首页 > 文献资料
-
α-毒素诱导的脐静脉内皮细胞凋亡在金葡菌L型垂直感染中的作用
目的 确定α-毒素诱导脐静脉内皮细胞(HUV-EC-C)的凋亡在金葡菌L型垂直感染中的作用.方法 在培养的HUV-EC-C细胞中加入不同浓度(0、10、30、90、270 ng/ml)的金葡菌α-毒素,处理不同时间(0、2、4、6、8h)后经Annexin V-PI染色,流式细胞仪检测HUV-EC-C细胞的凋亡率.通过ELISA检测α肿瘤坏死因子(TNF-α)、caspase-3与caspase-8的表达量,并观察加入TNF-α中口抗体、caspases-3抑制剂zDEVD-FMK、caspase-8抑制剂zIETD-fmk对α-毒素诱导HUV-EC-C细胞凋亡的影响.结果 α-毒素能够诱导HUV-EC-C细胞凋亡并表现为时间、剂量依赖性,明显增加HUV-EC-C细胞中TNF-α、caspase-3与caspase-8的表达；在加入TNF-α中和抗体、zDEVD-FMK、zIETD-fmk后可部分阻断α-毒素能够诱导的HUV-EC-C细胞凋亡.结论 α-毒素通过TNF-α及caspase-8介导的外源性死亡途径诱导HUV-EC-C细胞凋亡,表明α-毒素诱导内皮细胞凋亡是金葡菌L型垂直感染影响胎儿发育的主要机制之一.
-
黄芪注射液对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子的影响及其分子机制
目的 观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制.方法 体外培养的第2代HUVECs用于实验,免疫组织化学分析检测细胞NF-κβ亚单位p65的表达程度,Western blot检测核内NF-κβ含量变化,ELISA法检测培养液中IL-6、ICAM-1浓度.结果 TNF-α有效激活NF-κβ并诱导HUVECs分泌IL-6、sICAM-1增加;黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κβ表达并减轻TNF-α诱导的上述反应.结论 TNF-α可能通过激活NF-κβ使IL-6、sICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能;黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κβ途径实现血管内皮保护功能.
-
罗格列酮对TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞CF6表达的影响
目的 研究噻唑烷二酮类药物罗格列酮(ROS)对肿瘤坏死因子仅(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)核因子-κB(NF-κB)激活与线粒体偶联因子6(CF6)表达的影响.方法 体外培养的第3～5代HUVEC用于实验.采用RIA检测培养基中CF6的含量,用免疫组织化学分析检测细胞NF-κB亚单位p65的表达程度.结果 TNF-α能有效激活NF-κB并诱导HUVEC表达CF6增加;ROS干预能抑制NF-κB激活并减轻TNF-α诱导的HUVEC之CF6表达.结论 TNF-α通过激活NF-KB使CF6表达增加;ROS可抑制TNF-α对NF-κB激活,进而抑制NF-κB对CF6的表达上调,这可能是噻唑烷二酮类药物抗高血压的机制之一.
-
1型重组腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染人脐静脉内皮细胞的体外研究
目的 评价1型重组腺相关病毒(rAAV1)作为新生血管性角膜病变基因治疗载体的可行性.方法 rAAV1-EGFP按转染倍数(MOI)5×103,5×104,5×105转染ECV304细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察ECV304细胞中GFP阳性表达情况和细胞生长形态特点等,流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对EVE304细胞的转染效率.MTT法检测rAAV1-EGFP对EVC304细胞增殖的影响.结果 转染后2 d,MOI=5×105组细胞中的GFP开始表达;表达强度随MOI值的增高而增强,同时GFP的表达强度随着时间延长而逐渐增强,转染后第7天达到高峰,此时流式细胞仪检测rAAV1-EGFP对ECV304细胞的转染率分别为45.90％(MOI=5×103),58.56％(MOI=5×104),68.31％(MOI=5×105).AAV1-EGFP转染ECV304细胞后.细胞生长及形态正常.MTT法显示转染后72、96 h各转染组与未转染组之间A值无显著性差异.结论 rAAV1-EGFP对ECV304细胞转染稳定、有效,重组腺相关病毒对细胞增殖无明显抑制,重组腺相关病毒可作为基因治疗角膜新生血管性病变的载体.
-
异丙酚对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞内皮源型一氧化氮合酶基因启动子转录活性的影响
目的 探讨异丙酚对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内皮源型一氧化氮合酶(heNOS)基因启动子转录活性的影响.方法 以基因重组技术构建heNOS基因启动子区(-1～-1600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL2-Basic,得到质粒peNOS-Luc.采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和?-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-?共转染HUVEC,用LPS、LPS+异丙酚和LPS+转移生长因子?1(TGFb1)分别刺激转染后的HUVEC,检测并比较荧光素酶/?-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、异丙酚和TGF?1对heNOS基因启动子转录活性的影响.结果 (1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在HUVEC中有效表达;(3)与未加刺激组比较,LPS刺激组heNOS启动子的转录活性降低.与LPS刺激组比较,LPS+异丙酚和LPS+TGF?1组heNOS启动子的转录活性增强.结论 异丙酚能明显增强heNOS基因启动子的转录活性,可初步证实异丙酚在转录水平通过上调heNOS基因启动子的转录活性而影响NO的生成和释放,这可能是异丙酚防治LPS诱导引起炎症反应的机制之一.
-
低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染
目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率.方法 (1)将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37℃、5%CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验.(2)使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN的+/-电荷比率为2.(3)应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25μmo1/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率.结果在ECs中、4℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异.但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性.结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoyODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据.
-
不同条件温阳活血解毒复方血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响
[目的]探讨不同条件温阳活血解毒复方含药血清(YBTR)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖影响的差异.[方法]体外培养HUVECs细胞.含药血清制备:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分成生理盐水组及低、 中、 高剂量组(灌胃剂量分别为10.35、31.05、93.15 g·kg-1,每日2次)4组,分别在4个时间点(大鼠喂养第4天首次灌胃1 h、2 h后,第6天首次灌胃1 h、2 h后,以下分别用D3H1、D3H2、D5H1、D5H2表示)每组各取1只雌性大鼠和雄性大鼠采血制成含药血清.采用CCK8法观察各组含药血清对HUVECs增殖能力的影响.[结果]自不同性别大鼠和不同时间点采集的药物血清作用HUVECs后的细胞增殖抑制率比较,差异均有统计学意义(P性别=0.000<0.01,P时间=0.000<0.01),时间和性别的交互作用有统计学意义(P时间×性别=0.001<0.01),其中D3H2、D5H1随性别的不同而不同(PD3H2×性别=0.000<0.01、PD5H1×性别=0.002<0.01).随着D3H2雌性含药血清剂量的增加,其对HUVECs的增殖抑制作用也逐渐增加,其组间比较差异有统计学意义(P<0.05),整体趋势呈浓度依赖性.在雌性大鼠中,不同浓度组的含药血清对HUVECs的增殖抑制作用,在D3H2达到峰值后均出现下降;而在雄性大鼠中,低、 中剂量组含药血清在D5H1达到峰值,高剂量组则在D3H1达到峰值.[结论]选择雌性的大鼠在D3H2采血制备的温阳活血解毒复方含药血清对HUVECs的增殖抑制作用佳.
-
单核细胞黏附对内皮细胞表达组织因子的影响及其相关因素
目的研究人外周血单核细胞黏附对人脐静脉内皮细胞表达组织因子的影响及其相关机制.方法采用淋巴细胞分离液和Percoll分离法分离人外周血中的单核细胞与酶消化法培养的脐静脉内皮细胞共同培养,在不同的时间(1,2,6,12和18 h)采用一期血浆复钙时间法测定TF促凝活性,用RT-PCR法检测TFmRNA表达,免疫组织化学法检测细胞间黏附分子(ICAM-1)和TF蛋白的表达.结果单核细胞黏附脐静脉内皮细胞,2 h后内皮细胞上组织因子促凝活性和mRNA表达开始升高,6 h后促凝活性达到高峰,呈时间依赖性(P＜0.05);ICAM-1在单核细胞黏附脐静脉内皮细胞后的1 h,表达即显著升高(P＜0.01);组织因子在6 h后表达增多(P＜0.01),差异有显著性,两者呈正相关(r=0.723,P＜0.05).结论单核细胞黏附脐静脉内皮细胞是TF促凝活性和表达升高的原因之一,其黏附作用与ICAM-1的表达相关.
-
骨桥蛋白靶向干扰RNA对体外人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的:观测骨桥蛋白靶向干扰RNA对体外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖和凋亡的影响.方法:体外化学合成骨桥蛋白序列特异性的短发夹RNA(shRNA)质粒载体与阳离子脂质体结合介导转染HUVEC,同时设计空白载体转染对照和空白对照,用MTT法等方法检测各组HUVEC生长增殖情况的变化,并用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果:OPN-shRNA载体转染HUVEC后明显抑制细胞增殖(P＜0.05)和使细胞分裂周期出现阻滞,凋亡二倍体数量增加,凋亡率显著升高(P＜0.05).结论:骨桥蛋白靶向干扰RNA在体外能够抑制HUVEC的增殖,升高细胞凋亡率.
-
异丙酚在第三丁基过氧化氢诱导脐静脉内皮细胞氧化应激中的保护作用
目的:研究异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的保护作用和机制.方法:体外培养的HUVECs分为对照组、异丙酚组、t-BHP组、异丙酚预处理 + t-BHP组,给予相应处理后,Western blot检测p38 MAPK磷酸化水平变化,RT-PCR检测iNOS、eNOS表达.结果:t-BHP处理后,能显著诱导p38 MAPK磷酸化,激活iNOS、eNOS表达,而异丙酚预处理后能减轻这些变化.结论:异丙酚通过抑制p38 MAPK,减少iNOS、eNOS表达,减轻氧化应激从而起到保护HUVECs的作用.
关键词： 二异丙酚 氧化应激 脐静脉内皮细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶 一氧化氮合酶 -
黄芪注射液对脂多糖诱导内皮细胞损伤保护作用的实验研究
目的:观察黄芪注射液对脂多糖(LPS)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κB(NF-κB)激活与一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)分泌的影响.方法:体外培养的第2代HUVECs用于实验,用免疫组织化学分析检测细胞NF-κB亚单位p65的表达程度,利用硝酸还原酶法、非平衡放射免疫法、黄嘌呤氧化酶法、双抗体夹心ABC-ELISA法分别检测培养液中NO、ET、SOD以及ICAM-1含量.结果:LPS有效激活NF-κB并诱导HUVECs分泌NO、SOD减少,分泌ET、ICAM-1增加.黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κB表达,并减轻LPS诱导的上述反应.结论:LPS可能通过激活NF-κB使NO、SOD减少,ET、ICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能.黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κB这一途径来实现血管内皮保护功能的.
关键词： 黄芪 脂多糖 脐静脉内皮细胞 可溶性细胞间黏附分子-1 -
异丙酚对细菌脂多糖刺激的脐静脉内皮细胞NF-kB活性的影响
目的 研究异丙酚对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激之后的脐静脉内皮细胞(Human umbil-ical vein endothelial cells,HUVECs)的核因子kappa B(NF-kB)活性的影响,探讨异丙酚可能的抗炎机制.方法 选择3-4代HUVECs进行转板后都加入LPSlug/ml刺激.按刺激的时间和有无加入药物随机分为4组,A1、B1分别为LPS刺激2h对照组和异丙酚25umol/L组,A2和B2组分别为刺激8h的对照组和异丙酚25umol/L组.提取健康志愿者血液中的多形核中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN),测定PMN与HUVECs的粘附率:免疫细胞化学测定NF-kB65亚基的核阳性表达细胞百分率.结果 B2组的PMN粘附率(39.36±1.76)%与对照组A2(57.93±4.08)%比较都显著降低(P<0.05);NF-kB核阳性细胞率B2组(71.64±2.32)%比对照组A1(80.28±6.24)%,B2组(75.92±4.45)%比对照组A2(81.58±4.68)%显著降低(P<0.05).结论 异丙酚能有效抑制LPS刺激HUVECs后NF-kB活性的增加.抑制PMN与HUVECs的粘附,减轻机体的炎症反应.
-
内皮细胞微粒对人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1表达的影响
目的:探讨内皮细胞微粒(Endothelial microparticles,EMPs)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管细胞粘附分子-1(Vascular cellular adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间粘附分子-1 (Intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的影响.方法:取生长良好的第4、5代HUVECs,将细胞以1×105个/ml密度接种于5 cm2的培养皿中,待细胞生长近80％融合时进行干预.按0、1×102、1×103、1×104、1×105个ml浓度的EMPs进行分组及刺激,每组12个样本.在共同培养24h后收集细胞.分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测VCAM-1和ICAM-1 mRNA和蛋白的表达.结果:HUVECs受EMPs刺激,VCAM-1和ICAM-1 mRNA及蛋白表达显著增加,且EMPs的这种作用呈浓度依赖性增强(均P＜0.05).结论:EMPs能上调HUVECs VCAM-1和ICAM-1的表达,EMPs不仅是内皮功能障碍的标记物,还能加重内皮功能损害.
关键词： 内皮细胞微粒 脐静脉内皮细胞 血管细胞粘附分子-1 细胞间粘附分子-1 -
ACE2对脂多糖损伤人脐静脉内皮细胞的抗黏附作用
目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导血管内皮细胞损伤后细胞黏附性改变与血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)的表达变化的关系,探讨ACE2对血管内皮细胞损伤所致黏附性增加的对抗作用.方法 分别用不同浓度(0、10、100、1 000 ng/mL)LPS诱导人脐静脉内皮细胞(umbilical vein endothelial cell,HUVEC)致其损伤,人单核细胞白血病细胞(human acute monocytic leukemia cell line,THP-1)黏附实验观察HUVEC的黏附性改变.本实验设置4个实验组,分别为未经任何处理的空白对照组、1 000 ng/mL LPS处理6h的模型组、以10 μmol/L氯沙坦钾预处理模型组的氯沙坦钾组及以10 μmol/L A779预处理空白对照组的A779组(n=3).Western blot及RT-PCR法分别检测ACE2的蛋白和基因表达,ELISA法检测细胞上清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素1-7(Ang1-7)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的含量.结果 单核细胞黏附实验可见黏附在HUVEC上的THP-1呈绿色荧光,黏附细胞数呈LPS诱导浓度及时间依赖性显著增加(P＜0.01);Western blot结果显示,LPS诱导HUVEC损伤模型组中ACE2蛋白表达水平较空白对照组显著减少(37.33±3.50)％(P＜0.01);RT-PCR结果显示,模型组中ACE2 mRNA表达水平较空白对照组显著减少(26.31±2.19)％(P＜0.01);ELISA结果显示,模型组较空白对照组细胞上清Ang1-7显著降低(P＜0.05),AngⅡ及ICAM-1均显著升高(P＜0.01),氯沙坦钾处理组较模型组ICAM-1显著降低(P＜0.01),A779处理组较空白对照组ICAM-1显著升高(P＜0.05).结论 LPS诱导损伤HUVEC细胞后其黏附性增加与ACE2表达下调密切相关,提示ACE2具有一定抗黏附作用.
-
脐静脉内皮细胞诱导脐血单个核细胞向树突状细胞的分化
目的 探讨人脐静脉内皮细胞对人脐血单个核细胞(UBMCs)向树突状细胞(DC)分化的影响,建立更便捷、更经济体外培养DC的方法.方法 胶原酶消化分离出脐静脉内皮细胞(HUVEC),经鉴定和体外培养扩增后,使其平铺生长于Transwell板上室底部,将UBMCs接种到Transwell小室内,同时加入EC9706细胞冻融形成的蛋白质抗原,与HUVEC共培养,使UBMCs与HUVEC紧密接触并从Transwell板上室迁移到下室,收集Transwell板下室细胞,流式细胞术检测下室细胞DC相关表面标志CD80、CD40、CD83、CD1a和MHC分子;通过MTT法检测肿瘤负载的UBDC诱导CTL对靶细胞的特异性杀伤作用.结果 经HUVEC诱导并负载了肿瘤细胞抗原的DC CD80、CD40、CD83、CD1a和MHC-Ⅱ类分子表达增加,产生的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性杀伤食管癌细胞EC9706;与细胞因子诱导DC活化的CTL对EC9706的杀伤率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 利用Transwell小室以人原代脐静脉内皮细胞诱导脐血单个核细胞分化的DC是可行的一种实验方法.
-
微血管相关因素在瘢痕组织增生中作用的实验研究
瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕微血管有明显异常,是皮肤损伤后组织过度修复的结果.二者的发病机理尚不完全清楚.为进一步明确微血管及其相关因素在瘢痕增生中的作用,本课题采用免疫组化、原位分子杂交、脐静脉内皮细胞和皮肤成纤维细胞体外培养、同位素掺入、流式细胞仪分析等技术方法,对瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕组织中内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)的表达,细胞间粘附分子1的表达(ICAM-1),血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达,凋亡相关基因c-fos、bcl-2的表达,内皮细胞对成纤维细胞DNA和胶原合成的影响等微血管相关因素进行了研究.
-
艳山姜挥发油对脂多糖诱导损伤的血管内皮细胞保护作用研究
目的:研究艳山姜挥发油对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用,探讨艳山姜挥发油保护血管内皮细胞炎性损伤的可能机制.方法:MTT法建立LPS(15 μg/ml,作用12h)诱导体外培养的HUVECs炎性损伤模型.阿司匹林(4mM)及挥发油不同剂量(0.25～4μg/l)于造模前干预保护1h后,再加入LPS复制HUVECs炎性损伤模型.MTT法分析细胞存活率,生化酶学法测定培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测培养上清液TNF-α、IL-1、IL-6、ET-1、AngⅡ的含量.结果:与空白组比较,LPS诱导损伤的HUVECs细胞存活率显著降低,培养上清波LDH活力明显增加,内皮细胞TNF-α、IL-1、IL-6、ET-1、AngⅡ分泌与释放增多.艳山姜挥发油(0.25、1、4μg/l)干预给药后均能显著改善和逆转上述改变.结论:艳山姜挥发油对脂多糖诱导的HUVECs损伤具有保护作用,其机制可能与其减少TNF-α、IL-1、IL-6分泌释放,抑制炎症反应;及降低ET-1、AngⅡ水平,改善血管内皮功能状态有关.
-
同种异体NK细胞对人脐静脉内皮细胞ECV304的杀伤活性差异及分子机制探讨
目的 探讨供者KIR分子表达差异对NK细胞杀伤人脐血内皮细胞系ECV304活性的影响,并观察参与杀伤的活化信号通路.方法 RT-PCR及流式细胞仪检测ECV304细胞NKG2D配体MICA/B、ULBP1-3表达,PCR-SSP法行HLA-A、B、Cw分型.自8例健康供者分离外周血NK细胞,流式细胞仪检测KIR2DL1的表达率,LDH释放法测定NK细胞在效靶比20∶1时对ECV304细胞的杀伤活性及anti-KIR2DL1mAb对NK细胞杀伤活性的影响.结果 ECV30细胞在mRNA水平表达MICA/B、ULBP1-3,但在膜蛋白水平均不表达.HLA分型表明,ECV304表达KIR2DL1的配体,而不表达KIR2DL2/3、KIR3DL1的配体.8例健康供者NK细胞KIR2DL1表达率有较大差异,对ECV304细胞的杀伤活性也有不同,双变量相关分析示个体KIR2DL1表达率与NK细胞对ECV304的杀伤率存在负相关(rS=-0.994,P=0.000).anti-KIR2DL1 mAb明显增强NK细胞对ECV304的杀伤活性(t=-4.860,P=0.002).结论 NK细胞对ECV304细胞的杀伤分子机制主要为HLA-KIR信号系统错配,目前已知的NKG2D配体MICMB、ULBP1-3并不参与,这有助于临床活体器官移植时在遗传指导下选择供体.
关键词： NK细胞 脐静脉内皮细胞 HLAⅠ类分子 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 -
血管内皮细胞在切应力刺激后Toll基因的表达变化
目的:本室先前的实验观察到原代培养的贴壁融合脐静脉内皮细胞层流刺激后,IL-8 mRNA的增强表达和NF-κB的活化.本文探讨Toll蛋白在切应力诱导血管内皮细胞表达趋化细胞IL-8基因表达中的可能作用.方法:从正常对照和层流刺激后的原代培养的人脐静脉内皮细胞提取总RNA,根据TLR-2和TLR-4cDNA序列设计特异引物,应用RT-PCR技术扩增其cDNA片段,并经DNA序列测定于以证实.RT-PCR产物经凝胶电泳后,在凝胶成像分析仪上进行电泳条带的灰度半定量分析.
-
血红素加氧酶-1在高糖诱导的间充质干细胞损伤中的作用研究
本研究旨在探究血红素加氧酶-1(HO-1)高表达能否抑制高糖诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的损伤.实验采用高糖刺激BMSCs,通过激动剂和抑制剂分别上调和抑制BMSCs内HO-1的表达.通过MTT和ELISA 法分别检测BMSCs的增殖及分泌生长因子的能力.通过划痕实验以及Transwcll实验检测BMSCs条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖及迁移能力的影响.研究发现,HO-1高表达不但可以促进BMSCs自身增殖,而且可以促进BMSCs分泌血管内皮生长因子(VEGF),进而加速HUVECs的增殖和迁移.结果表明,HO-1高表达的BMSCs不但可以抑制高糖损伤,而且可通过旁分泌促进血管内皮细胞的增殖和迁移,可能对糖尿病血管并发症的治疗具有重要作用.
