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CTLA4Ig局部转基因对小肠移植急性排斥的治疗作用
目的:研究CTLA4Ig基因在移植小肠局部表达及其表达产物对急性排斥反应的治疗作用.方法:建立SD→Wistar的大鼠异位小肠移植模型,并随机分为实验组(CTLA4Ig转基因组)和对照组(非转基因组).实验组供肠移植前经肠系膜上动脉注入脂质体包裹的CTLA4Ig cDNA,术后应用免疫组织学检查移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达.移植术后3,7,10 d分别获取各组的移植小肠进行组织学检查及细胞凋亡测定.结果:经CTLA4Ig cDNA处理的小肠在移植术后可见大量的CTLA4Ig表达.对照组移植肠在术后7,10 d分别出现Ⅰ,Ⅱ度急性排斥反应,同时凋亡细胞数量显著增加.实验组移植肠术后未见排斥反应的病理学证据,凋亡细胞偶见.结论:CTLA4Ig基因可在移植小肠局部转染表达,其表达产物可防止移植术后急性排斥反应的发生.
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脂质体介导核因子-κB诱捕物寡聚脱氧核苷酸对重症急性胰腺炎大鼠胰腺炎症因子mRNA表达和胰腺损伤的影响
目的:探讨脂质体(liposome)介导核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)诱捕物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(ODN)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺NF-κB活性及受其调控炎症因子基因mRNA表达和胰腺损伤的影响.方法:除假手术组(n=10)外,其余SD大鼠以牛磺胆酸钠(STC)诱导建立重症急性胰腺炎模型后,分别于建模后1 h静脉注射裸ODN(n=10)、脂质体/decoy ODN复合物(n=10)、脂质体/scrambled ODN复合物(n=10)和生理盐水(n=10),注射4 h应用电泳迁移率变动分析(EMSA)NF-κB的活性,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α,VCAM-1 mRNA表达,同时检测血淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织髓过氧化物酶(MPO).结果:EMSA显示,脂质体/decoy ODN复合物组NF-κB活性明显低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(P＜0.05).RT-PCR结果显示,脂质体/decoy ODN复合物组ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA表达低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(ICAM-1:0.75±0.13 vs 1.39±0.15,1.37±0.16,1.32±0.17,P＜0.05;IL-1α:0.64±0.09 vs 1.34±0.20,1.30±0.14,1.25±0.20,P＜0.05;IL-2:0.23±0.08vs 0.74±0.13,0.71±0.12,0.69±0.14,P＜0.05;TNF-α:0.41±0.13 vs 1.30±0.17,1.26±0.17,1.23±0.20,P＜0.05;VCAM-1:0.21±0.06 vs 0.68±0.13,0.69±0.15,0.63±0.13,P＜0.05).与生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组相比,脂质体/decoy ODN复合物组淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织MPO活性显著性降低(淀粉酶:50931.85±22432.15 nkat/L vs 188024.26±38659.56,188412.68±37988.26,183119.95±33636.23nkat/L,all P＜0.05;湿/干重比率:5.76±0.20 vs 6.77±0.18,6.72±0.18,6.35±0.12,P＜0.05;MPO活性:46.68±3.00 nkat/g vs 99.02±2.50,98.19±2.83,98.52±2.50 nkat/g,P＜0.05).结论:NF-κB decoy ODN可特异性抑制胰腺NF-κB活性及其调控的炎症因子ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA的表达,减轻胰腺损害.
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转铁蛋白阿霉素脂质体的制备及其对人肝癌细胞系的杀伤活性
目的:利用正常肝细胞和肝癌细胞表面转铁蛋白受体以及亲和力的差异,用转铁蛋白修饰脂质体,使脂质体具有导向肝癌细胞的靶向性,分析其对肝癌细胞系的杀伤作用.方法:超声法制备阿霉素脂质体,暴露脂质体上的巯基,然后用双功能交联剂N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫代)丙酸酯(SPDP)交联HTf(Fe)2和脂质体,制备成HTf(Fe)2-阿霉素脂质体.用MTT法分析HTf(Fe)2-阿霉素脂质体对人肝癌细胞系SMMC-7721的杀伤力.结果:实验检测HTf(Fe)2与脂质体的交联率为73.5%,电镜观察修饰后的脂质体呈单层状,平均直径56±38 nm,未用HTf(Fe)2修饰的脂质体直径平均为54±30 nm,两者无显著差异.SPDP修饰和脂质体交联不影响HTf(Fe)2的活力.MTT法分析发现,当浓度为0.10 mg/L时HTf(Fe)2阿霉素脂质体、无HTf(Fe)2阿霉素脂质体及游离阿霉素对肝癌细胞的杀伤率分别为64.52%,22.12%和37.82%,前一组与后两组之间有显著差异(P＜0.05).结论:HTf(Fe)2阿霉素脂质体体外杀伤肝癌细胞系SMMc-7721具有用药量小、高效、特异性强等优点,为体内应用治疗肝癌提供了实验依据.
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诱导型一氧化氮合酶基因启动子-969G→C多态性的功能
目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子-969G→C多态性的功能意义.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增已知的iNOS基因启动子-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子DNA序列,再采用基因重组技术将获得的启动子与PGVB-2-E荧光素酶载体质粒连接,构建新的重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,并进行酶切图谱分析和测序分析.然后将重组质粒分别在脂质体的介导下转染HepG2细胞,检测荧光素酶的表达水平,分析不同基因型启动子的活性差异.结果:成功构建iNOS基因-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子荧光素酶载体重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,发现iNOSmt启动子的活性比对照启动子的活性显著升高,升高132.1%,差异有显著性(P＜0.05),iNOSwt启动子的活性比对照启动子的活性升高14.3%,差异无显著性(P＞0.05).iNOSmt启动子活性升高的百分率是iNOSwt启动子的9倍.结论:iNOS基因启动子-969G→C的多态性改变导致该启动子的活性增强.
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反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞生长的抑制作用
目的:利用反义核酸技术,研究体外胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)反义寡核苷酸转染对肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性.方法:合成针对IGF-Ⅰ的寡核苷酸片段,利用脂质体包裹反义IGF-Ⅰ寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法检测细胞增生;放免法检测培养细胞上清中AFP,CEA的分泌量;免疫组化法检测转染细胞AFP,PCNA表达的变化;采用末端标记(Tunel)法检测细胞凋亡的变化.结果:MTF法检测转染反义IGF-Ⅰ寡核苷酸的人肝癌细胞系BEL-7402A值由0.44±0.09下降为0.30±0.07(P＜0.01),上清液AFP和CEA水平分别由12.5±2.2 μg/L和6.8±2.3μg/L下降为2.5±0.3μg/L和2.2±1.5μg/L(P＜0.01,P＜0.05),凋亡阳性细胞数由16.4±2.3%增加至23.1±3.7%(P＜0.05).结论:反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞可以降低细胞增生,减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡.
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p16对HHCC细胞生长的抑制作用
多肿瘤抑制基因(Multiple Tumor SuppressorI,MTSI)是一个能直接作用于细胞周期的新型抑癌基因,其编码蛋白为Mr16 000,故又称p16基因.由于P16已经逐步发展成为抗肿瘤的一种新的方法,因此我们采用p16基因的真核表达载体,转染入人肝细胞癌(HHCC)细胞株,用杂交、免疫组化及流式细胞仪方法对HHCC细胞生长进行观察.
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TK基因联合GCV治疗胃癌的实验
胃癌是威胁人类常见的恶性肿瘤之一[1],目前的治疗方法主要是手术和化疗.但对中晚期胃癌的疗效却欠理想[2].基因治疗为恶性肿瘤的治疗开辟了新的途径[3].自杀基因(suicide gene)为目前研究较多的基因.TK基因(单纯疱疹病毒胸苷激酶基因herpes simplxvirus-thymidinekinase,HSV-TK)即为自杀基因之一,它能将其作用的前药9-丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)转化为磷酸化GCV,干扰细胞DNA合成,导致转基因细胞的死亡.
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脂质体肝靶向递药系统及其在肝脏疾病中的研究进展
脂质体靶向治疗主要分为主动靶向、被动靶向及物理化学靶向.在脂质体肝靶向方面,主动肝靶向脂质体以其专一性逐渐受到关注,可用于肝纤维化、肝炎等多种肝脏疾病,尤其对于慢性肝脏疾病.同时,粒径可控制脂质体的被动肝靶向,而物理化学肝靶向脂质体对治疗肝癌有一定优势.本文主要以近年来国内外的文献为依据进行了阐述和分析.
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c-myc 调节人端粒酶逆转录酶启动子活性的体外研究
目的研究c-myc对人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的调节作用.方法采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肿瘤细胞、猴肾COS-7细胞和NIH3T3细胞,孵育48 h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性.结果载有hTERT 800 bp启动子的质粒TERTLuc(800)在肿瘤细胞HepG2中活性显著增强,比对照质粒pXP高11.7倍,而在正常细胞3T3中未见表达.外源性转录因子c-myc可显著上调hTERT启动子的表达,其激活作用与剂量呈正相关.人工突变c-myc结合位点明显降低hTERT启动子的活性,下调作用达46%;外源性c-myc对其结合位点突变的hTERT启动子无明显上调作用.结论 c-myc可直接激活hTERT启动子的表达,是调节端粒酶活性的重要转录因子.
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胆固醇脂质体对兔胆道口平滑肌收缩性的影响
目的研究兔胆道口括约肌(sphincter of Oddi,SO)平滑肌细胞在胆固醇脂质体作用后收缩性的变化,探讨高胆固醇血症兔SO动力异常的机制.方法取纯种新西兰兔SO段,用Ⅱ型胶原酶消化获得单个平滑肌细胞,与胆固醇/卵磷脂摩尔比为2:1和0.5:1的胆固醇脂质体(1 g/L)分别孵育2 h后,用不同浓度KCl(9-24)mmol/L,乙酰胆碱(10-12～10-6)mol/L作用于平滑肌细胞,激动剂作用后30s,加入丙烯醛固定,分别测量各组细胞的收缩百分比.结果兔SO平滑肌细胞平均长度为(143.7±12.3)μm,经胆固醇脂质体作用后平均长度无明显变化,对KCl和乙酰胆碱呈浓度依赖性收缩.KCl(18 mmol/L)诱导大收缩比为22.2%±0.7%,而2:1的胆固醇脂质体作用后收缩比为16.5%±0.6%(P<0.01);乙酰胆碱(10-7mol/L)诱导大收缩比为20.3%±1.4%,2:1的胆固醇脂质体作用后收缩比为16.5%±1.3%(P<0.05).摩尔比为0.5:1胆固醇脂质体作用后大收缩比分别为21.3%±1.4%和19.2%±1.1%,同对照组相比无显著下降.结论兔SO平滑肌细胞经摩尔比2:1的胆固醇脂质体后起收缩性下降,推测这是高胆固醇血症可以导致兔SO的动力异常的机制.
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P16真核表达载体的构建及其对肝癌细胞生长的抑制作用
目的构建pcDNA3/p16真核表达质粒并了解其对肝癌细胞BEL-7404生长的抑制作用.方法将p16 cDNA亚克隆至pcDNA3真核表达载体上,并经脂质体介导转染至BEL-7404细胞中.应用MTT法和流式细胞仪分析转染细胞生长情况和细胞周期.结果重组pcDNA3/p16表达质粒构建成功.经pcDNA3/p16转染的BEL-7404细胞生长速度受到明显抑制,且细胞多停滞于G0/G1期.结论重组pcDNA3/p16质粒能在BEL-7404细胞内表达,且能抑制BEL-7404细胞的生长.
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MAPK信号转导通路与生存素反义寡核苷酸诱导人胃癌细胞凋亡的关系
目的:探讨分裂原激活的蛋白激酶家族(MAPK)信号转导通路与脂质体生存素(survivin)反义寡核苷酸转染诱导人胃癌细胞系HS-746T凋亡的关系.方法:设计合成survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染胃癌HS-746T细胞,分空白对照组,脂质体和正义链转染组,100,200,400 nmoL/L反义链转染组及P38MAPK、ERK1/2抑制剂组.用流质细胞仪检测转染后2,4,8,12,24 and 48 h各组细胞增生和凋亡指数.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学染色法、Western blot蛋白免疫印迹法、免疫沉淀法及激酶活陛测定法检测各对照组及ASODN组转染后survivin mRNA和P38MAPK,ERK1/2,survivin蛋白表达和活性的变化.结果:不同时间空白组、脂质体和正义链转染组ERK1/2,P38MAPK表达均无明显差异,各浓度survivin ASODN转染组凋亡细胞增多,凋亡指数高于其他对照组.P38MAPK抑制剂组凋亡细胞减少,ERK1/2抑制剂组增多.SurvivinnRNA和蛋白表达随着转染浓度的增加而降低.磷酸化和非磷酸化细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulatedkinase1/2,ERK1/2)的表达随药物浓度增加而减弱.P38MAPK的表达在各组均相同,但ASODN转染组活性增高.结论:Survivin基因反义寡核苷酸在体外可能通过MAPK信号转导通路激活凋亡相关的信号途径P38MAPK,阻断与细胞增生相关的信号途径ERK1/2来诱导胃癌细胞凋亡,抑制人胃癌细胞的增生
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应用脂质体凝集反应板快速检测活动性结核病患者抗原
背景:共有1 360例临床确诊的肺内结核、肺外结核患者标本及其他非结核标本.目的:建立一种快速、敏感、特异的检测不同临床标本中结核分枝杆菌糖脂抗原的方法.研究设计:在1-乙基-3-3-二甲基氨丙基碳化二亚胺氢氯化物和N-羟基丁二酰胺溶液中将亲和纯化的兔抗糖脂抗体(IgG)结合在脂质体颗粒(0.2～0.4 um)上,制备 TB/M 检测板的反应试剂.结果:当检测样本中存在糖脂抗原时,连接抗体的脂质体在 4min 内会出现1个深蓝色的凝集点.而正常健康人或其他疾病患者的样本未见凝集点.结果显示该方法检测活动性肺结核患者临床样本中的结核分枝杆菌糖脂抗原的敏感性可低至1ng/ml,临床灵敏度为97.4%,特异性为96.9%.结论:TB/M检测试验比较经济(一次检测只需4个印度卢比或0.09美元)、快速(4 min),似乎有助于结核病流行国家大规模检测结核性脑膜炎、肺结核和其他肺外结核患者多种生物学标本(脑脊液、胸液、关节液、血清和组织活检标本).
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氯磷酸二钠对急性坏死性胰腺炎大鼠肝损伤的影响
目的 探讨氯膦酸二钠对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠肝损伤的保护作用.方法 SD大鼠48只,按随机表法分为对照组、ANP组和氯磷酸二钠组.采用胰腺被膜下均匀注射5%牛磺胆酸钠制作ANP模型.利用薄膜法制备包裹氯磷酸二纳的脂质体.ANP组和氯磷酸二纳组于制模后立即经尾静脉分别注射空白脂质体和包裹氯磷酸二钠的脂质体.制模后2.6 h分批处死动物,取血检测血清淀粉酶(AMS)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及IL-6、IL-12的含量,取肝脏和胰腺组织,观察病理学变化.结果 对照组、ANP组和氯磷酸二纳组6 h点的ALT含量分别为(73±11)U/L、(257±33)U/L和(184±29)U/L;AST分别为(190±32)U/L、(590±70)U/L和(430±52)U/L;AMS为(814±80)U/L、(5031±471)U/L和(2843±236)U/L;IL-6为(26.7±5.7)pmol/L、(218.0±4.7)pmol/L和(112.3±8.0)pmol/L;IL-12为(4.2±1.0)pmol/L、(309.5±8.5)pmol/L和(153.7±6.3)pmol/L.ANP组和氯磷酸二纳组上述血清指标均显著高于对照组,而氯磷酸二纳组的含量又较ANP组显著降低(P值均<0.01).氯磷酸二纳组大鼠的胰腺及肝脏病理变化均较ANP组明显减轻.结论 静脉给予脂质体包裹的氯磷酸二纳对ANP大鼠的肝损伤具有一定保护作用.
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脂质体作为药物载体增强亚硒酸钠消退动脉粥样硬化
目的研究脂质体作为心血管药物载体包裹亚硒酸钠(Na2SeO3)治疗动脉粥样硬化(AS).方法32只雄性新西兰大耳白兔随机分成AS对照组,硒(Se)治疗组和含硒脂质体(Se-LPS)治疗组;超声法制备出特定含硒脂质体(Se-LPS).通过测量不同时段血浆Se含量的变化,了解脂质体的稳定性;通过测定不同组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,推测脂质体的靶向性;病理学方法检查各对比组主动脉粥样斑块的面积和厚度.结果Se-LPS治疗组,注入药液后1d,其血浆Se含量仍处动态(与用药4d后的相比,P＜0.05);其血液和心脏GSH-PX活性上升明显高于Se治疗组(P＜0.05),而其肾GSH-PX活性上升低于Se治疗组(P＜0.05).结论直径0.5～0.7μm的刚性脂质体具有一定靶向性,改变了Se的分布去向,适合作心血管药物的载体,包封Se后,消退AS斑块更明显.
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微小RNA对内皮细胞炎性反应过程中血管内皮细胞黏附分子1表达的影响
目的 研究微小RNA(miRNA,miR-126)及血管细胞黏附分子1(VCAM-1)在脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的表达,探讨miR-126对内皮细胞炎性反应过程中VCAM-1表达的影响.方法 HUVEC培养后分6组,空白对照组,模型组,miR-126mimic组,miR-126 inhibitor组,A组和B组,后4组用Lipofectamine 2000脂质体分别转染miR-126 mimic、miR-126 inhibitor及miRNA mimics control、miRNA inhibitor control 24 h后,加脂多糖1 μg/ml刺激,在8h时,用实时荧光定量PCR检测miR-126、VCAM-1 mRNA表达;Western blot法测VCAM-1蛋白表达,并进行比较.结果 模型组miR-126 mRNA较空白对照组降低,为(0.056±0.004)倍(P＜0.01),而VCAM-1 mRNA较空白对照组升高(l2.50±2.55)倍(P＜0.01),VCAM-1蛋白表达明显升高(P＜0.01).miR-126mimic组miR-126 mRNA相对表达较A组升高(51.18±2.30)倍(P＜0.01),VCAM-1 mRNA相对表达为A组(0.81±0.04)倍(P＜0.01),VCAM-1蛋白表达较A组明显降低(P＜0.01);miR-126 inhibitor组miR-126mRNA表达较B组降低(0.032±0.011)倍(P＜0.01),VCAM-1 mRNA水平较B组高(1.42±0.10)倍(P＜0.05),VCAM-1蛋白表达较B组明显升高(P＜0.05).结论 过表达miR-126在8h时下调VCAM-1的表达,提示miR-126可能通过抑制VCAM-1的表达,参与抑制脂多糖诱导的HUVEC的炎性反应.
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大鼠微小RNA-22腺病毒载体的构建和鉴定
目的：构建并鉴定大鼠miR-22腺病毒载体，制备具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期研究miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制奠定基础。方法化学合成目的基因序列（含酶切位点），对目的基因进行PCR扩增、酶切，酶切后的目的基因与酶切后的GV202载体连接产生miR-22腺病毒表达载体，将连接好的产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞获得大量阳性克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定及测序鉴定。利用脂质体2000试剂，让成功构建的miR-22重组腺病毒载体和腺病毒包装质粒共转染人胚肾293细胞，得到重组腺病毒，完成重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定。结果成功构建了大鼠miR-22腺病毒载体。经重组腺病毒扩增、纯化及滴度测定，终获得的重组腺病毒滴度为1×109 PFU/ml。结论成功构建制备获得了具有一定滴度含miR-22基因的重组腺病毒，为后期顺利开展有关miR-22在心肌缺血再灌注损伤中的作用及分子机制研究提供了可能。
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氧化应激调节klotho基因启动子活性的作用研究
目的 研究氧化应激对klotho基因启动子活性的影响及抗氧化系统的作用.方法 构建klotho基因启动子片段的荧光素酶报告基因重组质粒,将重组质粒和内对照质粒海肾荧光素酶报告质粒以脂质体法共转染Hela细胞,以0、400、600、800和1000μmol/L的过氧化氢处理Hela细胞,依次分为对照组、1组、2组、3组和4组,观察klotho基因启动子的活性变化,并分析总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和过氧化氢酶(CAT)等抗氧化酶的活性变化对此过程的影响.结果 与对照组比较,1组的klotho基因活性无明显改变(P＞0.05);2组、3组和4组的klotho基因启动子活性下降(P＜0.01),2组、3组和4组T-AOC、CAT和GSH-PX活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01),与2组比较,3组和4组T-AOC和GSH-PX活性明显降低(P＜0.05).klotho 基因启动子活性下降与T-AOC、CAT和GSH-PX活性下降呈正相关(r=0.805、0.812、0.944,P=0.00).结论 氧化应激下调klotho基因的表达,可能与其下调该基因的启动子活性密切相关,且氧化应激过程中抗氧化酶活性的变化与klotho基因启动子活性的下降可能相关.
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尿激酶热敏脂质体的体内溶栓实验
目的 观察以二棕榈酸磷脂酰胆碱和尿激酶(UK)为原料制备的UK热敏脂质体对兔颈总动脉血栓的溶栓效果.方法 采用反相蒸发法制备UK热敏脂质体并测定其包封率;新西兰大白兔24只随机分为对照组(输PBS液)、15万U/kgUK组、5万U/kg UK热敏脂质体组、7.5万U/kg UK热敏脂质体组,每组6只;FeCl3包裹兔颈总动脉,建立血栓模型;颈动脉压降至低点时,分别给4组输入不同药物,记录血压动态变化;后取各组血栓段血管和心、肝、脾、肺、肾做病理学检查.结果 所制备的UK热敏脂质体包封率为65%,脂质体呈圆形或椭圆形,直径为0.08～0.36 μm;7.5万U/kg UK热敏脂质体组与15万U/kg UK组比较溶栓效果相似,但前者UK用量仅为后者的1/2,且各脏器均未见出血.结论 UK热敏脂质体在溶栓治疗中有良好的靶向性,且出血副作用小.如能进一步优化,可为临床的溶栓治疗提供一条新途径.
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微小RNA-155调节钙调磷酸酶和活化T细胞核因子4表达对心肌细胞肥大的影响
目的 研究微小(microRNA,miR)-155对心肌细胞肥大的影响及对钙调磷酸酶(CaN-β)和活化T细胞核因子4(NFAT 4)表达的调控作用.方法 培养大鼠心肌细胞H9C2(2-1),血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导心肌细胞肥大,脂质体转染法将miR-155模拟物和miR-155抑制物转染入心肌细胞.分为对照组、AngⅡ组、mimics组、inhibitors 组、AngⅡ+mimics组和AngⅡ+inhibitors组.实时荧光定量PCR检测心肌细胞miR-155的表达.逆转录PCR法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)和CaN-β mRNA表达水平.Western blot法检测CaN-β和NFAT-4蛋白表达水平.结果 与AngⅡ组比较,AngⅡ+mimics组ANP、β-MHC、心肌细胞表面积、CaN-βmRNA和蛋白表达及NFAT-4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CaN-β可能为miR-155的作用靶点,miR-155可通过负性调控CaN-β和NFAT-4的表达,减少心肌细胞ANP和β-MHC表达,抑制心肌细胞肥大.
