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成纤维细胞、肌成纤维细胞与肺纤维化
肺纤维化(PF)形成过程中涉及细胞外基质大量沉积,其主要来自于成纤维细胞(FB).成纤维细胞灶主要由一种特殊成纤维细胞--表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的肌成纤维细胞(MF)构成,是造成细胞外基质异常沉积的主要细胞,FB和MF共同参与了PF形成.FB与MF之间存在一定的联系、区别,其中涉及到FB向MF表型转化,其转化的机制受多种因素调节、多种信号途径参与,是一个错综复杂的过程.
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环氧合酶2对血管平滑肌细胞增殖、迁移和表型转化的影响
目的 研究环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖、迁移和表型转化的影响.方法 体外培养大鼠采集VSMCs,采用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、Transwell小室法观察不同浓度COX-2对VSMCs增殖、迁移的影响;RNA干扰技术沉默COX-2后,观察其对VSMCs增殖、迁移的影响;Western bot法分析COX-2-siRNA对VSMCs表型标志蛋白的影响.结果 COX-2可促进VSMCs增殖、迁移,并呈现浓度依赖关系;COX-2-siRNA则可显著抑制VSMCs的增殖、迁移;Western blot法结果表明,COX-2-siRNA可上调VSMCs收缩型标志蛋白的表达,同时下调VSMCs合成型标志蛋白的表达.结论 COX-2可以促进VSMCs的增殖和迁移,同时促进其表型的转化.
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KCa3.1在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化中的作用
目的：探究中电导钙激活性钾离子通道（intermediate?conductance Ca2+?activated K+channels ，KCa3.1）在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells ，VSMCs）钙化中的作用及机制。方法体外培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞和大鼠胸主动脉血管环，利用10 mmol/Lβ?甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化、血管环钙化模型。同时使用HCl和NaHCO3调节培养基pH值，细胞、血管环被随机分为6组：正常pH7.4组、正常pH8.0组、高磷组（在高磷培养基的基础上调整pH值为7.4、7.7、8.0三个亚组）、TRAM?34（KCa3.1抑制剂）干预组（在高磷pH8.0培养基的基础上添加20 nmol/L TRAM?34）。茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度；von Kossa染色法和钙含量测定法判断血管环钙化程度。RT?PCR、Western印迹法检测各组细胞中调节成骨和软骨分化的关键转录因子Runx2的表达，酶联免疫吸附法测定碱性磷酸酶（ALP）活性，荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。免疫组织化学法检测各组血管环中KCa3.1、Runx2的表达。结果体外培养VSMCs 12 d后，与正常pH7.4组相比，高磷组钙盐沉积明显增高（P＜0.05），且随着pH升高逐渐增加（P＜0.05）；与高磷pH8.0组相比，TRAM?34干预组钙盐沉积明显降低（P＜0.05)。体外培养VSMCs 4 d后，碱性环境显著促进钙离子内流（P＜0.05），增加KCa3.1、Runx2表达（P＜0.05），增加ALP活性（P＜0.05），而TRAM?34干预可显著抑制钙离子内流（P＜0.05），减少Runx2表达（P＜0.05），降低ALP活性（P＜0.05）。体外血管环培养12 d后，与正常pH7.4组相比，高磷组钙盐沉积明显增高（P＜0.05），且随着pH升高逐渐增加（P＜0.05）；与高磷pH8.0组相比，TRAM?34干预组钙盐沉积明显降低（P＜0.05）。体外血管环培养4 d后，免疫组化结果显示，碱性环境促进KCa3.1和Runx2表达（P＜0.05），TRAM?34可显著抑制Runx2表达（P＜0.05）。结论碱性环境可促进高磷诱导下大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化，其机制可能是通过促进平滑肌细胞钙离子内流，增加KCa3.1表达，促进平滑肌细胞表型转化来实现的。
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游离脂肪酸对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的研究游离脂肪酸(FFAs)对人类近曲肾小管上皮细胞株(HK-2)表型转化的作用.方法应用流式细胞技术和免疫组织化学方法检测不同剂量的FFAs在不同时间点上对HK-2细胞形态学及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果 FFAs呈剂量和时间依赖性促进HK-2细胞表达α-SMA;在高浓度的FFAs作用下,HK-2细胞呈梭形成纤维细胞样改变.结论在FFAs作用下,体外培养的正常人近曲肾小管上皮细胞发生上皮向间叶的表型转化.
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移植肾排异反应中肾小管上皮细胞的表型转化
目的 观察人移植肾肾穿刺标本不同排异反应病变中肾小管上皮细胞表型转化状态,探讨排异反应与肾小管上皮细胞表型转化的相关性.方法 免疫组织化学SP法检测55例移植肾穿刺不同病变组中肾小管上皮细胞α平滑肌肌动蛋白( α-SMA)的表达.结果 各组萎缩病变的肾小管上皮细胞均有α-SMA阳性表达,表现为近基底膜处胞质阳性染色,提示出现了表型转化.在无萎缩病变的肾小管中,仍有部分肾小管细胞呈α-SMA阳性染色.7例基本正常病例组均无肾小管上皮细胞的表型转化.28例急性T细胞介导排异IA级病例组中,1例肾小管上皮细胞α-SMA阳性表达率为25％～50％,3例为10％～25％.14例排异反应IB级中,l例α-SMA阳性表达率达50％以上,2例25％～50％,2例10％～25％.结论 随着急性T细胞介导性排异反应加重,肾小管上皮细胞发生表型转化的现象明显增强.
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病理性因素对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响
目的通过低血清、高糖、高白蛋白的刺激,观察肾小管上皮细胞的表型变化.方法以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系HKC为对象,分别用低血清(2%小牛血清)、高糖(25 mmol/L)、高白蛋白(1.5 g/L)刺激,用透射电镜检测细胞形态变化;用免疫组织化学(组化)检测角蛋白(CK)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、Ⅰ型胶原和转化生长因子(TGF)-β1的蛋白表达;Western blot进一步检测Ⅰ型胶原蛋白表达的动态变化;细胞原位杂交检测Ⅰ型胶原基因表达.结果在低血清、高糖、高白蛋白直接作用下,肾小管上皮细胞形态变化明显,包括呈梭形改变.透射电镜下细胞表面微绒毛及细胞内线粒体明显减少,粗面内质网明显增加.免疫组化染色显示CK减弱,vimentin、α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1增强.Western blot显示Ⅰ型胶原表达增加,且与损伤程度正相关.原位杂交显示Ⅰ型胶原基因表达增加.结论在低血清、高糖、高白蛋白直接作用下,体外培养的正常人近端肾小管上皮细胞系HKC发生了上皮向间叶的表型转化.
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糖尿病大鼠膀胱平滑肌的表型转化
目的：检测链脲佐菌素造模后9周的糖尿病SD大鼠膀胱平滑肌收缩型标志物和关键调控基因myocardin的表达水平，了解糖尿病大鼠膀胱平滑肌是否发生表型转化。方法32只体质量200~220 g的8周龄雄性SD大鼠随机平均分为糖尿病（DM）组和非糖尿病（NDM）组，9周后取膀胱组织行HE和Masson三色染色观察膀胱组织病理变化，qRT-PCR、Western blotting分别检测膀胱组织平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链收缩型平滑肌标志物及myocardin基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 DM组大鼠较NDM组明显消瘦（286.25±71.20 g vs 412.71±102.74 g，P=0.001），多饮、多尿，膀胱中胶原纤维组织增多（P<0.001），myocardin、α-SMA、平滑肌肌球蛋白重链的mRNA和蛋白水平均显著下降（P均<0.05）。结论糖尿病大鼠膀胱平滑肌在造模9周时发生表型转化，引起膀胱平滑肌舒缩障碍，可能在糖尿病膀胱病理变化过程中起重要作用。
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血小板源性生长因子-BB对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响
目的：了解血小板源性生长因子-BB（PDGFBBB）对大鼠阴茎海绵体平滑肌（CCSM）细胞增殖、迁移及表型转化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用改良的组织块培养法培养Wistar大鼠CCSM细胞，并用细胞免疫荧光法鉴定。利用CCK-8法检测不同浓度的PDGFBB对培养的大鼠CCSM细胞增殖的影响，并筛选出适PDGFBB作用浓度。分别用0 ng/mL PDGFBB与适浓度PDGFBB处理CCSM细胞，利用划痕实验检测PDGFBB对CCSM细胞迁移的影响，24 h和48 h时利用qRT-PCR检测细胞中转录因子myocardin及收缩型表型标志物α-SMA、SMMHC mRNA表达水平；用适浓度PDGFBB处理CCSM细胞0、24和48 h后，利用western blotting检测细胞中myocardin的蛋白表达水平。结果原代培养的CCSM细胞中α-SMA和smoothelin阳性率分别约为96.5%和96%；不同浓度的PDGFBB均能明显促进CCSM细胞增殖，其适浓度为12.5 ng/mL。PDGFBB（12.5 ng/mL）能促进CCSM细胞迁移，下调CCSM细胞中myocardin、α-SMA和SMMHC mRNA表达水平（P均<0.01）；在48 h内myocardin蛋白质的表达水平随着PDGFBB作用时间增加而降低。结论改良的组织块培养法可获得高纯的CCSM细胞；PDGFBB可促进CCSM细胞增殖、迁移，使细胞从收缩型向合成型转化，其机制可能是通过下调myocardin。
关键词： 血小板源性生长因子-BB 阴茎海绵体平滑肌细胞 表型转化 -
高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化
目的 探讨高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌是否存在表型转化及对勃起功能的影响.方法 16周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同系正常血压大鼠(WKY),测量尾动脉收缩压,颈部皮下注射阿朴吗啡后检测阴茎勃起功能,然后将大鼠分为高血压勃起功能障碍组(HBP&ED)、高血压组(HBP)和正常对照组(Control).免疫组化染色和彩色图文分析系统分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌细胞碱性调宁蛋白(calponin 1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,实时荧光定量RT-PCR分析各组大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞calponin 1 mRNA和OPN mRNA的相对表达量.结果 在大鼠阴茎海绵体中calponin 1和calponin 1 mRNA表达情况:HBP&ED组低于HBP组(P=0.021,P=0.006)和control组(P=0.000,P=0.001),HBP组低于control组(P=0.000,P=0.015);OPN和OPN mRNA表达情况:HBP&ED组高于HBP组(P=0.000,P=0.000)及control组(P=0.000,P=0.000),HBP组高于control组(PP=0.013,p=0.000).结论 高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞存在表型由收缩型向合成型转化,这种转化达到一定程度终可能导致大鼠勃起功能障碍.
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血管平滑肌细胞表型转化影响因素及中药干预研究进展
成熟分化的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)受机体不同刺激时具有表型可塑性,VSMCs由分化型和收缩表型转化为去分化型的过程称之为表型转化.VSMCs表型转化在动脉粥样硬化、高血压、血管成型术后再狭窄、糖尿病血管病变等增殖性血管疾病中具有重要作用.本文主要介绍VSMCs表型转化影响因素及中药干预VSMC表型转化的研究进展,为中药防治增殖性血管疾病提供新思路.
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PKC及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道的作用
[目的]比较蛋白激酶C (PKC)及蛋白酪氨酸磷酸化信号通路对大鼠股动脉平滑肌细胞(femoral artery smooth muscle cells,FASMC)和股静脉平滑肌细胞(FVSMC)上容积调节性氯通道的调节作用的差异,同时观察这一调节作用在动静脉平滑肌细胞表型转化过程中的变化.[方法]分别选取FASMC和FVSMC的原代,四代和八代作为观察血管平滑肌细胞表型转化的模型.采用全细胞膜片钳技术记录血管平滑肌细胞表型转化过程中容积调节性氯通道(VRCC)的变化以及蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂genistein、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)抑制剂sodium orthevanadate和蛋白激酶C激动剂PDBu对这一变化的调节作用.[结果]低渗溶液在动脉和静脉平滑肌细胞均可激活VRCC,且动脉平滑肌细胞的VRCC活性大于静脉平滑肌细胞.PTK抑制剂genistein对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有明显抑制作用且随着培养代数增加而逐渐增强；PTP抑制剂sodium orthevanadate对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有增强作用但逐渐减弱；PKC激动剂PDBu对原代、4代、8代大鼠FASMC和FVSMC的VRCC活性均具有抑制作用且逐渐增强.与同代的FASMC相比,genistein,sodium orthevanadate和PDBu对FVSMC的VRCC活性的调节作用更强.[结论]蛋白酪氨酸激酶、酪氨酸磷酸酶和蛋白激酶C对股静脉平滑肌细胞VRCC的调节作用强于股动脉平滑肌细胞.且随着血管平滑肌细胞由收缩型向合成型转化,VRCC的活性及酪氨酸蛋白的磷酸化调节作用均有逐渐增强的趋势,而蛋白激酶C对VRCC的抑制作用增强.
关键词： 容积调节性氯通道(VRCC) 动脉和静脉 表型转化 血管平滑肌细胞 -
Rho／Rock 信号通路在 TGF －β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞表型转化中的作用及可能机制
目的：探讨Rho／Rock信号通路在TGF－β1刺激大鼠颈内动脉平滑肌细胞（ ISMC）表型转化中的作用及可能机制。方法 ISMC随机分为两组：空白对照组和TGF－β1刺激组，以不同浓度（1、5、10、20、50 ng／mL） TGF－β1刺激细胞24 h，用荧光实时定量PCR法检测转凝蛋白（ SM22α）和骨桥蛋白（ OPN） mRNA的表达；再以上述得出的佳TGF－β1浓度刺激细胞，在不同时间（6、12、24、48 h）收集细胞，采用同样方法检测SM22α、OPN mRNA的表达水平；经无血清DMEM高糖培养基静止培养24 h后，随机分为以下各组：空白对照组、TGF－β1（10 ng／mL）刺激组及TGF－β1（10 ng／mL）＋法舒地尔（Fasudil）（10、30、50μmol／L）组，分别采用FQ－RT－PCR法检测SM22α、OPN、RhoA、Rock－1 mRNA的表达；Western blot法检测SM22α、OPN蛋白表达水平；根据实验结果用透射电镜观察各组细胞超微结构的相应变化。结果10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMCs 24 h达顶峰。 TGF－β1＋Fasudil组SM22αmRNA和蛋白表达水平较TGF－β1刺激组高（P＜0．01），且在Fasudil浓度为30μmol／L时达到高峰，随后下降；TGF－β1＋Fasudil组OPN mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低，呈浓度依赖性，至30μmol／L达低（ P＜0．05），后又呈上升趋势。 Western blot结果显示TGF－β1＋Fasudil组的OPN蛋白表达水平较TGF－β1刺激组低，至Fasudil浓度为30μmol／L达低（ P＜0．05）。同时FQ－RT－PCR结果显示TGF－β1刺激组的RhoA和Rock－1 mRNA表达水平较空白对照组高（P＜0．01），在Fasudil浓度为30μmol／L时TGF－β1＋Fasudil组的RhoA和Rock－1mRNA表达水平较TGF－β1刺激组低（ P＜0．05）。电镜下观察各组细胞显示，空白对照组（×20000） ISMC高尔基体肥大，线粒体及粗面内质网正常，10 ng／mL TGF－β1刺激后细胞内线粒体增多，在上述基础上加入30μmol／L Fasudil后电镜下观察细胞又回到正常成熟结构状态。结论10 ng／mL TGF－β1刺激大鼠ISMC 24 h可成功刺激其表型转化，且该过程可能通过Rho／Rock信号通路实现；Rho／Rock信号通路抑制剂Fasudil可增加TGF－β1刺激的SM22α的表达，下调OPN的表达水平，抑制大鼠ISMCs表型转化。
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巨噬细胞对组织的修复、再生和纤维化的调节作用研究进展
单核/巨噬细胞通过表型转化和功能的改变,调节着组织修复、再生和纤维化的过程.干扰巨噬细胞功能将导致组织异常修复,如炎症因子和生长因子分泌紊乱,抗炎巨噬细胞数目减少,巨噬细胞与上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、干细胞和祖细胞交流障碍.一系列的改变都能引起病理性纤维化.本文讨论巨噬细胞适应促炎、促纤维化、抗炎、抗纤维化、促溶解和组织再生等表型转化,并理解运用到治疗中巨噬细胞的机制及其活化状态.
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对肝肺综合征大鼠肺动脉平滑肌细胞表型转化及增殖的影响
目的:探讨3-MA对PASMCs表型转化及增殖的影响.方法:体外培养SD大鼠PASMCs,设立空白对照组和低(2.0 mmol/L)、中(4.0 mmol/L)及高剂量组(8.0 mmol/L).Western blot法检测不同浓度3-MA对PASMCs中自噬水平标志蛋白LC3Ⅱ、OPN以及Vimentin表达水平的影响;MTT法检测3-MA对PASMCs增殖的影响.结果:不同剂量3-MA作用于PASMCs后,细胞自噬水平和增殖能力降低,呈剂量依赖性;LC3Ⅱ、OPN以及Vimentin相对表达量均明显低于对照组(P＜0.05).结论:3-MA可以下调大鼠PASMCs的LC3Ⅱ表达,抑制PASMCs合成表型标志蛋白OPN、Vimentin的表达,显著降低PASMCs增殖能力.
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富含脯氨酸的酪氨酸激酶2信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化及主动脉夹层形成中的作用
目的 探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)信号通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞表型转化及主动脉夹层发生中的作用.方法 应用免疫荧光染色和免疫印迹法分析人体正常主动脉及夹层主动脉组织中Pyk2及磷酸化Pyk2(p-Pyk2)的定位和表达情况.将小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)分为对照组1(仅加入血管平滑肌细胞完全培养基)、0.01μmol AngⅡ组、0.1μmol AngⅡ组、1μmol AngⅡ组,加入相应的药物后处理24 h,免疫印迹法检测p-Pyk2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN)的表达水平.将MOVAS分为对照组2(仅加入血管平滑肌细胞完全培养基)、1.2μmol酪氨酸激酶抑制剂TAE226组、1μmol AngⅡ组、1.2μmol TAE226+1μmol AngⅡ组,加入相应的药物后均处理24 h,免疫印迹法检测p-Pyk2、α-SMA和OPN的表达量.结果 Pyk2和p-Pyk2在正常主动脉及夹层主动脉中均有表达,但在夹层主动脉中表达更高(均P<0.05).对照组1、0.01μmol AngⅡ组、0.1μmol AngⅡ组、1μmol AngⅡ组的p-Pyk2及OPN的表达量依次增加,而 α-SMA的表达量依次减少(均P<0.05).与对照组2比较,1.2μmol TAE226组p-Pyk2及 α-SMA蛋白的表达量降低,OPN蛋白的表达升高(均P<0.05);与1μmol AngⅡ组比较,1.2μmol TAE226+1μmol AngⅡ组p-Pyk2及OPN蛋白的表达量均降低,α-SMA蛋白的表达量升高(均P<0.05).结论 Pyk2信号通路可能通过介导AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞表型转化参与主动脉夹层的形成.
关键词： 主动脉夹层 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2 血管紧张素Ⅱ 血管平滑肌细胞 表型转化 -
Geminin基因过表达对VSMCs表型转化的影响
目的 探讨Geminin基因过表达对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化的影响.方法 构建真核表达载体pEGFP-N1 -Geminin,脂质体2000介导转染不同表型(去分化型和分化型)的大鼠VSMCs株,设置阳性组、阴性组和空白组(n=3),检测转染效果、VSMCs主要表型标志物(α-actin、OPN)和肌动蛋白相关蛋白1(actin related protein,ARPl)的变化情况.结果 Geminin基因成功过表达VSMCs株.与2个对照组(阴性组和空白组)比较,分化型VSMCs中表型标志物(α-actin和OPN)及ARP1含量变化不大；去分化型VSMCs中,OPN在阳性组中表达下调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P＜0.05),α-actin和ARP1在阳性组中表达上调,与2个对照组(阴性组和空白组)比较差异具有统计学意义(P＜0.05),免疫共沉淀实验结果提示经protein G plus-Agarose沉淀ARP1相互作用蛋白复合物后,用Geminin抗体进行Western blot检测,可以检测到Geminin的表达.结论 Geminin基因过表达有助于VSMCs由去分化型向分化型转化；免疫共沉淀结果提示Geminin和ARP1之间存在相互作用,ARP1可能参与了上述VSMCs表型转化过程.
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PPAR-γ在高血压血管平滑肌细胞表型转化中的作用
目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator activated reeeptors-γ,PPAR-γ)在高血压血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 应用基因重组技术使PPAR-γ过表达和表达抑制,Western blot方法 检测分化型VSMC标志物α-SMA和末分化型VSMC标志物OPN的蛋白表达,应用DNA合成率检测和细胞计数的方法 测定细胞增殖率,常规病理切片和HE染色观察血管形态学改变.结果 ①PPAR-γ激动剂罗格列酮可降低SHR大鼠血压,并改善丰动脉血管重构.②SHR大鼠主动脉中OPN表达增多而α-SMA表达减少,应用罗格列酮可抑制上述改变.③SHR大鼠来源的VSMC中OPN表达增多而α-SMA表达减少,细胞增殖率升高,PPAR-γ过表达使细胞增殖率降低,并抑制OPN和α-SMA的表达改变.结论 PPAR-γ可抑制高血压VSMC向未分化表型的转化,可能是其改善高血压血管重构的重要机制.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ 血管平滑肌细胞 血管重构 表型转化 -
氯化钴化学模拟低氧与低氧环境对大鼠肺动脉成纤维细胞的作用比较
目的 比较氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧及低氧环境对于原代大鼠肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖、迁移、表型转化的作用.方法 分离培养原代大鼠PAFs,利用CoCl2刺激细胞,或通过低氧细胞培养(1% O2)刺激诱导PAFs,通过CCK-8试验、细胞划痕、细胞迁移、表型转化标志蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达的实验结果比较CoCl2与低氧环境对于PAFs的作用.结果 与对照组相比,100 μmol/mL CoCl2刺激对PAFs的细胞增殖活力、迁移能力、细胞表型转化能力的作用无明显影响(P>0.05);而1% O2可以明显提高PAFs的细胞增殖活力和迁移活力,并可以使α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达上调(P<0.05).结论 CoCl2化学模拟低氧与低氧环境对PAFs的促增殖、促迁移、促表型转化作用存在差异.
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联合基因沉默TLR2、4对于LPA诱导的RASMCs表型转化的影响
目的 应用RNA干扰技术单一或者联合沉默Toll样受体(TLR)2、4基因,探讨其在溶血磷脂酸(LPA)诱导的平滑肌细胞(VSMCs)表型转化中的作用.方法 根据文献建立分化表型大鼠VSMCs(RASMCs)培养体系,予TLR2、4特异性小干扰RNA(siRNA)转染RASMCs,LPA 1μmol/L处理4 h后,荧光定量RT-PCR法、Western blot法检测分化和去分化细胞表型标志基因平滑肌肌动蛋白(SMA-α)和骨桥蛋白(OPN)基因及蛋白水平的表达.结果 TLR2、4-siRNA分别转染细胞后可显著抑制LPA诱导的RASMCs细胞SMA-α基因、蛋白下调及OPN基因、蛋白上调,TLR2、4联合干扰组对于LPA诱导的RASMCs细胞SMA-α基因、蛋白下调及OPN基因、蛋白上调的抑制作用较TLR2、4单独干扰组进一步加强.结论 TLR2、4信号通路参与了LPA诱导的表型转化,联合干预TLR2、4,有可能成为稳定动脉粥样硬化斑块、抗粥样硬化治疗的一个新途径之一.
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肾疏宁防治肾小球硬化机制的实验研究
目的:观察肾疏宁防治肾小球硬化的作用机制.方法:采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射建立大鼠肾小球硬化模型,观察肾疏宁给药8周后肾小球病理表现,免疫组织化学染色法观察肾小球内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)阳性表达,并进行图像分析.结果:肾疏宁治疗组肾小球内α-SMA、FN、 LN、 ColⅣ和系膜基质较模型组显著减少,与苯那普利无显著性差异.结论:肾疏宁能抑制肾小球系膜细胞表型转化,减少细胞外基质蓄积,对阿霉素肾小球硬化大鼠肾脏具有保护作用.
