核不均一核糖核蛋白C2基因克隆及其对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨人核不均一核糖核蛋白C2(RNPC2)基因在肝癌细胞生长增殖中的作用.方法:采用RTPCR方法扩增肝癌细胞SMMC-7721 RNA中RNPC2基因编码区的目的片段,构建真核表达载体pEGFP-RNPC2并进行细胞转染;采用G418抗生素筛选稳转细胞,SDS-PAGE和Western blot法测定稳转细胞内RNPC2蛋白表达,CCK-8法测定稳转细胞的增殖能力.结果:从培养的肝癌细胞SMMC-7721中抽提总RNA并反转录成cD-NA,通过RNPC特异性引物扩增出RNPC2基因;测序鉴定获得双酶切分离纯化目的片段后,插入真核表达载体pEGFP-C1中,成功构建真核表达载体pEGFP-RNPC2;通过细胞稳定转染、G418药物筛选和荧光显微术获得表达外源融合蛋白GFP-RNPC2的稳转细胞株,并用Western blot验证及CCK-8分析证明GFP-RNPC2稳转细胞的生长增殖速率增加.结论:RNPC2可以促进肝癌细胞生长增殖.

正交试验优选仙人掌多糖脂质体的制备工艺

目的:优选仙人掌多糖脂质体的佳制备工艺.方法:采用熔融法制备仙人掌多糖脂质体,以载药量为指标,以大豆卵磷脂、胆固醇、仙人掌多糖的用量和温度为因素,采用L9(34)正交试验设计对制备条件进行优选,紫外-可见分光光度法测定仙人掌多糖脂质体的包封率.结果:熔融法制备仙人掌多糖脂质体的佳工艺为大豆卵磷脂的质量为100mg,胆固醇的质量为200mg,仙人掌多糖的质量为70mg,温度为34℃.结论:仙人掌多糖脂质体的制备工艺可行.

空肠弯曲菌亚单位脂质体佐剂疫苗诱导的Th1/Th2应答机制研究

目的探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)亚单位脂质体佐剂疫苗免疫新西兰兔后Th1/Th2应答机制.方法制备CJ亚单位阳离子和阴离子脂质体佐剂疫苗,用不同剂量(按蛋白质含量计算,0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg)的疫苗免疫新西兰兔,于末次免疫后10d采集血清,ELISA(双抗体夹心法)检测各组动物血清中IL-2、IFN-γ、TNF-β、IL-4、IL-6、IL-10的水平,同时设有CJ完全福氏佐剂免疫原对照组和生理盐水(NS)对照组.结果免疫组与CJ完全福氏佐剂免疫原对照组和NS对照组相比较,IL-4、IL-10水平与对照组相比有显著性升高(P＜0.01),其中同一剂量(0.5mg/kg)不同佐剂组以CJ亚单位阳离子脂质体佐剂疫苗组升高明显(P＜0.05),不同剂量同一佐剂疫苗组以0.5mg/kg组升高较明显(P＜0.01),IL-2、IFN-γ、TNF-β水平各免疫组与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 CJ亚单位脂质体佐剂疫苗诱导了以Th2应答为主的免疫应答类型.

慢病毒及脂质体法转染原代软骨细胞的实验研究

目的：利用慢病毒载体及Lipofectamine2000脂质体转染大鼠原代软骨细胞，探讨转染软骨细胞的理想条件。方法采用机械—酶消化法获取原代软骨细胞，经Ⅱ型胶原（ColⅡ）鉴定后，使用慢病毒载体介导GFP及利用Lipofectamine2000介导的FAM‐siRNA分别转染原代软骨细胞，倒置荧光显微镜检测转染效率，MTT法测定原代软骨的增殖活力，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果采用脂质法转染软骨细胞不理想，转染率不到10％。运用慢病毒载体后转染率明显高于脂质体法，且随感染复数（病毒滴度×病毒液体积／细胞数，MOI）增加而增加，MOI为100时，转染率可达92．85％。MTT及流式结果显示，低MOI时，软骨细胞活力及凋亡率与对照组相比差异无统计学意义；当高MOI（200）时，细胞活力[（81．32±10．72）％]明显低于对照组，而细胞凋亡率[（21．37±2．80）％]明显高于对照组。结论当MOI为100时可作为转染软骨细胞安全有效的条件，这为细胞转染技术在软骨细胞的研究领域提供实验基础。

HPLC法测定克班宁脂质体中克班宁的含量

目的:用高效液相色谱测定脂质体中克班宁的含量.方法:色谱柱采用Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.008%三乙胺水=75:25为流动相,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长280 nm.结果:克班宁在0.06~1.8 mg/mL范围内有良好的线性关系,克班宁平均回收率为101.56%,RSD为6.77%.结论:本方法操作简便,结果准确,重现性好,适用于测定脂质体中克班宁的含量,便于质量控制.

穿膜肽修饰紫杉醇和他莫昔芬脂质体中主药含量测定

目的:测定穿膜肽(TAT)修饰的紫杉醇和他莫昔芬脂质体中的主药含量.方法:采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法制备穿膜肽修饰紫杉醇和他莫昔芬脂质体;通过高效液相色谱法测定脂质体中紫杉醇和他莫昔芬的含量.结果:TAT修饰的空白脂质体对主药含量的测定无干扰;TAT修饰的紫杉醇和他莫昔芬脂质体中紫杉醇和他莫昔芬分别在0.13 ～ 1.3μg和0.16～1.6μg范围内线性关系良好,回收率均在97％以上,RSD均小于1.0％,精密度的相对标准偏差均小于2.0％;脂质体中紫杉醇的平均含量为23.6μg/mL,他莫昔芬的平均含量为8.6μg/mL.结论:所建立的HPLC方法准确可靠、简便快速、重复性好,可用于TAT修饰紫杉醇和他莫昔芬脂质体的质量控制.

脂质体作为疫苗佐剂的研究进展

总结近年来的有关文献,对疫苗免疫佐剂的研究现状及主要的免疫佐剂脂质体的理化性质与免疫原性、脂质体疫苗的特点进行了归纳、分析和综述,对脂质体作为疫苗免疫佐剂存在问题及研究方向提出建议.

脂质体在皮肤领域中的应用及其作用机制

介绍脂质体在皮肤领域中的应用并阐述了脂质体作用机制及研究概况.

狂犬疫苗脂质体稳定性及稀释比例对脂质体干粉的免疫原性

目的 考察狂犬疫苗原液在不同稀释倍数下制备的狂犬疫苗脂质体冻干粉的免疫原性,及疫苗原液脂质体干粉的物理稳定性.方法 将狂犬疫苗原液按4、6、8倍稀释后采用冻融-冻干法制备狂犬疫苗脂质体干粉,通过腹腔免疫小鼠,采用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,筛选狂犬疫苗佳稀释比;通过检测不同储存条件疫苗脂质体冻干粉的包封率,评价其稳定性.结果 从小鼠脾淋巴细胞增殖实验比较疫苗的不同稀释比可看出,实验组与空白组比较(P＜0.05),4倍稀释疫苗具有较高刺激指数(SI)值.疫苗原液脂质体冻干粉在25℃储存条件下,30 d时冻干粉包封率为(70.59±3.11)％.结论 狂犬疫苗4倍稀释后制成脂质体免疫效果佳.常温条件下,30 d内疫苗脂质体冻干粉稳定性较脂质体混悬液好,预示狂犬疫苗的储存和冷链运输条件可以得到改善.

流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺

目的 在流感疫苗脂质体的基础上制备壳聚糖脂质体载药微粒,建立流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺.方法 采用薄膜分散法制备流感疫苗脂质体,以不同N/P比(壳聚糖中的氮和卵磷脂中的磷比值)制备壳聚糖载药微粒.观察形态并测定其平均粒径、粒度分布、包封率与结合率.通过对比不同N/P比制备壳聚糖载药微粒的包封率与结合率等指标,确定流感疫苗壳聚糖脂质体的制备工艺.结果 流感疫苗脂质体形态均呈圆或椭圆形,粒度分布较均匀,壳聚糖包覆后脂质体仍为圆形,平均粒径由2.14μm增加到4.05μm.壳聚糖包覆前后流感疫苗脂质体平均包封率由80.41％变为84.37％.比较6种不同N/P比流感疫苗壳聚糖脂质体的结合率,当N/P为5:1时,为壳聚糖与脂质体孵育的佳比例,结合率为19.40％.结论 壳聚糖包覆后脂质体仍接近圆形,粒径增加,包封率提高,当N/P为5:1时,为壳聚糖与脂质体孵育的佳比例.

人参皂苷Rg1脂质体的制备及稳定性研究

目的 制备人参皂苷Rgl(Ginsenoside Rgl)脂质体,考察其稳定性.方法 以薄膜分散一超声法制备脂质体,采用正交设计确定优处方,考察工艺条件以及处方组成对主要成分包封率的影响以及脂质体储存过程中的稳定性.结果 薄膜-超声法制备的脂质体为小单室脂质体,平均粒径在(2.5±0.5)μm,包封率为(51.20±1.5)%,在4℃下稳定性考察各项指标均无明显改变.结论 Rg1脂质体包封率高,稳定性良好.

肿瘤特异性抗原长循环纳米脂质体的制备及其抗肿瘤免疫效应

目的:制备包裹基因工程MAGE3/HSP70(简称M3H)融合蛋白的长循环纳米脂质体, 研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法:采用薄膜分散-超声法, 制备包裹M3H的长循环纳米脂质体(简称NL M3H), 观察其形态并测量其粒径, 凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性.用NL M3H免疫小鼠, 运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NL M3H激活机体细胞免疫反应的状况.结果:成功地制备出平均粒径<100 nm的长循环纳米脂质体, 包裹率为38%, 载药量0.038 g/L, 4℃放置6月后性质稳定.体外释药特性显示有74%的蛋白释放在24 h内完成.ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示NL M3H可以激活机体免疫反应产生针对MAGE3的CTL, 特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞.结论:NL M3H具有良好的包裹率和载药量, 性质稳定且具有缓释作用, 可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE3的CTL, 是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.

肿瘤的靶向治疗不同途径的研究进展

肿瘤的靶向治疗是一种恶性肿瘤的生物治疗方法之一, 其原理是借助高度特异的亲肿瘤物质作为载体, 以有细胞毒作用的物质如放射性核素、化疗药、毒素等与载体结合, 依靠载体的特异性和肿瘤的亲和力, 将细胞毒物质尽量集中在肿瘤部位发挥稳定地杀伤作用, 而对宿主正常组织无害.近20多年来的研究已取得了很大的进展.开辟了多条不同的靶向治疗途径.本文就此方面的研究进展作一综述.

纳米肿瘤疫苗的制备工艺的优化及特性鉴定

目的:制备无明显毒性、高效的恶性肿瘤基因工程纳米疫苗.方法:纯化融合蛋白MH,薄膜分散-超声法制备包裹MH的纳米脂质体肿瘤疫苗NL(MH),并评价其粒径、包裹率及稳定性;观察NL(MH)免疫组小鼠的急性毒性反应,及重要脏器的病理学改变.结果:成功制备出粒径为(80±250)nm的纳米脂质体,其药物包裹率为30%,于4℃放置6个月后或3 000 r/min 10 min离心后无分层,证明其稳定性良好;与PBS对照组相比,免疫组小鼠未见明显毒性反应.结论:该恶性肿瘤基因工程纳米疫苗具有良好的理化性质,未见毒性反应.

脂质体在实验诊断中的应用及展望

脂质体因其具有独特的理化及生物学性质,广泛应用于药物投送、免疫佐剂、基因工程等领域.该文综述了近年来脂质体在实验诊断中的应用和发展趋势.重点介绍了脂质体免疫分析法、DNA标记脂质体技术的原理、特点及临床应用.

脂质体包裹技术详解

美妍堂原液果疗护肤的天然行者

有人说，原液系列的推出让同行见识了美妍堂变身成为一匹黑马的潜力。我不同意这种说法，如果硬是用马来比喻，那美妍堂原液就是汗血马，它是经过三千多年培育而成的世界上古老的金色马种之一。美妍堂脂质体鲜活原液系列，并不是单纯的盲目跟风、概念炒作，也同样是多年专业技术积累和不断研发的成果，并非一蹴而就。

辣椒素脂质体在兔耳增生性瘢痕组织中的透皮吸收研究

目的:探讨脂质体包裹的辣椒素对兔耳增生性瘢痕组织的透皮吸收能力.方法:在兔耳增生性瘢痕模型上进行透皮扩散,比较辣椒素脂质体及其普通商用软膏剂对瘢痕皮肤的渗透能力.结果:在体瘢痕透皮试验12 h后,脂质体组瘢痕组织中的辣椒素单位面积透皮药量显著高于软膏组(40.03±3.2 VS 9.01±2.02μg/cm2,P＜0.01).结论:在体瘢痕组织透皮试验中,脂质体剂型均表现出优于软膏剂型的促进辣椒素透皮的能力.

叶酸受体介导靶向药物载体的研究进展

利用叶酸受体在肿瘤细胞(高表达)和正常细胞(低表达)上表达的差异性及叶酸受体与叶酸和叶酸类似物结合的高特异性、高亲和性,可望实现肿瘤的靶向性治疗.而叶酸修饰的药物载体不仅可实现难溶或不稳定药物的体内输送,减少体内酶对药物的降解,提高其生物利用率,同时还可有效地提高药物在肿瘤组织中的浓度,降低对正常组织的毒副作用.本文就近年来叶酸化药物载体的研究进展做一简要综述,旨在为肿瘤的靶向性治疗提供参考.

MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体逆转肺癌细胞多药耐药研究

目的:研究MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体与阿霉素脂质体对非小细胞肺癌多药耐药的逆转作用.方法:25%的戊二醛偶联MRK-16于阿霉素脂质体,制备MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体;以MTS测定细胞存活率,检测SPC-A1/TAX的耐阿霉素指数;以阿霉素脂质体与MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体作用于SPC-A1/TAX,设阿霉素组对照;研究两者对SPC-A1/TAX的体外细胞毒与多药耐药逆转作用;流式细胞仪检测用药后2、4、6小时后细胞内药物浓度.结果:免疫脂质体细胞杀伤率(48h)达67.7%,,其多药耐药逆转指数达7.45;脂质体对细胞的杀伤率49.2%,逆转指数4.28;流式细胞仪检测细胞内药物浓度,6小时后阿霉素免疫脂质体组细胞内药物浓度是阿霉素组的18.34倍,脂质体组是阿霉素的10.1倍.结论:MRK-16修饰阿霉素免疫脂质体、阿霉素脂质体在体外对非小细胞肺癌多药耐药具有一定的逆转作用.