24.24%±15.29%和24.20%±15.72%,在人免疫细胞株的表达率分别为58.0%(Nalm6)、72.7%(3D5)、53.6%(BJAB)、61.0%(Daudi)、6.9%(SKW6)、6.3%(Jurkat)、5.8%(Peer)、21.3%(K562)和39.1%(U937). 结论 gp42蛋白为一个分化抗原,在人外周围血CD14+细胞的表达率高,其次为CD19+细胞,CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率较低.
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分化抗原5C5在人免疫细胞的表达
目的明确5C5蛋白为分化抗原,检测其在人免疫细胞的表达,以及它的信号传导作用. 方法用5C5蛋白免疫小鼠,制备抗5C5蛋白的单抗.用反义技术制备5C5蛋白表达抑制的3D5细胞.用免疫荧光染色和Western印迹确定5C5单抗的特异性.用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定其分化抗原的性质.用双色免疫荧光染色流式细胞术检测5C5分化抗原在多种人免疫细胞的表达.用Fura-3-AM试剂作探针,用激光共聚焦显微镜观察胞内Ca2+浓度的变化. 结果制备了抗5C5蛋白的特异性单抗.用5C5单抗作探针,从3D5细胞膜免疫沉淀到1条相对分子质量(Mr)为19×103的蛋白带,并在活3D5细胞见阳性免疫荧光染色.5C5分化抗原在人周围血CD19+、CD14+、CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率分别为(33.47±7.9)%、(86.13±6.7)%、(15.79±7.1)%、(18.11±12.77)%和(11.76±7.47)%,在人免疫细胞株的表达率分别为58.0% (Nalm6)、72.7% (3D5)、53.6% (BJAB)、61.0% (Daudi)、6.9% (SKW6)、6.3% (Jurkat)、5.8%(Peer)、21.3% (K562)和39.1% (U937).3D5细胞在5C5单抗刺激下,胞内Ca2+浓度逐渐增高,可达2倍左右,对照小鼠Ig则无此作用. 结论5C5蛋白为一个分化抗原,在人周围血CD14+细胞的表达率高,其次为CD19+细胞,CD4+、CD8+和CD56+细胞的表达率很低.5C5分化抗原有信号传导作用.
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Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原方法的建立与优化
目的 建立流式荧光原位杂交(flow fluorescence in situ hybridization,Flow-FISH)同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法.方法 培养HL60、Raji、Molt4等白血病细胞株,对Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法和条件进行摸索、优化,制定相关操作规程及分析策略,初步检测14例急性白血病患者化疗缓解前后端粒长度和分化抗原的变化.结果 选择新型染料Alexa Fluor(R) 647标记的抗体在端粒原位杂交前进行表面抗原免疫标记,然后应用BS~3交联剂保存抗原抗体信号,再进行端粒原位杂交及DNA复染,后应用流式细胞仪及适当的设门分析方法同时测定细胞内端粒长度及细胞表面分化抗原的表达.14例患者缓解后端粒延长,相关抗原表达率下降.结论 建立了较稳定可靠的Flow-FISH同时检测细胞端粒长度及表面分化抗原的实验方法,使单纯的流式细胞术(flow cytometry)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术得到有机结合,可望成为白血病,特别是不具特异性分子生物学标记的白血病患者相关研究的有效手段.
关键词： 流式荧光原位杂交(Flow-FISH) 端粒长度 分化抗原 白血病 -
非恶性肿瘤疾病中CA125含量变化的检测
自从1981年Bast等利用单克隆抗体OC125在卵巢癌细胞上发现癌抗原CAl25以来,检测血清中CA125一直被用作卵巢癌的辅助诊断指标.CA125是胎儿体腔的一种分化抗原,分布在间皮组织细胞表面.常规检验中发现在其他生殖道恶性肿瘤和肺癌患者血清CA125含量亦明显增加.许多非恶性疾病患者血清CA125也呈上升趋势.
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急性髓细胞白血病CD7、CD34、CD56、P170的表达对完全缓解率的影响
已有文献报道CD7、CD34、CD56、P170各自的表达与预后有关［1-5］。但此四种单抗联合表达对预后的影响报道较少。现将我院1995～1999年检测的213例初诊急性髓系白血病（AML）以上4种分化抗原的单表达和联合表达对完全缓解（CR）率的影响分析如下。
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乙型肝炎患者血清sHLA-I检测分析
人类白细胞抗原Ⅰ类分子(HLA-I分子)由两条多肽链构成,一条H链又称重链(43KD),另一条为L链又称为轻链.二者以非共价键的方式结合.HLA-I类分子广泛存在于有核细胞表面,在抗原的提呈及限制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别靶抗原的过程中起着关键作用.
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T细胞CD69活化与系统性红斑狼疮
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosis,SLE)是一种全身多脏器、多系统损伤的自身免疫性疾病,表现为多种自身抗体的产生和T淋巴细胞数量及功能异常[1,2].T淋巴细胞是免疫系统发挥调节作用的重要细胞之一,T细胞活化产生各种改变:有生化学的改变,如磷脂酰肌醇的代谢以及细胞内Ca2+升高;还可引发一些特殊基因的表达.T细胞活化后表达数个膜表面分子,分化抗原簇69(cluster of differentiation 69,CD69)是其中表达早的一个,刺激后1～2 h即可在T细胞表面发现CD69.CD69早期被称为活化诱导分子(activation inducer molecule,AIM),EA-1,Leu-23和MLR3,是由两个相同的单体经不同的糖基化后构成的细胞表面双体蛋白,分子量60 kDa,属于C型选择素受体家族[3].那么CD69在SLE的疾病进展中发挥那些作用,本文对国内外进展进行综述.
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食管癌患者血清中白细胞分化抗原的研究
目的:比较食管癌患者与正常人血清Sil -2R、TNF-a和CD4+、CD8+含量,探讨其变化与食管癌的关系及临床意义.方法:用ELISA法测定食管癌患者血清Sil -2R、TNF-a含量和采用流式细胞计数仪测定CD4+、CD8+含量并进行统计学分析.结果:食管癌患者血清Sil -2R、TNF-a、CD8+含量均高于对照组(P＜0.05),血清CD4+含量降低,CD4+/ CD8+比值明显低于正常对照组(P＜0.05),同时上述变化与临床分期有关,肿瘤切除后血清Sil -2R、TNF-a、CD8+含量均低于术前(P＜0.05),而CD4+/ CD8+比值高于术前.结论:食管癌患者存在细胞免疫功能紊乱,并与肿瘤的TNM分期相关.检测食管癌患者血清Sil -2R、TNF-a和CD4+、CD8+含量对评估患者的细胞免疫功能、判断肿瘤的病变程度及手术疗效等具有积极的临床意义.
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抗CD3基因工程抗体的临床应用
CD3是T淋巴细胞的一种分化抗原,由γ、δ、ε、P284条多肽链组成的多聚体[1,2],它与T细胞抗原受体(TCR)一起构成TCR-CD3复合物[3],在T细胞识别抗原及活化过程中起重要作用.80年初,美国Ortho公司运用淋巴细胞杂交瘤技术,研制出人淋巴细胞表面抗原的单克隆抗体(anti - CD3 Monoclonal antibody, anti - CD3McAb),由于其许多的独特免疫调节活性,特别是双向调控T淋巴细胞的能力,引起人们的极大兴趣.近年来有关CD3单克隆抗体在临床治疗方面的应用逐渐增多,也取得了一些引人注目的进展.
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脂肪干细胞体外分离培养鉴定及免疫学性质
背景:脂肪干细胞由于具备易于获取等特点,在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更加广阔的应用前景,并因此成为当今的研究热点之一.目的:观察脂肪干细胞的生长规律,鉴定其干细胞特性和免疫学性质.方法:自整形外科行抽脂的3名健康志愿者身上获取皮下脂肪组织及外周血,志愿者年龄20-30岁,均为女性.用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织获得脂肪干细胞,在体外原代培养及传代培养,观察其体外增殖能力等生物学特性;通过流式细胞术检测人脂肪干细胞分化群表面抗原和主要组织相容性抗原的表达.并将异体脂肪干细胞和淋巴细胞共培养,观察脂肪干细胞是否可以刺激后者增殖.结果与结论:所获脂肪干细胞具有很强的体外增殖能力,其生长曲线呈“S”形;第3代脂肪干细胞表面CD29、CD44、CD90以及主要组织相容性抗原Ⅰ呈阳性表达,CD31、CD45、CD34及主要组织相容性抗原Ⅱ呈阴性表达;未发现异体脂肪干细胞刺激淋巴细胞增殖.提示所获细胞确为脂肪干细胞,且具有较弱的排斥反应,有可能成为细胞治疗或组织工程的同种异体细胞来源.
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初诊急性淋巴细胞白血病患儿髓系抗原表达及临床意义
目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)髓系抗原表达与预后及其他临床特征的关系.方法流式细胞仪直接免疫荧光法检测上海儿童医学中心1999年1月至2002年12月收治的初诊152例ALL患儿髓系抗原表达.结果 152例患儿中髓系抗原表达阳性率18.4%,髓系抗原表达与性别、年龄、外周血白细胞数、FAB分型、免疫分型、染色体改变等无关.髓系抗原表达阳性与阴性ALL患儿的完全缓解(CR)率分别为96.2%、95.7%(P>0.05),复发率为16.7%、19.6%(P>0.05).结论在ALL患儿中髓系抗原的表达不影响其预后.
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表达EGFP的质粒和目的基因共转染用于检测目的基因对细胞周期的影响
在基因功能研究过程中,常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达(transient expression),以流式细胞仪检测细胞周期的变化,观察转基因对细胞增殖的影响.由于各种转基因方法的不同,转基因的效率也不同,往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因,没有转基因的细胞将影响检测的结果.如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测,是一个技术上的难点.一种直接的方法是采用目的基因表达蛋白的抗体直接标记表达目的基因的细胞,条件是该目的基因必须是细胞内特异的,且表达的蛋白位于细胞膜.另外一种方法就是采用双基因共转染方法,常用的共转染基因有B或T淋巴细胞的分化抗原,如:CD19、CD20等[1].
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基于抗体癌标志物研究
癌细胞的产生是由于各种致癌因素引起基因调控失常,导致细胞癌变,并表达在正常情况下没有或含量甚低的蛋白和酶,这些癌性蛋白可能就是癌抗原,其分为癌特异性抗原和癌相关抗原,后者又分为癌分化抗原和癌胚抗原.细胞癌变时,细胞表面发生许多变化,其中糖类(碳水化合物)抗原为明显.
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慢性HBV感染者外周血树突状细胞和T细胞体外应答功能的检测和分析
目的探讨慢性HBV感染者外周血树突状细胞(DC)和T细胞对激活剂体外应答的功能.方法用三色荧光染色法,通过流式细胞仪检测静息期和经激活剂激活后CD11c+DC和CD3+/CD4+/CD69+T细胞的百分率.结果与接种过乙型肝炎疫苗、血中抗HBs阳性健康者相比,感染者组CD11c+型DC及其表达CD80和CD40共刺激分子的阳性细胞百分率,以及经CD2/CD2R强激活剂刺激后CD69+T细胞百分率等三项指标均呈明显低下的状态.结论慢性HBV感染者血中DC和T细胞对激活剂的体外刺激,均表现不同程度的应答功能低下或缺陷,本研究涉及的三项细胞免疫检测方法有利于深入了解机体对病原体应答的能力,其结果有助于阐明发病机理,可为临床拟定慢性HBV感染者免疫辩证治疗措施提供科学的有针对性的依据.
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脐血CD34+细胞扩增中系特异性分化抗原的变化
目的:探讨CB CD34+细胞扩增的佳HGF组合及移植时机.方法:CB CD34+细胞培养于无血清培养液中,分别加入下列HGF,A组:对照组(无HGF);B组:SCF,IL-3,IL-6;C组:SCF,IL-3,IL-6,G-CSF,Epo;D组:SCF,IL-3,IL-6,TPO,Flt3-L;E组:SCF,IL-3,IL-6,TPO,Flt3-L,G-CSF,Epo.培养22 d.对不同培养时间的细胞进行NC数量及系特异性CD动态观察.结果:同对照组相比,扩增组NC和CD34+细胞均有不同程度的扩增.NC和CD34+细胞扩增高峰分别在第10天和第6天.E组的扩增效果佳.CD检测显示,各组CD34+及CD34+CD38.细胞的比例逐渐减少,但B,D 2组的CD34+CD38-细胞的比例在第6天有一过性回升,CD14+,CD13+,CD61+及Gly-A+细胞的比例则逐渐升高,D组CD34+及CD34+CD38.细胞的比例明显地高于E组(P＜0.01),CD3+和CD19+细胞的比例在扩增中呈下降趋势.结论:HSPC分化程度与HGF组合及培养时间有关.就细胞总数而言,E组HGF组合佳,但就HSPC含量来说,以D组为优.第1周扩增产物中HSPC含量较高,移植时间以扩增的第6～10天为宜.
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地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化的影响
目的 探讨地西他滨(DCA)和丙戊酸钠(VPA)联用对白血病细胞株HL60促凋亡和分化诱导的协同作用.方法 白血病细胞株HL-60分别与以下药物终浓度组作用48h:对照组,DCA单药A组(1.0 μmol·L-1),DCA单药B组(4.0 μmol·L-1),VPA单药组(2.0 mmol· L-1),联合用药A组(DCA 1.0 μmol·L-1+ VPA 2.0 mmol·L-1),联合用药B组(DCA4.0μmol·L-1+ VPA2.0 mmol· L-1).应用Annexin V-FTTC/PI标记法检测早期凋亡率,流式细胞术检测CD34、CD117平均荧光强度(MFI)以及CD11b、CD14表达率.结果联合用药A、B组的凋亡率高于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P＜0.01)；联合用药A、B组的CD117和CD34MFI低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P＜0.01)；联合用药A组的CD11b和CD14表达率以及联合用药B组的CD11b表达率均低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义(P＜0.01).结论白血病细胞株HL-60中VPA能显著增强DCA的促凋亡分化作用.
关键词： 分化抗原 凋亡 白血病细胞株HL-60 丙戊酸钠 地西他滨 -
正常人骨髓间充质干细胞体外对K562细胞生长及分化抗原表达的影响
目的 探索正常人骨髓间充质干细胞(MSCs)对K562细胞增殖及表面分化抗原表达的影响.方法 分别将K562细胞悬浮培养及与MSCs黏附培养,绘制K562细胞生长曲线;用流式细胞术检测K562细胞周期及表面分化抗原的表达.结果 与悬浮培养比较,与MSCs黏附培养的K562细胞增殖受抑,G0/G1期细胞增加(P<0.05),G2/M期细胞增加(P<0.05),而S期细胞减少(P<0.05);但悬浮培养与黏附培养在细胞分化抗原的表达上没有明显的影响.结论 K562细胞与MSCs黏附培养可以抑制K562细胞的生长,但对其分化没有明显的影响.
