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应用硫酸鱼精蛋白处理蔗糖密度梯度超速离心高度纯化流行性乙型脑炎灭活疫苗(非洲绿猴肾细胞)
目的 通过离心试验,制备出一种高纯度的流行性乙型脑炎(乙脑)灭活纯化疫苗(非洲绿猴肾细胞)[Purified Inactivated Japanese Encephalitis Vaccine (Vero Cell),JEV].方法 生物反应器培养的Vero细胞乙脑病毒液,超滤浓缩、甲醛灭活后,应用硫酸鱼精蛋白处理,再经过高速离心,蔗糖密度梯度超速离心纯化,超滤除糖,配制成JEV(Vero细胞).结果 经检测,疫苗中Vero细胞脱氧核糖核酸残留量≤10pg(皮克,Picogram)/剂,蛋白含量≤1μg(微克)/剂,宿主蛋白残留量≤30ng(纳克,Nanogram)/ml,并获得较高的抗原回收率.结论 经过优化硫酸鱼精蛋白处理和蔗糖密度梯度超速离心纯化,制得了高纯度的JEV(Vero细胞).
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硫酸鱼精蛋白联合氯化钾构造间质性膀胱炎动物模型的研究
组未见肥大细胞,仅见极少单核炎症细胞浸润.对照组3个时间段组中单核炎症细胞数分别为(7.00±0.71)、(8.00±0.71)、(8.20±1.24)个/视野,组间比较差异无统计学意义(P=0.625).③实验组和对照组中单核炎症细胞数和肥大细胞数比较差异均有统计学意义(P=0.008,P=0.000). 结论 10 mg/ml硫酸鱼精蛋白加500 mmol/L氯化钾经尿道连续膀胱灌注构造间质性膀胱炎动物模型的方法可靠,可根据实验目的 选择灌注时间.
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硫酸R15对肝素的拮抗作用
目的 研究由15个精氨酸组成的小肽硫酸R15对未分级肝素的拮抗作用.方法 通过抗凝血因子Ⅱ试验对比硫酸鱼精蛋白和硫酸R15体外中和未分级肝素的能力;在肝素化的Wistar大鼠中评价硫酸R15体内中和情况.结果 抗凝血因子Ⅱ试验结果表明,体外试验中硫酸R15有更强的肝素中和能力;在体内试验中硫酸R15和硫酸鱼精蛋白中和未分级肝素的能力相似,无统计学差异.结论 硫酸R15与硫酸鱼精蛋白相比有良好的药效,是一种潜在的新型肝素拮抗剂.
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硫酸鱼精蛋白注射液过敏致死1例
1例26 a女性患者,因先天性室间隔缺损、二尖瓣关闭不全行室间隔缺损修补术,术中给予硫酸鱼精蛋白注射液220mg中和肝素,10 min后患者出现肺动脉痉挛、右心系统膨胀、血压下降、心率减慢、继之心跳停止.立即停药进行心内按压,并给予皮质激素、血管活性药物等治疗,再次紧急体外循环辅助,经9 h体外循环支持,患者心功能仍不能恢复,后死亡.
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不同来源硫酸鱼精蛋白原料药的质量研究
目的 研究不同鱼种来源的硫酸鱼精蛋白原料药的质量情况.方法 对目前在我国上市的硫酸鱼精蛋白原料的鱼种来源采用HPLC进行鉴别和含量测定,对氨基酸组分进行考察,采用电感耦合等离子质谱法检测重金属含量,并考察了不同鱼种来源硫酸鱼精蛋白原料中和肝素的能力.结果 目前我国上市的硫酸鱼精蛋白原料主要为鲑鱼和鲱鱼来源.结论 本实验为建立硫酸鱼精蛋白的HPLC鉴别及含量方法,完善其质量标准提供了理论依据.
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补肾活血泄浊汤对肾小球上皮细胞蛋白质和硫酸肝素蛋白多糖合成的影响
探讨脂多糖(LPS)、硫酸鱼精蛋白及补肾活血泄浊汤对体外培养大鼠肾小球上皮细胞(GEC)蛋白质和硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)合成的影响.应用 LPS、硫酸鱼精蛋白作为刺激因子,观察其对GEC蛋白质和HSPG合成的影响;并采用血清药理学方法,提取动物的含药血清作用于上述受刺激的上皮细胞,观察补肾活血泄浊汤对上皮细胞蛋白质和HSPG合成的影响.LPS和硫酸鱼精蛋白具有抑制GEC合成蛋白质及含硫化合物的作用;而补肾活血泄浊汤可显著拮抗上述因子的抑制细胞蛋白质和HSPG合成的作用.肾小球上皮细胞是补肾活血泄浊汤发挥治疗作用的重要靶细胞,这可能是该方防治以蛋白尿为主要临床表现的肾小球疾病的机制之一.
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硫酸鱼精蛋白注射液细菌内毒素检查研究
目的:对硫酸鱼精蛋白注射液进行细菌内毒素检查的可行性研究,为该药品质量标准中制定内毒素检查项提供参考.方法:采用凝胶法分别对两个不同生产厂家的各3批样品进行干扰试验.结果:硫酸鱼精蛋白注射液(10 mg/ml)在稀释240倍时无干扰作用,可用细菌内毒素检查法进行检查.结论:硫酸鱼精蛋白注射液细菌内毒素检查是可行的.
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GPS试验检测血型交配中的不完全抗体
长期沿用的盐水递质配血法,不能检出不配合的不完全抗体.为了保证输血安全,对每例配血者均应增加不完全抗体的检测.原来采用的抗人球蛋白法(coombs)试验、蛋白酶法等因试剂来源困难,操作繁锁费时等原因未能普及.采用手工凝聚胺试验(Mannual Polybrenetest MPT)测定不完全抗体,有简便、快速、敏感、特异[1]等优点,但成本较高.赵进生、旷睫萍介绍的不完全抗体快速促凝剂免去了凝聚胺,选择了易购的硫酸鱼精蛋白和右旋糖酐为主要原料组成的促凝剂和枸橼酸钠作中和剂代替凝聚胺试验.笔者参考有关资料对有关试剂作进一步简化,试用结果满意,特作介绍.
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硫酸鱼精蛋白引起过敏反应1例报告
硫酸鱼精蛋白是临床常用的促凝止血药,因鱼精蛋白而致过敏者比较罕见,值得临床重视.
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硫酸鱼精蛋白过敏反应的治疗
硫酸鱼精蛋白是从大马哈等鱼类新鲜成熟精子中提取的一种碱性蛋白质的硫酸盐,为白色或类白色粉末,无臭,有吸湿性,易溶于水,不溶于乙醇、氯仿或乙醚中. 用于肝素过量引起的出血症,以及肺咯血等某些出血症.心血管大手术或血液透析时,应用大量肝素抗凝可按需要用本品中和.
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体外肝素对血浆PT、APTT影响因素的研究及临床应用
目的:探讨体外不同浓度肝素及不同浓度硫酸鱼精蛋白对血浆凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)的影响,了解该实验对PT、APTT真实结果及正确分析和判断.方法:采用0.1 U/mL～2.0 U/mL肝素,1.0 μg/mL～20 μg/ mL硫酸鱼精蛋白,测定240份随机标本分成的各组血浆标本的PT、APTT及加入上述试剂后的PT、APTT时间. 结果:肝素活性在2.0 U/mL以下时对PT无明显影响,硫酸鱼精蛋白在10 μg/mL以下时对PT、APTT亦无明显影响.肝素在0.2 U/mL时对APTT影响非常明显,两者呈相关(r=0.98,P<0.05). 讨论:临床上可采用回归方程△APTT=1.22+30.41A(A为肝素活性U/mL)回归方法验证,也可以用加硫酸鱼精蛋白中和后复测APTT的方法来纠正肝素对APTT的影响,对DIC的动态监测及治疗具有重要意义.
关键词： 肝素活性 硫酸鱼精蛋白 凝血酶原时间 活化的部分凝血活酶时间 -
不同比例的硫酸鱼精蛋白与肝素钠在高危出血倾向患者血液净化中的应用效果
目的 探讨不同比例硫酸鱼精蛋白与肝素钠在高危出血倾向患者连续性血液净化与维持性血液透析中的抗凝效果及安全性.方法 2011年1月至2013年7月,便利抽样法选取在第二军医大学长征医院南京分院血液净化中心治疗的具高危出血倾向的危重病患者18例为研究对象.按人院先后将其分为对照组和观察组,每组9例.观察组患者采用硫酸鱼精蛋白与肝素钠1∶1.2的比例进行治疗,而对照组患者采用1∶1的比例进行治疗.观察两组患者的抗凝效果、出血情况、治疗前后患者凝血参数的变化及患者的预后.结果 在连续性血液净化治疗中和普通透析治疗中,两组患者的凝血级别及凝血率的差异均无统计学意义(均P＞0.05).两组患者治疗前后,APTT的差异均有统计学意义(P＜0.01),观察组患者治疗后APTT低于对照组患者,差异有统计学意义(P＜0.05).对照组有1例肠癌晚期患者治疗期间排出柏油样大便,其他患者在治疗期间均未发生出血情况.除对照组有1例肠癌晚期患者离世外,其余患者经治疗后均恢复良好.结论 对伴高危出血倾向的危重病患者行连续性血液净化及血液透析治疗时,体外局部肝素钠抗凝1∶1.2的效果较好,能满足患者透析的抗凝要求,不增加严重出血的危险性.
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硫酸鱼精蛋白联合脂多糖构建间质性膀胱炎动物模型的研究
目的 探讨利用硫酸鱼精蛋白联合脂多糖构建间质性膀胱炎动物模型的可行性.方法 将30只雌性SD大鼠分为试验组、环磷酰胺组和对照组,每组各10只.试验组采用10 mg/mL硫酸鱼精蛋白加750 μg/mL脂多糖经尿道膀胱灌注；环磷酰胺组给予100 mg/kg的环磷酰胺腹腔内注射；对照组采用磷酸缓冲液膀胱灌注.采用苏木精-伊红染色计数膀胱组织单核炎症细胞,特殊染色计数脱颗粒的肥大细胞；测定各组大鼠尿液中组胺的质量浓度.结果 试验组膀胱组织可见大量单核炎症细胞以及较多脱颗粒状态的肥大细胞浸润；环磷酰胺组可见较多单核炎症细胞,但只有少量脱颗粒状态的肥大细胞；对照组只有少量的炎症细胞和未脱颗粒的肥大细胞.试验组和环磷酰胺组每个视野单核炎症细胞计数分别为76.5±9.8和69.3±6.9,均明显高于对照组的16.5 ±9.8(P ＜0.05)；试验组、环磷酰胺组和对照组每个视野脱颗粒肥大细胞计数分别为8.4±3.1、1.2±1.6和0.7±0.3,试验组明显高于其他两组(P＜0.05)；试验组、环磷酰胺组和对照组大鼠尿液中组胺的质量浓度分别为(58.5±10.3)、(11.9±2.4)和(8.9±3.2)pg/mL,试验组明显高于其他两组(P＜0.05).结论 10 mg/mL硫酸鱼精蛋白加750 μg/mL脂多糖经尿道膀胱灌注构建的间质性膀胱炎动物模型符合间质性膀胱炎的病理生理表现,建模方法简单、可靠.
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RP-HPLC法测定精蛋白胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白的含量
建立RP HPLC测定精蛋白胰岛素注射液中硫酸鱼精蛋白含量的方法.采用C-18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A为0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调至pH1.8),流动相B为乙腈-0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调至pH1.8)(35:65),采用梯度洗脱,柱温为55℃,总流速为1.0 ml/mim检测波长214 nm,进样量为100μl.结果:硫酸鱼精蛋白在0.101～1.013 mg/ml呈线性关系,回归方程为A=4.534×105+3.839×107C,r=0.999 8;平均回收率为101.01%,RSD%为1.05(n=9).此法快速、简便、准确,可测定各种胰岛素注射剂中硫酸鱼精蛋白的含量.
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两种硫酸鱼精蛋白效价测定方法的比较与分析
目的：分析并比较两种硫酸鱼精蛋白的效价测定方法。方法分别采用肝素-结合力滴定法和生物测定法对5批硫酸鱼精蛋白进行效价测定，滴定法依据国外药典，生物测定法依据《中国药典》施行。结果肝素结合力-滴定法的滴定终点吸光度值在中（0.10 mg／mL）、高浓度（0.15 mg／mL）相对稳定，效价数据的相对标准偏差（RSD）小于5％。三种待测液浓度与肝素标准品滴加量呈良好的线性关系，相关系数R2为1.000。将滴定法与生物测定法效价结果进行比较，两种方法的相关性显著（ P＝0.013），误差水平一致（P＞0.05），但滴定法测得的效价数值略低于生物测定法结果（P＝0.045）。结论肝素结合力-滴定法的方法可行、操作简便，国内应积极推广。
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艾司西酞普兰致血小板减少一例
药源性血小板减少症是指药物使血小板计数低于正常范围(＜ 100×109/L)[1].常见引起血小板减少的药物有:肝素、奎宁、奎尼丁、阿昔单抗、金盐、利奈唑胺、利福平、磺胺类、卡马西平、丙戊酸、西咪替丁、对乙酰氨基酚、氯噻嗪、氯霉素、氟达拉滨、奥沙利铂、环孢素、利妥昔单抗、硫酸鱼精蛋白等[2].文献报道,在抗抑郁药物中,可引起血小板减少症的药物有:三环类抗抑郁药(TCA)、单胺氧化酶抑制剂(MAOI)、选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)中的舍曲林、西酞普兰、α2-肾上腺素受体拮抗剂和5-羟色胺1,5-羟色胺2受体拮抗剂米安色林以及去甲肾上腺素和特异性5-羟色胺抗抑郁药(NaSSA)米氮平[3,4].而由艾司西酞普兰引起者非常罕见,现将我们所遇一例报道如下.
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硫化氢在硫酸鱼精蛋白诱导大鼠慢性膀胱炎中的作用
目的：探讨硫化氢（H2S）在硫酸鱼精蛋白（PS）诱导的大鼠慢性膀胱炎中的作用。方法：36只雌性 SD大鼠随机分为3组（每组12只），采用膀胱灌注 PS 构建慢性膀胱炎症大鼠模型，VonFrey 刷检测泌尿生殖区疼痛变化，尿流动力学检测膀胱功能。亚甲基蓝分光光度法测定膀胱中 H2S 含量，实时定量聚合酶链反应（RT－PCR）筛选H2S 各催化酶、P物质等mRNA 表达，Western blot 检测胱硫醚－γ－裂解酶（CSE）蛋白表达。结果：模型组大鼠膀胱中，其H2S 含量明显高于对照组（P ＜0．05）。大鼠膀胱中CSE的mRNA及蛋白水平表达升高（均P ＜0．05）。与对照组比较，模型组大鼠排尿间歇缩短，膀胱容量降低。而CSE抑制剂PAG 干预后其排尿间歇时间延长（390．79±41．62 vs 160．18±40．10， P ＜0．05），膀胱容量增加（0．99±0．11 vs 0．47±0．13， P ＜0．05）。此外，与模型组比较，PAG 组疼痛评分明显下降（P ＜0．05），P物质的mRNA 表达也下调（P ＜0．05）。结论：间质性膀胱炎时，膀胱组织中由 CSE 催化产生的内源性 H2S 水平明显增加，以 H2S 为靶点，抑制系统和组织中 H2S 生成可能可以改善IC／BPS 的尿频及疼痛情况。
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研制3P试验阳性血浆在实验教学中的应用
诊断弥散性血管内凝血(DIC)的检测项目血浆硫酸鱼精蛋白副凝固时间(3P)试验是检验专业血液学检验实验课必做的项目[1].由于得不到这样患者的血液标本,以往只能用正常人的血液标本进行试验操作,试验过程虽然做了,但是看不到阳性结果的出现,对学习阳性结果判定这一环节有了很大的缺憾.根据DIC的发病机理,研制者创造性的用正常人血浆在其中加入化学、生物试剂,使血浆在试管中发生DIC样的变化,产生出模拟DIC患者血浆.应用此血浆进行实验教学,使3P试验呈现阳性结果,提高了教学效果.
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乙酰半胱氨酸对硫酸鱼精蛋白诱导的大鼠膀胱炎的作用
目的 探讨乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对硫酸鱼精蛋白(protamine sulfate,PS)诱导的大鼠膀胱炎的治疗作用及可能机制.方法 雌性SD大鼠64只,按随机数字表法分为生理盐水灌注组(NS组)、硫酸鱼精蛋白灌注组(PS组)、NS+PS组、NAC +PS组,每组16只.NS组0.5 mL生理盐水灌入膀胱并在膀胱内保留30 min.PS组采用0.5 mL、30 mg/mL PS灌注大鼠膀胱,方法同NS组.NS +PS组和NAC +PS组大鼠在膀胱灌注PS前2h,经腹腔注射0.5 mL NS或0.5 mL 300 mg/kg NAC溶液,灌注方法同NS组.各组大鼠每周处理3次,持续1个月.病理染色及膀胱湿质量检测分析大鼠膀胱炎症、水肿及肥大细胞浸润改变;尿动力学检测大鼠尿动力各项指标;Western blot法检测大鼠膀胱炎症因子IL-6和TNF-α表达.结果 NAC治疗组大鼠膀胱尿动力指标[收缩间歇(330.02±69.49)s]、膀胱黏膜损伤指数(1.37±0.91)及肥大细胞浸润计数(1.93±1.34)均优于PS灌注组尿动力指标[收缩间歇(161.32±58.17)s]、膀胱黏膜损伤指数(2.75±0.46)及肥大细胞浸润计数(3.40±2.19),Western blot法检测显示NAC治疗组较PS灌注组炎症因子IL-6和TNF-α表达也降低(P＜0.01).结论 NAC可显著改善PS诱导的大鼠膀胱炎,其机制可能是降低PS诱导的膀胱炎TNF-α和IL-6的表达,以及减少肥大细胞浸润.
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体外肝素对血浆凝固时间影响的观察及临床应用
体外分别观察了0.1～2.0 u/ml肝素及1.0～20.0 mg/ml、硫酸鱼精蛋白对凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)的影响.结果表明肝素活性在2.0 u/ml以下时对PT无明显影响,硫酸鱼精蛋白在10 ug/ml以下时对PT、APTT亦无明显影响.而肝素在0.2 u/ml时对APTT的影响非常明显,两者呈正相关(r＝0.98,P ＜0.05).临床可采用回归方程回归方法验证,也可以用加硫酸鱼精蛋白中和后复测APTT 的方法来纠正肝素对APTT的影响.此外,回归方程ΔAPTT＝1.21+30.43A(A为肝素活性u/m l)亦可作为临床肝素治疗个体化的参照.
