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肾络通对阿霉素肾病大鼠细胞表型转化的影响
目的:肾络通对阿霉素诱导的肾病大鼠细胞表型转化的影响.方法:单侧肾切除加重复阿霉素尾静脉注射制作肾病模型,以α-SMA、FN、LN等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析和流式细胞检测等方法,进行阳性表达细胞定位和半定量及蛋白表达定量分析.结果:阿霉素肾病模型组大鼠肾小管间质有α-SMA明显表达,阳性细胞率和蛋白表达定量分析明显高于假手术组,且伴有FN、LN在肾小管间质和肾小球的大量沉积,肾络通组各项指标较模型组为低.结论:肾络通能抑制肾小管上皮细胞表型转化,减少FN、LN等细胞外基质的沉积.
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柴苓汤对UUO模型大鼠肾小管间质α-SMA、MCP-1的影响研究
目的:观察柴苓汤对单侧榆尿管结扎(UUO)大鼠的肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达水平的影响,探讨其对肾小管间质纤维化的作用机制.方法:实验采用UUO大鼠肾病模型并用柴苓汤治疗.运用免疫组化法检测各组肾组织α-SMA和MCP-1的表达.结果:模型组大鼠肾小管结构破坏,肾间质增宽,胶原纤维沉积增多,肾小管间质α-SMA、MCP-1的表达明显升高,而柴苓汤组各项指标较模型组显著为低.结论:柴苓汤能抑制MCP-1的生成,限制炎症反应的放大过程;抑制肾小管上皮细胞表型转化,从而减缓肾小管间质纤维化的进程.
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CTGF基因沉默对肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响
近期研究表明,结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)参与了肺成纤维细胞表型转化,与肺纤维化的形成关系密切.因此,本研究应用siRNA表达载体介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术,将CTGF-siRNA表达质粒稳定转染人肺成纤维细胞MRC-5,并通过定量PCR、Western-blot、细胞生长曲线及群体倍增时间、免疫细胞化学测定等方法检测基因表达、细胞增殖及表型转化等变化.结果显示,与非特异对照Scrambled-siRNA质粒稳定转染的MRC-5细胞或未转染MRC-5细胞相比,CTGF-siRNA表达质粒稳定转染的MRC-5细胞的CTGF表达明显降低;细胞增殖能力明显降低,群体倍增时间延长,由24.63或25.05 h延长至31.14 h(P＜0.05);TGFβ1刺激24 h后,细胞内α-平滑肌肌动蛋白α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达均明显下降.本研究提示,通过RNA干扰使CTGF基因沉默后,在体外可明显抑制MRC-5肺成纤维细胞的增殖、表型转化及细胞外基质的合成,可为基因治疗肺纤维化提供实验依据.
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AM12质粒对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的 观察AM12质粒(含HBV3.2kb全基因组)对体外培养的人近端肾小管上皮细胞表型转化的作用.方法 以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为对象,以AM12质粒转染HK-2细胞为转染组,以正常HK-2细胞作为阴性对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度.用免疫组织化学检测角蛋白(CK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 转染组TGF-β1为(283.85±61.12)pg/ml,高于对照组(210.28±47.21ps/ml)(P<0.05),肾小管上皮细胞免疫组化染色显示CK减弱,α-SMA增强.结论 HBV-DNA质粒转染人肾小管上皮细胞可引起TGF-β1分泌增加,并导致肾小管上皮细胞转分化.
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HBV-DNA阳性血清对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的研究HBV-DNA阳性血清对肾小管上皮细胞表型转化的作用.方法以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为对象,分别用健康人血清、HBV-DNA阳性血清刺激,用免疫组织化学检测角蛋白(CK)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的蛋白表达.结果在HBV-DNA阳性血清直接作用下,肾小管上皮细胞免疫组化染色显示CK弱阳性,vimentin、α-SMA和Ⅰ型胶原增强.结论在HBV-DNA阳性血清直接作用下,体外培养的正常人近端肾小管上皮细胞系HK-2可发生上皮向间叶的表型转化.
关键词： 肾小管上皮细胞 HBV-DNA阳性血清 表型转化 -
血管平滑肌细胞表型转化及相关信号转导机制探讨
血管平滑肌细胞增殖是血管成形术后再狭窄、动脉粥样硬化斑块形成的病理基础.血管平滑肌细胞增殖能力与其表型转化密切相关.对从血管平滑肌细胞表型转化的主要特征、标志物、信号转导机制进行了探讨.
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血管外膜成纤维细胞在冠脉损伤后重构及再狭窄中的作用
经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)已广泛地应用于冠心病的治疗,但术后3～6个月内的高再狭窄率(30%～50%)严重影响了其临床的有效应用.关于再狭窄的发病机制仍有许多不明之处,目前认为再狭窄可能是新生内膜增生和不利的血管重构共同作用的结果[1].血管外膜过去被认为是无活性的,近来研究发现冠脉损伤后伴随有外膜的激活[2,3].血管外膜成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)具有增殖、迁移、表型转化及合成大量细胞外基质的能力,因而在促冠脉损伤后重构及再狭窄的发生中发挥重要作用.
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糖尿病肾病大鼠足细胞转分化特征研究
目的 观察糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠足细胞上皮细胞及间充质细胞标志物的变化,揭示DN大鼠足细胞转分化特征.方法 分别应用免疫组织化学、实时定量PCR检测DN大鼠足细胞WT1、P-Cadherin、Desmin的阳性面积比、积分光密度及mRNA的表达,并与正常大鼠作对照;同时将DN组大鼠24h尿蛋白定量与上述各指标积分光密度进行相关性分析.结果 与正常大鼠比较,DN组大鼠WT1下降,但差异无统计学意义(P>0.05);P-Cadherin降低,差异有统计学意义(P<0.05);而Desmin增高,差异有统计学意义(P<0.05);24h尿蛋白定量与WT1积分光密度无相关性(r=-0.337,P>0.05),与P-Cadherin积分光密度呈负相关(r=-0.600,P<0.05),与Desmin积分光密度呈正相关(r=0.750,P<0.01).结论 DN大鼠早期(12周)足细胞数目尚未减少时,可能已经发生了上皮-间充质细胞转分化,而尿蛋白的发生与此有一定的相关性.
关键词： 糖尿病肾病 足细胞 表型转化 上皮-间充质细胞转分化 -
脂质沉积刺激血管平滑肌细胞表型转化的研究进展
据《中国心血管病报告2016》统计数据显示心脑血管病死亡占城乡居民总死亡原因的首位,心脑血管病死亡率农村为298.42/10万,城市为264.84/10万[1].动脉粥样硬化是心脑血管疾病发生发展的常见,也是重要的病因.动脉粥样硬化是一个复杂的,多因素参与的慢性炎症过程.
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乙醛促进人肾小管上皮细胞表型变化并增加细胞α平滑肌肌动蛋白的表达
机体摄人大量的酒精后,约90％在肝脏乙醇脱氢酶的作用下转化为乙醛,并进入血液循环.肾脏是仅次于肝脏的酒精排泄器官.酒精及其代谢产物乙醛通过肾脏排泄到尿中,尿中乙醛的含量高于肝脏及血液中的含量[1].长期过量饮酒可导致酒精性肾损害[2],酒精性肾损伤以肾小管间质病变为主[3],但其作用机制目前尚不清楚.肾小管上皮细胞发生表型转化是发生肾间质纤维化的重要机制之一[4].
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胆固醇诱导人血管平滑肌细胞表型转化
目的 观察胆固醇对人血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响.方法 体外培养人血管平滑肌细胞株,分别用(12.5、25.0、50.0)mg/L浓度的胆固醇作用细胞48 h;50.0 mg/L的胆固醇分别作用细胞24、48、72 h.采用实时定量PCR检测VSMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及平滑肌22α(SM22α)mRNA的表达;采用Western blot法检测胆固醇对VSMC中α-SMA、SM22α及单核细胞趋化蛋白-1诱导蛋白(MCPIP)表达的影响;CCK-8法检测VSMC增殖.结果 (12.5、25.0、50.0) mg/L胆固醇作用VSMC 48 h较对照组相比,α-SMA及SM22α mRNA水平及蛋白水平表达均降低(P＜0.05),50.0 mg/L胆固醇作用后表达水平低,存在剂量依赖效应;用50.0 mg/L胆固醇分别作用VSMC 48、72 h后,α-SMA及SM22α mRNA及蛋白表达与对照组相比均降低(P＜0.05).与对照组相比,胆固醇作用均明显促进VSMC增殖(P＜0.05).50.0 mg/L胆固醇作用VSMC48 h可诱导MCPIP蛋白表达增加.结论 胆固醇作用VSMC后可降低收缩型标志蛋白α-SMA及SM22α的表达、促进VSMC增殖,提示胆固醇可诱导VSMC表型转化.
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HBV基因转染对肾小管上皮细胞凋亡及表型转化的影响
乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染人体后不仅引起肝脏功能和结构的改变,还可引起肝外多种脏器损伤,其中乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis Bvirus associated glomerulonephritis,HBV-GN)受人们关注.但其发病机制尚不清楚.研究发现肾小管间质纤维化在肾脏病变中有重要意义[1].我们前期研究发现慢性乙型肝炎患者TGF-β1水平升高,HBV-DNA阳性血清可导致肾小管HK-2上皮细胞凋亡及表型转化[2-3].因此用含3.2 kb HBV全基因组的AM12质粒转染HK-2,进一步探讨HBV在HBV-GN肾损伤中的作用及机制.
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粉防己碱对内膜损伤后平滑肌细胞表型转化和MKP-1表达的影响
目的研究粉防己碱(tetrandrine,Tet)在防治血管内膜损伤后再狭窄(RS)与血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达之间的关系.方法采用HE染色检测假损伤组(S组)、损伤组(Ⅰ组)和损伤+Tet治疗组(Tet组)28 d血管形态学改变;分别使用免疫组化和RT-PCR技术检测Ⅰ组和Tet组7、14、28 d增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)和MKP-1表达的变化.结果①28 d血管形态观察,S组血管壁各层结构完整;Ⅰ组新生内膜(neointima,NI)面积显著增加,管腔面积(LA)显著缩小;Tet组NI增殖较Ⅰ组明显减轻,LA增加.②损伤后7 d,Tet组与Ⅰ组之间血管壁SMα-actin、PCNA和MKP-1表达变化无显著差异,NI增殖程度亦基本相同.Tet组14 d和28 d血管壁中PCNA表达均低于Ⅰ组,而MKP-1表达均高于Ⅰ组;14d SMα-actin表达略高于Ⅰ组,28 d两组间无差异.结论Tet可不同程度地拮抗内膜损伤后VSMC表型转化及其调节,继而减缓NI增殖.
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动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化及MKP-1表达的变化
目的:观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)表型转化和丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(mitogen-activated protein kinase phosphatase-1,MKP-1)表达的动态变化.方法:分别用HE染色、免疫组化和逆转录-聚合酶链(RT-PCR)方法检测假损伤组(S组)和损伤后不同时间点血管形态学改变及血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)和MKP-1 mRNA及蛋白表达的变化.结果:①损伤后1 d中膜腔侧、3 d管腔内表面可见增殖的VSMC,5～7 d新生内膜(neointima,NI)形成并逐渐增厚,14～35 d NI进行性增厚;各组中膜均有增殖的VSMC向腔面集聚.②S组中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性;中膜于损伤后1～14d,NI于5～14 d PCNA阳性细胞率逐渐增多,14 d达高峰,28 d后开始逐渐减少,但NI阳性率多于中膜.③S组中膜SMα-actin表达为阳性,内皮为阴性;中膜阳性面积于损伤后1 d开始减少,3 d为明显,5 d后开始逐渐增加,NI阳性表达弱于中膜.④S组中膜MKP-1呈弱阳性或阳性表达,损伤后1d即开始下降,5～7 d达低,14 d稍有回升,至35 d仍未回到假损伤组水平;NI阳性表达弱于中膜.MKP-1表达变化与PCNA表达变化呈负相关.结论:VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,MKP-1参与了损伤后VSMC表型转化的调节.
关键词： 内膜损伤 血管平滑肌细胞 表型转化 丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1 -
血管平滑肌细胞表型转化与血管钙化
血管钙化是一种由细胞所介导、主动的生物矿化过程,可增加心血管疾病的患病率和死亡率,并严重危害人类的健康和生活.越来越多的研究证实血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)及表型转化(phenotypic switching)在血管钙化的发生发展中具有重要作用.本文将阐述VSMC的表型转化,向骨/软骨化表型转化不同时期的标志蛋白分子,并探讨其表型转化的调控因素,进而深入认识血管钙化的发病过程.
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IgA肾病肾组织AT1、AT2表达与肾小管上皮表型转化及肾间质血管病变发生学的关系
目的 探讨肾内肾素-血管紧张素系统(RAS)与IgA肾病的肾小管上皮细胞表型转化及肾间质、肾血管病变的关系.方法 应用免疫荧光、常规病理学、透射电镜等技术,观察15例Ⅱ级、15例Ⅲ级和20例Ⅳ-Ⅴ级共50例IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)肾活检组织的病理形态学特点,应用免疫组织化学Envision法检测肾组织内AT1、AT2、α-SMA和TGF-β的表达.结果 50例IgAN中28例有肾小管-间质损害(占56%);肾小管上皮细胞、肾间质细胞和肾小球系膜细胞均有不同程度的AT1、AT2和TGF-β表达,α-SMA除在小球外细小动脉壁表达外,在肾小管上皮细胞、肾间质细胞和肾小球系膜细胞也都有表达.IgAN肾组织AT1(r=0.9977,P=0)、AT2(r=0.8367,P＜0.05)和TGF-β(r=0.9901,P=0)的表达强度与肾间质血管病变程度呈正相关.结论 肾小管上皮细胞AT1及AT2的表达与IgAN的肾小管和小球外小动脉病变程度有密切的相关性;AngⅡ参与了肾间质和球外血管病变的形成.
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miRNA-21通过TPM1参与高糖诱导的人主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖
目的 探讨miRNA 21在高糖诱导的人主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖中的作用,以及对靶基因原肌球蛋白1 (tropomyosin 1,TPM1)表达的影响.方法 体外培养人主动脉平滑肌原代细胞,利用脂质体转染miRNA-21mimic和inhibitor至细胞中,BrdU法检测高糖刺激miRNA-21过表达和缺失情况下人主动脉平滑肌细胞的增殖情况,荧光定量PCR检测转染前后高糖刺激时细胞miRNA-21和TPM1的表达情况,Western blot检测人主动脉平滑肌细胞中TPM1、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、平滑肌蛋白22α (smooth muscle 22 alpha,SM22α)的表达情况.结果 10、20、25 mmol/L D-葡萄糖刺激时人主动脉平滑肌细胞较正常对照组(0.613±0.022)显著增殖(0.725±0.026、0.913±0.024、1.513±0.082),差异有统计学意义(P＜0.01);10、20、25 mmol/L D-葡萄糖刺激时miRNA-21表达较对照组升高1.1、2.0、3.1倍(P＜0.01);正常组细胞转染miRNA-21 mimic后细胞增殖能力增强1.6倍,转染miRNA-21 inhibitor后高糖组细胞增殖能力减弱(P＜0.01);转染miRNA-21 mimic后TPM1表达减弱,SM22α表达下调,OPN表达增加(P＜0.01),转染miRNA-21 inhibitor后TPM1表达上调,SM22α表达上调,OPN表达减少(P＜0.01).结论 miRNA-21可下调细胞TPM1的表达,从而促进入主动脉平滑肌细胞表型转化与增殖.
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缝隙连接蛋白43参与血管平滑肌细胞增殖和迁移过程的研究
血管内皮细胞损伤后，生长因子、化学因子、切应力及炎性介质等刺激血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cel s，VSMC）由收缩型转变成合成型，这个过程称为表型转化。VSMC表型转化是VSMC增殖和迁移的关键性起始步骤[1]。VSMC的增殖和移行是动脉粥样硬化和血管成型术后再狭窄等心血管疾病的病理基础。平滑肌细胞的迁移涉及促迁移信号的跨膜转导、细胞内信号分子的级联活化、细胞骨架蛋白的收缩和细胞的变型等过程。其中平滑肌细胞收缩是发生迁移必不可少的步骤[2]。有研究表明缝隙连接参与了VSMC收缩和VSMC表型转化，本文就Cx43蛋白参与VSMC增值和迁移过程的作一综述。
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RNA干扰技术沉默TRAF6对脂多糖诱导肾小管上皮细胞表型转化及炎症因子表达的影响
目的 探讨RNA干扰技术沉默脂多糖诱导人肾小管上皮细胞HK-2中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)基因表达后,对HK-2细胞表型转化及炎症因子表达的影响.方法 应用阳离子脂质体法将设计合成的TRAF6小干扰RNA(siRNA)瞬时转染HK-2细胞.将HK-2细胞分为空白对照组、脂多糖组、阴性对照组和TRAF6 RNA干扰组.各组培养6、12、24h后,倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法检测细胞增殖,酶联免疫吸附测定法检测细胞中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子cα(TNF-α)的含量,实时荧光定量PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TRAF6 mRNA的含量,蛋白免疫印迹法检测TRAF6、α-SMA、p38、c-Jun氨基端激酶—丝裂原活化蛋白激酶(JNk MAPK)和核因子-κB抑制蛋白(NF-κB)的表达.结果 TRAF6 siRNA能显著降低脂多糖诱导HK-2细胞中TRAF6、α-SMA mRNA含量和蛋白的表达,TRAF6 siRNA转染后HK-2细胞的增殖能力减弱,细胞因子IL-6、TNF-α含量下降,p38、JNK MAPK和NF-κB蛋白的磷酸化水平均明显降低,均P＜0.05.结论 TRAF6可通过MAPK-NF-κB信号通路介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应和细胞表型转化.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子6 HK-2细胞 RNA干扰 表型转化 -
miRNA-181a/b通过血清反应因子调控血管平滑肌细胞表型
目的 研究miR-181a/b通过血清反应因子(SRF,serum response factor)对血管平滑肌细胞向合成型表型转化及细胞增殖迁移能力的调控作用.方法 将miR-181a/b瞬时转染至人主动脉平滑肌细胞(HAoSMCs)中,用实时定量PCR、CCK-8检测方法和transwell实验分别检测平滑肌细胞的表型标记基因的表达水平、细胞增殖能力和迁移能力的变化.生物信息学分析预测miR-181a/b直接靶向血清反应因子的3'UTR(非编码区),并通过实时定量PCR、western blot 及双荧光素酶报告系统分另验证.结果 实时定量PCR结果表示在HAoSMCs中过表达miR-181a/b能够抑制收缩表型标记基因的表达,促进合成表型标记基因的表达,CCK-8与transwell实验结果表明,miR-181a/b可增强细胞的增殖和迁移能力.双荧光素酶报告系统与western blot结果表明,miR-181a/b能够直接作用SRF,抑制SRF的蛋白表达.结论 miR-181a/b通过直接作用血清反应因子的3'UTR促进平滑肌细胞由收缩型表型向合成型表型转化.
关键词： miRNA-181a/b 血清反应因子 血管平滑肌细胞 表型转化
