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血管内膜增生过程中核酸代谢相关酶活性变化的研究
目的和方法:应用血管内皮剥脱后再狭窄模型,动态观察胸腹主动脉壁核膜核苷三磷酸酶及核酸代谢和糖代谢相关酶5'-核苷酸酶、腺苷脱氨酶和琥珀酸脱氢酶活性的变化.探讨其与血管平滑肌细胞增生和新生内膜形成的关系.结果:血管内皮剥脱后,胸腹主动脉壁核膜核苷三磷酸酶活性持续升高,与血管内膜增厚程度相平行;血管平滑肌细胞收缩型标志蛋白α-肌动蛋白表达降低及合成型标志蛋白骨桥蛋白表达上调,说明血管平滑肌细胞发生了表型转化,由分化型转变成为去分化型;5'核苷酸酶、腺苷脱氨酶和琥珀酸脱氢酶活性表现为先升后降,三种酶活性均于血管平滑肌细胞增殖旺盛期(术后3～7 d)达峰值.结论:细胞内参与mRNA转运及糖、核酸代谢的一系列酶活性的变化是新生内膜形成的生化基础.
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原代培养鼠肺成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白的表达
目的:观察原代培养大鼠肺成纤维细胞(FB)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况.方法:24只雌性Wistar大鼠,随机分为正常组和模型组,气管内注入博莱霉素A2(BLM-A2)(5 mg/kg)建立大鼠肺间质纤维化(PF)模型,正常组气管内注入等量生理盐水.实验周期第28 d腹主动脉放血法处死,肺组织HE染色和透射电镜检查.体外原代培养FB,传3-5代后流式细胞术检测α-SMA表达的细胞阳性率.结果:HE染色28 d模型组大片肺泡结构破坏,肺泡腔消失,有成纤维细胞灶形成,电镜观察肺组织超微结构发生改变,肺间质中可见胞浆内有微丝样结构的MF.流式细胞分析结果:正常组α-SMA表达的细胞阳性率为95.5%±4.68%,模型组α-SMA表达的细胞阳性率为96.2%±2.14%.与正常组相比P＞0.05.结论:原代培养的大鼠肺FB中α-SMA的阳性表达率正常组和模型组均显著增高,体外培养的大鼠肺FB传3～5代后可能有部分已经转化为肌纤维母细胞(MF).
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高糖对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响及其机制
目的:探讨高糖对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及机制.方法:大鼠VSMCs由组织贴壁法培养获得,以3～5代细胞为靶细胞,待细胞融合后用含有2％胎牛血清的DMEM孵育12 h,再置于正常组(5.5mmol/L glucose)、高糖(25 mmol/L glucose)、高糖+P38抑制剂SB203580的DMEM继续培养24h.用实时荧光定量RT-PCR分析各组VSMCs合成型标志蛋白OPN、收缩型标志蛋白α-SMA及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的基因表达情况;Western blot检测各组OPN、α-SMA和磷酸化P38的蛋白表达情况.结果:①高糖促进了VSMCs的表型由收缩型转化为合成型,同时上调基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9的表达;②高糖能促进P38蛋白的磷酸化,增加磷酸化P38的蛋白表达量;③P38/MAPK信号通路抑制剂SB203580明显抑制了高糖促进VSMCs表型转化及MMP-2、MMP-9表达的效应.结论:高糖能通过P38/MAPK信号通路促进VSMCs的表型转化.
关键词： 大鼠 平滑肌细胞 高糖 表型转化 P38/MAPK信号通路 -
肾小管上皮细胞表型转化在大鼠输尿管梗阻及再通中的意义
目的:探讨肾小管上皮细胞表型转化(EMT)在大鼠输尿管梗阻及再通中的意义.方法:将24只SD大鼠随机分成假手术组(Sham,n=3)与单侧输尿管梗阻组(UUO,n =9),双侧输尿管梗阻组(BUO,n=3)与双侧输尿管梗阻后再通组(RBUO,n=9).HE和Massom染色观察肾间质纤维化程度,qRT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、钙粘附蛋白(E-cadhern)和紧密连接蛋白(ZO-1)mRNA的表达,免疫组织化学染色检测α-SMA和E-cadhern蛋白的表达.结果:HE和Masson染色显示,随梗阻时间延长肾纤维化病变加剧,再通后纤维化程度明显减轻；α-SMA和vimentin mRNA蛋白在梗阻肾中表达增高,但E-cadherin和ZO-1表达明显下降；输尿管再通后,α-SMA和vimentin mRNA或蛋白表达随再通时间延长而下调,但E-cadherin和ZO-1表达明显升高.结论:输尿管梗阻可促使肾小管上皮细胞出现EMT,形成肌成纤维细胞,终导致纤维化发生；输尿管再通可有效缓解EMT和间质纤维化程度.
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糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子和Smad7蛋白的表达
目的探讨糖尿病肾病(DN)时肾小管上皮细胞转化以及肝细胞生长因子(HGF)、Smad7蛋白在其中可能发挥的作用.方法 60只Wistar大鼠均行右肾切除术,伤口愈合后随机分为右肾切除对照组和糖尿病组.腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型.采用免疫组化法检测角蛋白18(CK18)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、HGF和Smad7蛋白的表达;流式细胞术检测α-SMA和HGF的表达;蛋白质免疫印迹法检测Smad7蛋白的表达.结果糖尿病组较对照组CK18的表达降低,α-SMA的表达上升,HGF和Smad7蛋白的表达表现为先上升后下降.结论糖尿病时,肾小管上皮细胞可发生表型转化,转化为肌成纤维细胞.HGF和Smad7蛋白表达下降可能与该模型中肾小管上皮细胞转化有关.
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银杏叶提取物对特发性肺间质纤维化成纤维细胞表型转化过程中NOTCH信号通路的影响
目的 观察博莱霉素(BLM)致肺纤维化动物模型中NOTCH信号通路对成纤维细胞(FB)表型转化的影响,探索中药银杏叶提取物(GBE)治疗肺纤维化的作用机制.方法 20只昆明小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、γ分泌酶抑制剂DAPT组、GBE组,每组5只.采用气管切开注入BLM 5 mg/kg复制小鼠肺纤维化模型,对照组给予生理盐水1.25 ml/kg.GBE组于制模当日开始灌胃GBE 0.6 g·kg-1·d-1,DAPT组于制模后次日灌胃DAPT5 mg·kg-1·d-1,隔日1次.28 d处死小鼠,取左肺组织行苏木素-伊红(HE)染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度;用免疫组化染色及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测NOTCH1及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达.结果 模型组肺纤维化程度重,肺泡间隔增宽,肺泡连续性受到破坏,肺泡直径和面积大小不均匀,终末小气道周边炎性细胞浸润明显,血管周边也发现明显的炎性细胞浸润现象,同时伴有纤维化形成,以支气管周边区域较为明显,外周局部区域也有局灶性的纤维化表现,GBE组及DAPT组肺纤维化程度较模型组明显减轻.免疫组化显示,模型组NOTCH1及α-SMA的蛋白含量较对照组明显增高[NOTCH1(A值,×103):129.21±1.28比59.60±8.25,0-SMA(4值,×103):108.23±21.73比55.42±9.23,均P＜0.05];GBE组和DAPT组NOTCH1、α-SMA蛋白含量均较模型组明显降低[NOTCH1(A值,×103):GBE组为70.54±2.46,DAPT组为67.38±2.35;α-SMA(A值,×103):GBE组为68.95±3.46,DAPT组为61.63±1.99,均P＜0.05];Western Blot结果显示,模型组NOTCH1、α-SMA的蛋白表达水平较对照组增高;GBE组和DAPT组NOTCH1、α-SMA的蛋白表达水平较模型组明显降低.结论 NOTCH信号通路激活参与了肺纤维化中FB向肌成纤维细胞(MFb)表型转化过程,中药GBE通过抑制NOTCH信号通路的激活达到减轻肺纤维化的作用.
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肾疏宁对肾小管间质损害大鼠表型转化的影响
目的:观察肾疏宁对肾小管间质损害大鼠表型转化的影响.方法:在系膜增生性肾炎模型基础上,延长造模时间至12～16周,使其自然发展成肾小管间质损害模型,观察肾疏宁对肾小管间质α-SMA、PCNA、CD68蛋白表达的影响,并设苯那普利为阳性对照组.结果:12～16周末,造模各组肾小管间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、CD68蛋白表达量均明显高于正常组(P＜0.05或P＜0.01).第12周末,治疗组均能降低肾小管间质α-SMA、CD68表达量(均P＜0.01),但对肾小管PCNA表达量影响不明显,而对间质PCNA表达量具有明显的降低作用(均P＜0.01).第16周末,肾疏宁组明显优于苯那普利组(均P＜0.01).结论:肾疏宁对肾小管间质损害具有明显的保护作用,其机制可能是通过抑制炎细胞浸润,抑制间质细胞的增殖,逆转肾小管间质的表型转化而实现的.
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清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用
目的 探讨清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞表型转化即上皮-间质细胞转分化的作用.方法 将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、糖尿病肾病组、清热益气化瘀通络组、厄贝沙坦组,每组10只.除正常组大鼠外,其余组大鼠均采用腹腔注射链脲佐菌素方法制作DN模型.造模成功后,清热益气化瘀通络组和厄贝沙坦组给予相应药物灌胃,正常组和糖尿病肾病组给予等量生理盐水灌胃,均连续12周.灌胃结束后,检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量,应用实时定量RT-PCR法检测肾皮质中Wilms肿瘤抑制因子(WT1)、钙黏蛋白(P-Cadherin)、结蛋白(desmin)mRNA 表达情况.结果 实验结束时,各造模组的血糖水平均明显高于正常组(P均<0.05),但各造模组间血糖水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各造模组的24h尿蛋白定量也均明显高于正常组(P均<0.05),但厄贝沙坦组和清热益气化瘀通络组24 h尿蛋白定量均明显低于糖尿病肾病组(P均<0.05),且清热益气化瘀通络组明显低于厄贝沙坦组(P均<0.05).WT1 mRNA表达(2 -△Ct)及相对定量(2 -△△Ct)结果显示从高到低依次为正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组、糖尿病肾病组,但4组间比较差异均无统计学意义(P均 >0.05);正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组P -Cadherin mRNA表达(2 -△Ct)及相对定量(2 -△△Ct)均明显高于糖尿病肾病组(P均<0.05),desmin mRNA表达(2 -△Ct)及相对定量(2 -△△Ct)均明显低于糖尿病肾病组(P均<0.05),但3组间比较差异均无统计学意义(P均 >0.05).结论 清热益气化瘀通络方可增加足细胞P-Cadherin表达而降低desmin 表达,具有拮抗糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用.
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血管平滑肌细胞表型转化标记物研究进展
血管平滑肌细胞存在收缩型和合成型两种状态,在不同的状态下,细胞内蛋白的表达量不一样,并且对于细胞增殖、收缩等功能都具有不同的作用,这些具有不同表达量的蛋白可以作为区分细胞表型的标记物.目前收缩型标记物主要有:α-肌动蛋白、调宁蛋白、结蛋白、波形蛋白.合成型标记物主要有:骨桥蛋白、表皮调节素.本文现就收缩型和合成型标记物分别进行综述.
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肺肌成纤维细胞与特发性肺纤维化研究进展
肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)形成过程中涉及细胞外基质(extracellula matrix,ECM)大量沉积,其主要来源于肌成纤维细胞(myofibroblast,MF).该细胞能表达α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),是造成ECM异常沉积的主要细胞.MF的转化受多种因素调节、有多种信号途径参与,是一个错综复杂的过程.
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血管紧张素-(1-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的影响
目的 观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化的影响.方法 将35株体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株EC(HB2Y-1)随机分为对照组9株,低糖组6株,高糖组7株,高糖+Ang-(1-7)10-6mol/L组6株及高糖+Ang-(1-7)10-7mol/L组7株.采用免疫化学染色检测各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.结果 高糖组细胞α-SMA表达明显高于对照组(P<0.01);与高糖组相比,高糖+Ang-(1-7)10-6mol/L组及高糖+Ang-(1-7)10-7mol/L组α-SMA阳性细胞率明显下降(P<0.01),但高糖+Ang-(1-7)10-7mol/L组下调幅度较低.结论 Amg-(1-7)呈剂量依赖性抑制高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化.
关键词： 血管紧张素-(1-7) 高糖 系膜细胞 表型转化 -
缬沙坦对梗阻性肾病大鼠肾脏α-SMA、MCP-1表达的影响
目的 观察单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)肾病模型大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)的表达特点、意义和缬沙坦干预治疗的影响.方法 以UUO制作肾病模型,以α-SMA及MCP-1等为观察指标,采用免疫组化、病理图像分析等方法,进行阳性表达定位、蛋白表达半定量分析.结果 UUO模型组大鼠肾小管间质α-SMA表达明显,蛋白表达半定量分析明显高于对照组(P <0.01),MCP-1也表达明显,蛋白表达半定量分析明显高于对照组(P<0.01);缬沙坦组明显低于模型组(P<0.01).结论 UUO肾病模型中肾小管间质存在细胞表型转化现象,缬沙坦能抑制MCP-1的生成,限制炎症反应的放大过程;减轻α-SMA的表达,抑制肾小管间质细胞表型转化.
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学术探讨降钙素基因相关肽对大鼠主动脉平滑肌细胞HRG-1和SM22ɑ的影响
目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)对大鼠主动脉平滑肌细胞中高血压相关基因(HRG-1)和平滑肌22ɑ(SM22ɑ)表达的影响,为阐明CGRP抑制主动脉平滑肌细胞增殖以及表型转化的机制提供实验依据.方法 取健康SD大鼠的主动脉,按照器官培养方法行体外培养血管,HE染色和抗5-Brdu免疫细胞化学染色观察细胞增殖情况,实时定量RT-PCR检测血管平滑肌细胞增殖相关基因HRG-1和表型转化相关基因SM22ɑ的表达水平,统计分析加CGRP组和未加CGRP组基因表达水平的差异.结果 CGRP组增生斑块明显较外源脂质组减少,外源脂质组的血管中膜可见大量被标记的增生平滑肌细胞,CGRP组标记到的增殖细胞明显减少;CGRP组较外源脂质组HRG-1和SM22ɑ表达明显增高.结论 CGRP对血管平滑肌增殖的抑制作用与上调增殖负性调控基因HRG-1和收缩表型标志基因SM22α的表达有关.
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中药治疗慢性肾脏疾病及其抗纤维化作用的研究进展
慢性肾脏疾病(CKD)是常见的临床疾病,其病变常逐渐进展为肾小球硬化和肾间质纤维化,导致慢性肾衰竭(CRF).CKD进展机理十分复杂,早期表现可为肾组织局部炎症,随后出现肾脏固有细胞的表型转化,细胞增殖、细胞因子分泌,细胞外基质(ECM)成分分泌及降解异常,终导致肾小球硬化和/或肾间质纤维化.多种细胞及细胞因子共同参与这一过程,形成相互作用的复杂调控网络并恶性循环,加重上述病理变化[1].
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宽叶缬草对高胆固醇血症大鼠肾脏保护作用的探讨
目的:探讨宽叶缬草在脂质肾损害中的保护作用和可能机制.方法:用含4%胆固醇和1%胆酸钠的高脂饲料饲喂大鼠建立高脂模型,观察宽叶缬草对大鼠血脂、尿蛋白和肾功能的影响,以及对肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质增生、α-SMA表达、Ⅳ型胶原表达的影响.结果:宽叶缬草有降低总胆固醇、低密度脂蛋白和尿蛋白的作用(P＜0.01),肾病理和免疫组化证实宽叶缬草在降脂和降低尿蛋白同时,能减轻肾小球系膜病变和细胞外基质产生,降低肾小球α-SMA和Ⅳ型胶原表达.结论:宽叶缬草的肾保护作用可能与降脂基础上的肾小球系膜细胞表型转化的抑制有关.
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降脂汤对高胆固醇血症大鼠肾系膜细胞表型的影响
目的:探讨降脂汤对高胆固醇血症大鼠肾系膜细胞表型的影响和可能机制.方法:高脂饲料饲喂大鼠,建立高脂模型,以来适可为对照,观察降脂汤对大鼠血脂、肾功能及肾脏病理学的影响.结果:降脂汤可降低大鼠TG、TC、LDL和Scr,升高HDL;还能减轻肾小球系膜病变和细胞外基质产生,降低肾小球系膜区α-SMA和Ⅳ型胶原表达.结论:降脂汤对大鼠脂质性肾损害的保护作用可能与其在降脂基础上抑制肾小球系膜细胞的增殖和表型转化有关.
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肾小球疾病相关机制及中医药研究进展
有关肾小球疾病发生发展的相关机制的探讨是当今研究的热点之一.肾小球疾病的炎症产生和发展,首先因为细胞因子网络失调,而后产生肾脏固有细胞的表型转化,进而造成肾小管-间质损伤及肾小球硬化,导致肾功能衰竭的终结局.中医药对上述几个环节的研究取得了一些进展.本文分四个方面加以概述.
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雷公藤多苷对单侧输尿管结扎小鼠肾小管间质细胞表型转化的影响
目的:通过观察雷公藤多苷对UUO小鼠肾小管间质细胞表型转化的影响,探讨抗风湿中药在防治肾间质纤维化中的作用.方法:采用小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型,用雷公藤多苷进行干预,用血管紧张素转化酶抑制剂蒙诺作为对照.肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达采用免疫组化或Western-blotting方法检测;基因表达采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法.结果:UUO模型组小鼠肾间质纤维化程度以及α-SMA、Vimentin蛋白表达和基因表达水平均较假手术组显著增高,而雷公藤和蒙诺治疗均可显著降低肾间质细胞表型转化.结论:抗风湿药雷公藤多苷可显著降低肌成纤维细胞的积聚,可能是防治肾间质纤维化的分子机制之一.
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麝香保心丸对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响
目的:观察麝香保心丸(SXBXW)对血管平滑肌细胞表型转化和增殖的影响.方法:培养平滑肌细胞系RASMC P8细胞并将其分成对照组和SXBXW药物组.并观察SXBXW对细胞增殖、增殖周期、对血管平滑肌α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和肌球蛋白重链(SM-MHC)表达的影响.结果:麝香保心丸抑制RASMC P8细胞由收缩型向合成型转化,表现为收缩型细胞的标志物α-SMA和SM-MHC标记的阳性细胞增加,阴性细胞减少,同时抑制RASMC P8细胞周期从G1期向S期转化,从而抑制细胞的增殖.结论:SXBXW能有效的抑制血管平滑肌的细胞表型转化和细胞增殖.
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AMP依赖的蛋白激酶α2介导二十二碳六烯酸对抗血管平滑肌细胞表型转化研究
目的 探讨AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)α2介导二十二碳六烯酸(DHA)对抗血管平滑肌细胞表型转化的调控作用.方法 原代培养小鼠血管平滑肌细胞(VSMC),应用棕榈酸(PA)做为平滑肌细胞表型转换的体外病理刺激因素,应用不同浓度的DHA进行干预,流式细胞术检测细胞的增殖情况;明胶谱分析、Transwell小室观察细胞的迁移情况;Western blot检测平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)表达及细胞分化情况,同时检测AMPKα表达及活化情况.结果 PA处理后,原代小鼠VSMC增殖能力显著增强,G1向G2细胞周期转化的细胞比例增加;DHA作用后,PA诱导的VSMC增殖能力明显受到抑制.明胶酶谱分析和Transwell小室研究发现,DHA处理后,PA诱导的VSMC的迁移能力受到明显抑制;细胞增殖标志蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)表达下降,细胞分化标志蛋白SMMHC表达增加,DHA可剂量依赖性抑制PA诱导的VSMC表型转换.DHA可诱导pAMPKα表达,且以AMPKα2异构体为主.结论 AMPKα2异构体介导了DHA对抗PA诱导的血管平滑肌细胞表型转化.
关键词： AMP依赖的蛋白激酶 二十二碳六烯酸 血管平滑肌细胞 表型转化
