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RP-HPLC测定叶黄素脂质体的含量
目的:建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定叶黄素脂质体的含量.方法:采用Diamonsil(2)C18 (5μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱,以100％纯乙腈为流动相,流速0.6 mL·min-1,检测波长为443 nm,进样量20 μL.结果:叶黄素的线性范围为6.96～69.57 μg·mL-1(r=0.999 8),平均加样回收率(n=9)为98.8％.3批样品的含量分别为98.61％、96.17％、100.51％.结论:本方法适用于叶黄素脂质体的含量测定.
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HPLC法测定米铂脂质体中米铂的含量
目的:建立米铂脂质体中米铂的含量测定方法.方法:采用HPLC法测定米铂脂质体中米铂的含量.色谱条件:采用Agilent C8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(92:8)为流动相,流速1.0mL· min-1,检测波长210 nm,柱温30℃,进样量20 μL.结果:色谱分离度R=2.91,阴性对照无干扰;米铂在3.37～115.11μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);低、中、高3种浓度的平均回收率分别为97.1％(RSD=0.90％,n=3)、97.0％(RSD=0.10％,n=3)和98.7％(RSD=0.59％,n=3);日内精密度RSD=0.75％(n=6),日间精密RSD=1.0％(n=6);流速在0.99～1.01 mL· min-1范围内变化时RSD=0.49％(n=9),柱温在28～32℃之间变化时RSD=1.7％(n=9).结论:本文建立的方法简便易行,稳定,准确,专属性强,耐用性好;可定量检测米铂脂质体中米铂的含量.
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RP-HPLC法测定紫杉醇脂质体的药物包封率
目的:建立紫杉醇脂质体药物包封率的测定方法.方法:采用葡聚糖凝胶G-50柱色谱法分离紫杉醇脂质体和游离药物,用RP-HPLC法检测紫杉醇的量,计算脂质体中紫杉醇的包封率;色谱条件:采用Platisil-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(含0.1％三乙胺和0.67％冰乙酸)(80∶20)为流动相,流速1.0 mL· min-1,检测波长227 nm,柱温为室温.结果:紫杉醇与辅料及溶剂的色谱峰分离良好,峰形很好;紫杉醇线性范围0.5～50 μg·mL-1(r=0.999 3),加样回收率范围为99.66％～100.8％,包封率范围为90.29％～91.65％.结论:本方法能快速检测紫杉醇脂质体中紫杉醇含量及包封率.
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LC-MS/MS法测定Beagle犬血浆中紫杉醇及其药代动力学研究
目的:建立LC-MS/MS分析方法用于检测Beagle犬血浆中紫杉醇浓度,并研究注射用紫杉醇脂质体的药代动力学.方法:12只Beagle犬随机分成2组后分别i.v.给予1 mg·kg-受试制剂与参比制剂,在不同时间采集血浆样品,采用C18反相色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1％醋酸水溶液(85∶15,v∶v),以多烯紫杉醇为内标,电喷雾离子化(ESI),正离子扫描模式,多反应离子检测(SRM),紫杉醇[M+Na+]m/z 876.4→591.3,内标多烯紫杉醇[M +Na+] m/z830.4→303.9,应用DAS 2.0药代动力学计算程序计算药代动力学参数.结果:紫杉醇的检测浓度范围在3～2000 ng·mL-1呈线性相关(r =0.9980);定量下限为3 ng·mL-1;批内和批间变异均小于15.0％.紫杉醇给药后血药浓度-时间曲线符合二室模型,受试药物和参比制剂的主要药代动力学参数t1/2、Cmax、MRT0-24、AUC0-24和AUC0-∞分别为(7.3±2.0)h和(7.2±2.5)h、(796.1±321.8)ng·mL-1和(1248.0 ±178.6)ng· mL-1、(6.2±1.1)h和(5.3±0.8)h、(948.4±100.2)ng·h·mL-1和(969.7±322.1)ng· h· mL-1、(1022.1±232.7)ng·h·mL-1和(1084.0±304.1)ng·h·mL-.结论:本分析方法对血浆中紫杉醇的检测具有专属性,且灵敏、可靠,对上述药代动力学参数以SAS统计软件进行双侧t检验,结果表明给予受试制剂及参比制剂后犬的主要药代动力学参数差异无统计学意义(P＞0.05).
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脂质体中药物包封率的测定方法
本文综述了各种脂质体包封率的测定方法,包括需要在分析前进行游离药物与脂质体分离的各种常规包封率测定方法和不需要进行分离的新型包封率测定方法,并对各种方法的适用范围、优点和局限性进行了归纳总结并进行了举例说明.
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汉黄芩素脂质体在小鼠体内的组织分布
目的:研究汉黄芩素脂质体在小鼠体内的组织分布情况.方法:采用高效液相色谱法[Lichrospher ODS(150 mm×4.6mm,5μm)色谱柱,甲醇-水-乙酸(63∶ 37∶0.5)为流动相,流速l mL·min-,检测波长275 nm,柱温35℃]测定汉黄芩素在小鼠血浆及各组织(心、肝、脾、肺、肾)中的浓度,分别考察汉黄芩素溶液剂和脂质体在小鼠体内的组织分布,运用相对摄取率Re、靶向效率Te和相对靶向效率RTe 3个指标评价汉黄芩素脂质体的靶向性.结果:脂质体组汉黄芩素在肝部的各时间点浓度都明显高于溶液组;脂质体组在肝和脾组织的AUC和MRT增加为明显,3个靶向评价指标都显示出汉黄芩素脂质体对肝的靶向性显著增强(P＜0.01).结论:对脂质体的靶向性进行评价,结果表明将汉黄芩素包裹于脂质体后,汉黄芩素在肝部位的靶向性显著增强,有利于其疗效的发挥.
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通过喹诺酮抗生素与磷脂膜的相互作用预测肺泡巨噬细胞单层的体外摄取
目的:预测肺泡巨噬细胞单层的体外摄取.方法:以培养的肺泡巨噬细胞单层为体外模型,用磷脂膜色谱,脂质体/水系统评价药物与磷脂膜的相互作用,分别表示为1gkIAM,lg DL/B.74,用正辛醇/水系统测定参考的疏水性参数(1g DO/B.7.4).结果:lg DL/B.7 4(r2产=0.93)比lg Do/B.74(r2=0.65)具有与IgkIAM更显著的相关性.1gkIAM和lg DL/B.7.4均比lg Do/B7.4与细胞内药物的蓄积度有更好的相关性.但对于由5个两性喹诺酮抗生素和奎尼丁组成的受试集合,三者均与药物进入细胞内的速度具有相近的显著的正相关性.结论:磷脂膜色谱和脂质体/水系统给出相似的亲脂性测量尺度,且均与正辛醇/水系统区别有显著性.与疏水性参数相比,膜亲和性是更有效的肺泡巨噬细胞内药物蓄积和结合的预测参数.
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雷帕霉素脂质体滴眼液制备及其对角膜新生血管作用
目的 探讨雷帕霉素(RAPA)脂质体滴眼液的制备方法及其对大鼠角膜新生血管(CNV)的治疗作用.方法 应用薄膜分散法制备RAPA脂质体滴眼液,以正交设计法研究制备工艺中脂质体制备质量的主要影响因素,筛选出较理想处方.用透射电镜观察其形态,以激光散射法测定其粒径大小.将102只健康Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组,6只)、碱烧伤空白对照组(B组,24只)、碱烧伤空白脂质体对照组(C组,24只)、碱烧伤RAPA脂质体治疗组(D组,24只)、碱烧伤RAPA豆油治疗组(E组,24只).A组不处理;B、C、D、E均制作右眼碱烧伤动物模型,然后D组应用RAPA脂质体滴眼液滴眼,E组用RAPA豆油滴眼液滴眼,C组用空白脂质体滴眼液滴眼,B组不予处理.术后第1天开始每日裂隙灯显微镜观察眼局部情况,记录碱烧伤后4、7、14 d大鼠角膜反应与CNV生长情况.结果 所制RAPA脂质体为完整的类球形,平均粒径145.2 nm,包封率90.02％,可作为滴眼液用于动物实验.4组大鼠CNV面积均随时间增加而增加,差异均有显著性(F=906.43～1 682.16,P＜0.01).碱烧伤4、7、14d时,B、C组CNV面积比较差异无显著性(P＞0.05);其余各组间比较,D、E组CNV面积较B、C组减小,D组面积较E组减小,差异均有显著性(F=309.37～574.92,q=11.98～47.90,P＜0.01).结论 脂质体是RAPA良好的药物载体.RAPA能显著抑制CNV生长,有望成为防治CNV的一种有效方法.
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紫杉醇脂质体联合卡铂治疗卵巢癌疗效观察
目的:观察紫杉醇脂质体与普通紫杉醇联合卡铂治疗卵巢癌的临床近期疗效与毒副反应.方法:58例随机分为两组,实验组29例用紫杉醇脂质体、卡铂AUC5,对照组29例用普通紫杉醇、卡铂AUC5,21天为一周期,共6个周期.结果:实验组CR12例、PR10例、SD5例、PD2例、有效率(CR+PR) 75.8％,对照组CR10例、PR13例、SD4例、PD2例、有效率(CR+PR) 79.3％,两组有效率比较无显著性差异(P＞0.05).变态反应实验组明显少于对照组(P＜0.05),骨髓抑制、脱发、面部潮红等两组无显著性差异(P＞0.05).结论:紫杉醇脂质体与普通紫杉醇治疗卵巢癌疗效相当,但紫杉醇脂质体发生变态反应较少.
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硬膜外注射地塞米松棕榈酸酯治疗神经根型颈椎病的临床研究
目的 观察CT引导下硬膜外注射地塞米松棕榈酸酯治疗神经根型颈椎病青年患者的安全性及治疗效果.方法 神经根型颈椎病青年患者90例,随机分为A组(地塞米松组)和B组(地塞米松棕榈酸酯组),在CT引导下行颈椎硬膜外穿刺置管后分别注射地塞米松和地塞米松棕榈酸酯.在治疗前及治疗结束后1周、4周及6个月时评估疼痛视觉模拟评分(VAS)、临床症状改善评分和优良率.结果 在治疗后第6个月时A组VAS为(5.4±1.5),B组为(3.4±1.3),两者相比有统计学差异(P＜0.05)；临床症状改善评分A组为(2.6±0.5),B组为(1.4±0.5),两者相比有统计学差异(P＜0.05)；有效率A组为71.1％(32/45例),B组为95.6％(43/45例),两者相比有统计学差异(P＜0.05).结论 CT引导下颈部硬膜外注射地塞米松棕榈酸酯治疗神经根型颈椎病青年患者疗效优于地塞米松,是一种安全有效的方法.
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脂质体介导的99Tcm标记c-myc mRNA反义寡核苷酸的初步研究
在99Tcm标记DNA的基础上，采用阳离子脂质体对其进行包裹，获得了脂质体介导的99Tcm-DNA。包裹后的标记物反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、无义寡核苷酸的放化纯度分别为（96.5±3.5）％、（95.3±3.2）％、（94.9±4.5）％；比活度分别为2.0±0.5、1.0±0.2、1.4±0.3 GBq*g-1；介导后的寡核苷酸与水、血清孵育后，只有极小量99Tcm脱落，表明其稳定性较好。
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miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的影响因素和条件筛选
目的:研究miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间对人支气管上皮细胞转染效果和毒性的影响,筛选miRNA模拟物转染人支气管上皮细胞的适宜条件.方法:分别应用0、10、30、50 nmol/L化学合成的、经Cy3标记的miRNA模拟物,以0、0.1%、0.3%、0.5%浓度的脂质体转染剂转染人支气管上皮细胞,转染6、12、24 h后应用荧光显微镜观察细胞转染情况,计算荧光强度,评价转染效果;转染24 h后,应用WST-8法检测不同转染条件对细胞活性的影响.结果:随着miRNA模拟物、脂质体浓度增加和转染时间的延长,细胞内荧光信号增强.30和50 nmol/L miRNA模拟物的转染效率明显高于10 nmol/L组(P<0.05);0.3%和0.5%脂质体组的转染效率明显高于0.1%组(P<0.05);转染24 h的荧光强度明显高于转染12 h和6 h组(P<0.05).与对照组相比,转染24 h后各转染组细胞活性无显著性变化(P>0.05).结论:人支气管上皮细胞适合应用脂质体进行化学合成miRNA模拟物的转染研究,miRNA模拟物浓度、脂质体浓度、转染时间均是转染的重要影响因素,30 nmol/L miRNA模拟物、0.3%脂质体、转染24 h可获得理想的转染效果,转染后对细胞活性无影响.
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脂质体介导的精原细胞基因转移
背景与目的:研究脂质体介导pDsRed2-N1报告基因转染精原细胞的有效性.材料与方法:在体外、体内用脂质体(DOSPER)为载体,介导红色荧光蛋白(DsRed2)基因转染供体小鼠精原细胞,转染的精原细胞经分离、纯化后移植到经白消安处理耗尽生殖细胞的受体小鼠生精小管内.结果:体外转染精原细胞,DsRed2表达效率为20%,体内转染表达效率为8%,体外转染基因表达效率高于体内转染(P＜0.01).移植后6周,受体睾丸冰冻切片上可见表达红色荧光蛋白的精原细胞.结论:脂质体可介导外源基因转染小鼠精原细胞,结合被转染精原细胞移植有可能为研究精子发生机理和生产转基因动物提供一条简便的途径.
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脂质体介导外源DNA体外转染金黄地鼠卵母细胞的研究
背景与目的:研究外源DNA在金黄地鼠卵母细胞染色体上的整合率,探索卵母细胞作为外源基因载体的可行性.材料与方法:在体外,用脂质体包裹外源NF-Luc质粒,将其与金黄地鼠卵母细胞共培养后收获细胞,分别用斑点杂交、Southern杂交以及荧光原位杂交分析检测Luc+基因在卵母细胞中的整合.结果:Southrn杂交分析,在13个样本DNA中发现9个样本有Luc+基因特异性条带扩增;阳性率为69.2%(48.2%～94.5%),荧光原位杂交分析显示,在253个转染后卵母细胞中发现,2例中期相染色体及3例间期核上有明显的Luc+基因阳性杂交信号.结论:在国内首次证实金黄地鼠卵母细胞可被脂质体包裹的外源DNA转染,即金黄地鼠卵母细胞可以作为外源基因的载体,这一新途径为研究外源基因在金黄地鼠卵母细胞中的表达提供了实验基础.
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外源DNA转染精子的实验研究
背景与目的:探索精子作为外源基因载体的可行性及阳离子脂质体的存在对精子转染率的影响.材料与方法:取性成熟雄性金黄地鼠附睾内精子,采用共培养及脂质体介导两种方法与外源DNA共孵育后,用PCR、Southern blot及荧光原位杂交(FISH)等技术检测外源基因在精子细胞中的存在及存在部位,并对两种方法进行比较分析.结果:金黄地鼠附睾内的活精子具有主动捕获外源基因的能力,荧光原位杂交证明部分外源基因进入了精子头部,脂质体介导组精子外源基因携带率较共培养组高,两组精子用DNA酶处理前后外源基因携带率间差异也有统计学意义,且观察发现死精子经洗涤后没有携带外源基因者.结论:即是在没有脂质体存在的情况下,活的精子细胞仍然能被外源基因所转染,这一过程涉及到精子对外源基因的主动性捕获,脂质体的存在能提高精子外源基因的转染率.
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亚麻酸脂质体的制备工艺及质量标准研究
目的 优选亚麻酸脂质体的制备工艺同时对其质量进行评价与分析.方法 采用注入法制备亚麻酸脂质体,以包封率为指标优选佳的脂质体制备工艺.结果 在乙醇加入量8ml,加热温度55℃,磷酸盐缓冲液pH值为7.5的条件下,月见草油(紫苏油)与大豆软磷脂按照1:1混合后其包封率达到高值.结论 采用脂质体制备的亚麻酸工艺稳定、质量可靠.
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hIGF-1基因改良修饰人脐血间充质细胞的研究
目的 研究hIGF-1基因改良修饰人脐血间充质干细胞的方法,为关节软骨组织工程修复提供良好的种子细胞.方法 综合应用密度梯度离心法和细胞贴壁法分离培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪进行细胞鉴定.通过X-tremen HP介导将含hIGF-1基因全长的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-I转染人脐血间充质干细胞,倒置荧光显微镜检测转染后荧光蛋白的表达,计算转染效率,ELISA检测转染后细胞上清液中hIGF-1的含量变化,免疫荧光与RT-PCR检测hIGF-1在细胞中的表达,免疫组化检测Ⅱ型胶原表达.结果 人脐血间充质干细胞表面表达CD105(99.93％)、CD90(99.85％)、CD146(73.63％),不表达Anti-HLA-DR(1.38％)、CD45(0.13％)、CD34(0.11％).hIGF-1基因可在X-tre-men HP介导下转染人脐血间充质干细胞,48 h转染效率为(29±8)％.转染后48 h分泌的hIGF-1多,为(34.89±0.38)ng/ml,且与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01).转染后细胞可检测到hIGF-1 mRNA、蛋白以及Ⅱ型胶原表达.结论 hIGF-1基因可通过X-tremen HP介导改良修饰人脐血间充质干细胞,促进hIGF-1和Ⅱ型胶原的表达与分泌.
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现代中药制剂技术的研究发展
目的:介绍中药现代制剂技术的发展应用.方法:查阅了近些年来的文献资料,阐述了现代中药制剂技术的发展及应用.结果:现代中药制剂新技术可促进中药制剂的广泛应用.结论:制剂新技术必定会促进现代中药的应用领域的广泛化.
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表面修饰脂质体研究进展
脂质体是一种定向药物载体,修饰脂质体是在脂质体表面修饰或接载聚合物、糖基、蛋白及苷等物质,使其具有靶向对特殊组织的特性,使脂质体制剂具有被动靶向和主动靶向的能力,属于第三代和第四代脂质体技术.本文对近年来国内外脂质体表面修饰研究进行综述,为进一步深入研究修饰脂质体制剂和作用特性提供参考.
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分析狂犬疫苗脂质体冻干粉的制备及免疫原性
狂犬病是由狂犬病毒感染所导致的以损害中枢神经系统为主的急性传染病,是人兽共患病的一种,病发之后的死亡率100％.应对狂犬病的方法之一是接种狂犬疫苗.传统的灭活狂犬疫苗虽然具备了制作工艺简单的特点,但是在灭活的过程中可能会改变原有的抗原决定簇,需要反复进行免疫操作.因此,寻找能够使机体较早产生抗体且能够增强细胞免疫的安全疫苗成为相关人员需要思考的问题.文章以脂质体作为疫苗佐剂,采用冻干法来制备新型狂犬疫苗,旨在增强其免疫原性,有效防范狂犬病的发生.
