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中药益坎胶囊对动脉性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响
目的:探讨中药益坎胶囊对动脉性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响,以揭示益坎胶囊治疗ED的机制. 方法:选取SD大鼠50只,其中10只设为正常组,另40只通过结扎双髂内动脉造成动脉性ED模型.造模后将其中10只设为模型对照组,其余30只灌胃给予ED治疗中药益坎胶囊,浓度分别为1.88、0.94、0.47 g/kg.给药1个月后,经腹腔注射阿朴吗啡,观察大鼠呵欠次数和阴茎勃起次数;切取大鼠的阴茎组织标本,通过免疫组化法观测海绵体平滑肌细胞收缩型性标志物碱性调宁蛋白(calponin l)和合成型标志物骨桥蛋白(OPN)的表达,实验组结果与正常组和对照组进行比较. 结果:注射阿朴吗啡后,正常组大鼠勃起次数为(4.48±1.25)次,模型对照组为(1.63±0.22)次,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01);给药后,中药益坎胶囊高、中、低剂量组大鼠勃起次数有明显改善[高剂量:(3.05±1.37)次;中剂量:(2.98±0.16)次;低剂量:(1.75±0.40)次].免疫组化结果显示,模型对照组大鼠海绵体平滑肌细胞calponin 1表达减少,而OPN表达增多,与正常组相比差异有统计学意义(P＜0.05);与模型对照组相比,给药后,中药益坎胶囊高、中、低剂量组大鼠海绵体平滑肌细胞calponin 1表达增多,OPN表达减少. 结论:中药益坎胶囊能改善动脉性ED大鼠的勃起功能,抑制海绵体平滑肌细胞表型由收缩型向合成型转化.
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红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响
目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响. 方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21％ 02浓度)、低氧组(1％02浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1) 0.4 μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量. 结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P＜0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P＜0.01),与PGE1作用相当(P＞0.05). 结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化.红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当.
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血小板源性生长因子-BB对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化影响的初步研究
目的:研究血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化的影响. 方法:改良组织块法原代培养大鼠CCSMC,并进行细胞免疫荧光鉴定.实验分为空白对照组和不同浓度(5、10、20、40 ng/ml) PDGF-BB组,处理24 h;以及空白对照组和20 ng/ml PDGF-BB作用细胞不同时间(24、48、72 h)组,利用qRT-PCR检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、碱性调宁蛋白和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达. 结果:原代培养CCSMCα-SMA阳性细胞率达95％以上.与空白对照组比较,不同浓度PDGF-BB作用大鼠CCSMC后α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少(P均＜0.05);OPN mRNA表达水平显著上调(P＜0.05).与空白对照组比较,随20 ng/ml PDGF-BB作用细胞时间的延长,α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少,OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均＜0.05). 结论:PDGF-BB可促使SD大鼠CCSMC表型从收缩型向合成型转化.
关键词： 血小板源性生长因子-BB 表型转化 阴茎海绵体平滑肌细胞 SD大鼠 -
银杏叶提取物对自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化的影响
目的:观察银杏叶提取物(GBE)对自发性高血压大鼠(SHR)血管外膜成纤维细胞表型转化的影响.方法:体外组织决法培养SHR胸主动脉外膜成纤维细胞,先给予血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10(-6)mol/L刺激30min,再分别加入终浓度为0(对照组),25,50,100mg/L的GBE共培养24h,采用RT-PCR检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达,流式细胞术检测各组细胞α-SMA蛋白表达.结果:与对照组比较,25,50,100mg/L GBE组成纤维细胞表达α-SMA mRNA和仅α-SMA均明显减少,且与浓度成反比,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:GBE能抑制SHR血管外膜成纤维细胞的表型转化.
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血管平滑肌细胞表型转化与骨架蛋白表达之间的关系
目的:探讨体外培养血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型与细胞骨架蛋白表达之间的生物学意义.方法:体外培养大鼠主动脉VSMCs,实验分组为:对照组、血清饥饿组、血清再培养组,RT-PCR检测表型基因平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)mRNA的表达；免疫细胞化学检测细胞骨架蛋白F-肌动蛋白(F-actin)的表达.结果:在体外培养条件下,对照组SM22α表达较低,细胞呈多角形或短梭形,细胞多有板状突起,F-actin的荧光强度明显减低;血清饥饿组SM22α表达恢复上调,VSMCs多细长,呈梭形,少见分裂相细胞,F-actin的荧光强度升高；血清再培养后SM22α表达减少,细胞呈增殖状态,见核分裂现象,F-actin的荧光强度减低.结论:VSMCs的表型和细胞骨架形态和数量表达之间有着重要的相互联系,它们在维持细胞功能、血管重构及在心血管疾病(高血压、动脉粥样硬化)的发生、发展中起重要作用.
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基本转录元件结合蛋白2反义基因转染对血管平滑肌细胞表型转化的影响
目的:探讨基本转录元件结合蛋白2 (BTEB2)反义RNA对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响.方法:采用I型胶原酶消化法培养大鼠VSMC;通过RT-PCR法检测血清诱导的VSMC表型标记基因(SMαA和SMemb) mRNA表达的变化;用反义BTEB2重组腺病毒转染VSMC后,采用RT-PCR法检测SMαA和SMemb的mRNA表达,用免疫细胞化学技术检测SMαA和SMemb蛋白表达.结果:血清刺激后,SMemb mRNA表达增加,而SMαA mRNA表达减少;BTEB2反义基因转染显著抑制血清诱导的SMemb mRNA和蛋白表达的增加以及SMαA表达的减少.结论:BTEB2反义RNA可显著抑制血清诱导的VSMC表型转化.
关键词： 基本转录元件结合蛋白2 反义RNA 血管平滑肌细胞 表型转化 -
降钙素基因相关肽对高血压性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖及表型转化的影响
目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高血压性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSM)增殖及表型转化的影响.方法 选取20只自发性高血压Wistar大鼠(SHR)及10只同系正常血压健康大鼠(WKY),测量大鼠尾部动脉收缩压,通过颈部皮下注射阿朴吗啡后观察大鼠阴茎勃起情况,SHR大鼠中无阴茎勃起的归为高血压勃起功能障碍(HBP-ED)组,出现阴茎勃起的归为高血压(HBP)组,WKY大鼠归为对照组.取各组大鼠阴茎海绵体平滑肌组织行细胞原代培养.不同浓度(1、10和100nmol/L)CGRP作用于培养的细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞碱性调宁蛋白(Cnn1)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平.结果 不同浓度CGRP均可抑制高血压性ED大鼠CCSM的增殖,且抑制程度随CGRP浓度增加而加剧.当CGRP作用的终浓度为100nmol/L时,HBP组和HBP-ED组Cnnl mRNA表达水平较组内0nmol/L浓度均上调(均P＜0.05),OPN mRNA表达水平较组内0nmol/L浓度均下调(均P＜0.05).结论 CGRP可抑制高血压性ED大鼠CCSM的增殖,可使高血压性ED大鼠CCSM表型发生逆转化,即由合成型向收缩型转化.
关键词： 降钙素基因相关肽 高血压 勃起功能障碍 阴茎海绵体平滑肌细胞 表型转化 -
白藜芦醇对TGF-β1介导的肾小管上皮细胞表型转化和Hedgehog信号的影响
目的 探讨白藜芦醇(Res)对转化生长因子-β1(TGF-β 1)诱导的肾小管上皮细胞(NRK-52E)表型转化(EMT)的影响及其分子机制.方法 体外培养肾小管上皮细胞,分为对照组、诱导组(TGF-β 1∶5 μ g/L)、干预1组(TGF-β 1+ Res10 μ mol/ml)和干预2组(TGF-β 1+ Res100μ mol/ml).采用细胞免疫荧光和qRT-PCR技术检测EMT、细胞外基质和Hedgehog信号相关分子表达水平.结果 TGF-β 1作用NRK-52E细胞后,不仅促进其受体TGF-β 1R表达(P＜0.05),且肌成纤维细胞标志物(α-SMA)和基质成分Ⅲ型胶原的表达增加,上皮细胞标志物(E-cadherin)表达下降.应用Res干预后,不仅抑制甚至逆转了上述结果,且抑制了TGF-β1介导的MMP-2/TIMP-2比值下降(P＜0 05),促进基质成分降解.此外,Res也抑制TGF-β 1诱导的PCNA表达上调(P＜0.05),以及增殖相关的Hedgehog信号(Shh、Ptch1和Gli1)活化(P＜0.05).结论 Res可能通过拮抗Hedgehog信号来抑制TGF-β1所诱导的NRK-52E细胞增殖、EMT和细胞外基质累积.
关键词： 白藜芦醇 转化生长因子-β1 表型转化 肾小管上皮细胞 Hedgehog信号 -
高糖对小鼠足细胞向间充质细胞转分化的影响
目的 通过观察高糖环境下小鼠足细胞表达NEPH1、desmin、TGF-β 1和Smad7的变化,探讨高糖损伤足细胞的机制.方法 将培养成熟的小鼠足细胞用RandA 1.0软件完全随机分为高糖1、2、3组(葡萄糖浓度分别为15、25和30mmol/L)和对照组(葡萄糖浓度5mmol/L),倒置显微镜下观察高糖干预前后足细胞的形态变化,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测足细胞NEPH1、desmin、TGF-β 1和Smad7的mRNA和蛋白表达变化.结果 与对照组相比,高糖环境下培养48h后,足细胞形态发生不同程度变化.NEPH1和Smad7的mRNA表达较对照组显著减少(P＜0.05或0.01),desmin和TGF-β 1的mRNA表达较对照组增加(P＜0.05或0.01).其中高糖2组的NEPH1和Smad7的蛋白表达较对照组显著减少(均P＜0.01),而desmin和TGF-β 1的蛋白表达较对照组显著增加(P＜0.01).小鼠足细胞在高糖培养下NEPH1 mRNA和desmin mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.993,P＜0.01);NEPH1 mRNA和TGF-β1 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.989,P＜0.01);TGF-β 1 mRNA的表达和Smad7 mRNA的表达呈显著负相关(r=-0.996,P＜0.01).结论 高糖可能通过激活TGF-β/Smad信号通路诱导小鼠足细胞发生表型转化.
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AG490对肾小管上皮细胞转分化影响的实验研究
目的 探讨炎症介质的特异性阻断剂AG490在白介素-1β(interleukin-1β IL-1β)诱导的高糖培养的人肾小管上皮细胞转分化中的作用.方法 体外培养人肾近曲小管上皮细胞株(HKCs),随机分为高糖对照组(30 mmol·L-1);高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)组;高糖(30 mmol·L-1)+IL-1β(5 μg·L-1)+AG490(10 μmol·L-1)组.分别于处理后24、48、72 h收集细胞,采用免疫细胞化学染色和蛋白Western blot法检测细胞角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)水平.结果 IL-1β能使高糖培养的人肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的合成增加,而肾小管上皮细胞的标志物CK-18的表达逐渐减少;IL-1β刺激的同时加入AG490干预能减弱IL-1β对肾小管上皮细胞α-SMA蛋白的诱导作用,并使CK-18的表达回升.结论 炎症因子IL-1β能促进高糖培养的HKC发生表型转化,而炎症特异性阻断剂AG490能部分阻断IL-1β的该作用.
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上皮间质转化与哮喘气道重塑的研究进展
支气管哮喘是一类以气道重塑为病理基础的呼吸道疾病,反复的炎性浸润与组织损伤修复可导致气道重塑,目前有关气道重塑形成的机制尚不全面.研究表明,上皮间质转化在气道重塑的发生和发展过程中发挥重要作用.气道上皮可通过分泌多种因子及信号通路诱发间质转化,进而导致哮喘气道重塑.该文对上皮间质转化与哮喘气道重塑之间的研究进行综述,为临床后续哮喘治疗和研究提供参考.
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人类乳头状病毒感染与子宫颈癌的关系
宫颈癌是全世界仅次于乳腺癌致妇女死亡的第二大恶性肿瘤,2006年全球有49万例新发宫颈癌病例,死亡病例超过27万,其中有85%来自发展中国家~([1]).持续或反复性的HPV(尤其是高危型HPV)感染可能导致细胞向恶性表型转化,使得宫颈癌的发生危险性大大增加~([2]).因此,女性生殖道HPV感染的诊断与治疗,在预防和降低宫颈癌中具有重要临床意义~([3]).
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哮喘与呼吸道病毒感染
病毒感染引起哮喘病急性发作的机制相当复杂.包括吸入刺激物、吸入过敏源、呼吸道病毒及支原体、衣源体感染.其中气道炎症的加重和鼻病毒(RV)是导致急性发作的核心机制.病毒引起的TH1细胞型免疫反应可通过协助TH2而加重哮喘病人的气道炎症,病毒特异性CD8+T细胞在某些条件下可发生表型转化,生成TH2型细胞因子,哮喘的慢性气道炎症也被认为可能与抗病毒免疫有关.因此呼吸道病毒感染除了加重哮喘外,还可能是哮喘型慢性气道重塑原因之一.
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低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞表型转化的影响
目的 通过低密度脂蛋白(LDL)的刺激,观察LDL对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的诱导作用.方法 采用不同浓度的LDL(0,25,50,100,150μg/ml)刺激体外培养的大鼠肾小球系膜细胞的水平,以台盼蓝染色检测LDL对系膜细胞的毒性作用,MTT比色法检测细胞增殖,透射电镜观察系膜细胞的形态学变化,免疫细胞化学染色及Western blot检测α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN的表达.结果 在IDL作用下,倒置显微镜下细胞变为长梭形,透射电镜下细胞表面微绒毛减少.免疫细胞化学染色及western blot显示α-SMA、CTGF、Ⅳ型胶原及FN表达增强.结论 在LDL刺激下,系膜细胞可以发生表型转化.
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肾疏宁对系膜增生性肾炎模型大鼠肾小球固有细胞表型转化的影响
目的:观察肾疏宁对系膜增生性肾炎(MsPGN)模型大鼠肾小球系膜细胞(MC)表型转化的作用,探讨肾疏宁防治肾小球硬化的作用机制.方法:在建立MsPGN大鼠模型基础上,延长造模时间至12～16周,使其向肾小球硬化进展,观察肾疏宁对肾小球α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,并设苯那普利为阳性对照组.结果:12、16周末造模各组α-SMA表达量明显高于正常组(P＜0.01).16周末肾疏宁组α-SMA表达量明显优于苯那普利组(P＜0.01).结论:肾疏宁能抑制MC表型转化,减少肾小球内固有细胞α-SMA的表达,可能是防治肾小球硬化的部分作用机制.
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下肢静脉曲张患者外周血Nelin水平测定及意义
目的 探讨下肢静脉曲张患者与正常人外周血中Nelin表达水平的差异及其意义.方法 选取下肢静脉曲张患者57例为对照组,健康查体者60例为正常组,利用RT-PCR技术检测外周血单个核细胞中Nelin mRNA的表达水平,利用生物素双抗体夹心ELISA技术测定外周血血清中Nelin蛋白的表达水平.结果 RT-PCR结果显示,Nelin在对照组与正常组的相对表达量分别是0.226±0.070、0.718±0.114,两组差异有统计学意义(t=9.028,P＜0.01);ELISA结果显示,96例血清中均可检测到Nelin蛋白的表达,对照组和正常组的表达量分别是(2.61±1.73)ng/mL、(3.64±1.65) ng/mL,两组差异有统计学意义(t=2.92,P＜0.01).结论 与正常人相比,下肢静脉曲张患者Nelin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,提示Nelin基因的表达可能与下肢静脉曲张发生发展有一定的关系.
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内皮素-1在糖尿病性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化中作用
目的 探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)在糖尿病性勃起功能障碍(erectile dysfunction,ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(corpus cavernosum smooth muscle cells,CCSM)表型转化中的作用.方法 采用链脲佐菌素建立糖尿病性ED大鼠模型,采用改良组织块贴壁法体外培养正常大鼠及糖尿病性ED大鼠CCSM,将CCSM分为对照组、糖尿病性ED组、对照+ET-1组和糖尿病性ED+ET-1组,其中对照+ET-1组与糖尿病性ED+ET-1组加入10-7 mol/L ET-1,对照组与糖尿病性ED组加入PBS缓冲液.采用RT-PCR法检测4组碱性调宁蛋白(calponin 1,Cnn1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN) mRNA表达情况.结果 糖尿病性ED+ET-1组Cnn1 mRNA表达水平(3.51±0.15)低于对照组(10.21±1.52)和糖尿病性ED组(4.79±0.56),糖尿病性ED组和对照+ET-1组(5.04±0.64)低于对照组(P＜0.01);糖尿病性ED+ ET-1组OPN mRNA表达水平(6.97±0.74)高于对照组(1.22±0.21)和糖尿病ED组(5.35±0.62),糖尿病性ED组和对照+ET-1组(4.98±0.46)高于对照组(P＜0.01).结论 ET-1不仅对收缩型CCMS有促表型转化作用,对合成型CCMS也有促表型转化作用,且ET-1对CCSM的作用是不可逆的.
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小儿过敏性哮喘的发病机制及其治疗
近10 a来的研究资料表明,小儿过敏性哮喘的变态反应是由于免疫应答中的T细胞亚群Th1/Th2比例失调和其他一些因素综合引起.IL-12和IFN-γ促进其平衡,IL-4和IL-5破坏其平衡,现将有关情况介绍如下.一、小儿过敏性哮喘的发病机制T细胞对环境变应原免疫的发展,开始于母体子宫内,导致Th0细胞弱激活,使Th0细胞(成熟未经刺激的辅助T细胞或CD4+细胞)向Th2细胞因子表型转化.生后弱激活的Th0细胞受到(环境)变应原的反复刺激,以及Th细胞亚群间的竞争交叉调节,使大多数人在食物变应原的刺激下,导致免疫应答下调,在吸入变应原的刺激下,选择长寿T记忆细胞群.对正常人(非特应性者)几乎毫无例外的向Th1细胞转化,表明胎内Th2细胞导向性应答被免疫偏离扭转成正常情况.对特应性人群这种扭转没有结果,导致生后向Th2转化,甚至达到出现临床症状的水平.新生儿体内较低水平的IFN-γ与其后的过敏体质发生有关.因此婴儿出生后第1年是发生变态反应的高危期,对居室内、外的变应原都会发生异常强烈的免疫应答.这种免疫偏离过程大多发生在学龄前儿童.
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Prohibitin基因转染对肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的 探讨转染外源性Prohibitin(PHB)基因对体外培养的肾小管上皮细胞株(NRK-52E)表型转化的影响.方法 将构建的pcDNA3.1(+)-PHB1 、pcDNA3.1(+)-PHB2质粒转染体外培养的NRK-52E细胞作为转染组,以空载体转染NRK-52E细胞为阴性对照组,以正常NRK-52E细胞为空白对照组,分别应用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染24h、48 h、72 h各组NRK52E细胞PHB1 、PHB2及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA及蛋白表达.结果 1.转染24 h、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞的PHB1 、PHB2 mRNA及其蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组增高(Pa＜0.05),且48 h表达量高,而阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义.2.转染24 h 、48 h、72 h时转染组NRK-52E细胞α-SMA mRNA和蛋白表达均较阴性对照组和空白对照组降低(Pa＜0.05),48 h表达量低,阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义.3.转染组48h NRK-52E细胞PHB1 、PHB2蛋白表达量与α-SMA蛋白表达量均呈负相关(r=-0.942、-0.869,Pa＜0.05).结论 转染外源性PHB基因可以抑制体外培养的NRK-52E细胞的表型转化.
关键词： Prohibitin 肾小管上皮细胞 转染 α-平滑肌肌动蛋白 表型转化 -
转化生长因子-β1对人Tenon囊成纤维细胞表型转化的作用
目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(human subconjunctival Tenon's capsule fibroblast,HTCF)表型转化的作用.方法人白内障手术中取结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞.用第5～9代细胞,以不同浓度TGF-β1(0 μg·L-1,2 μg·L-1,5 μg·L-1,10 μg·L-1,20 μg·L-1)、不同时间(24 h、48 h、72 h)诱导成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞.用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型.结果体外用TGF-β1诱导HTCF,在0～10 μg·L-1内,TGF-β1呈剂量依赖性增加平滑肌肌动蛋白在蛋白水平的表达,至20 μg·L-1时表达迅速下降;10 μg· L-1 TGF-β1诱导48 h后其平滑肌肌动蛋白的表达与24 h、72 h相比,差异有显著性(P《0.01,n=6).结论一定浓度和剂量的TGF-β1能显著诱导HTCF表型转化为肌成纤维细胞,在人Tenon囊组织局部组织损伤修复及瘢痕形成中具有重要作用.
