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肿瘤特异性抗原(MAGE)在肿瘤免疫治疗中的作用
目前,已经发现肿瘤特异性抗原Mage基因家族有55个成员,其中Mage-A、-B和-C三个亚家族在各种组织来源的恶性肿瘤中特异性表达,正常组织(睾丸除外)均不表达.所以,Mage抗原作为肿瘤的特异性标志,在肿瘤的检测和免疫治疗方面具有很大的应用潜力.本文介绍了Mage家族的基因定位,Mage蛋白的特性,Mage基因的作用.同时,总结了近年来Mage基因家族在临床方面的应用研究结果.
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肿瘤新抗原在肿瘤精准免疫治疗中的应用
体细胞突变形成的肿瘤新抗原被MHC分子提呈后可激活免疫系统,产生特异性的抗肿瘤效应.靶向肿瘤新抗原制备的治疗性疫苗和特异性T细胞可实现肿瘤的精准免疫治疗.随着新抗原预测技术的不断发展,个性化肿瘤免疫治疗方案将会广泛推广.本文综述了肿瘤新抗原的预测方法、临床应用研究现状,以及存在的问题.
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靶向微泡造影剂超声分子成像的研究进展
分子影像学是指在传统的影像学方法中引入成像造影剂在分子或细胞水平观察、分析和测量生物体内某一生物学过程或疾病某一阶段特定分子标志物(如肿瘤特异性抗原、血管生成因子和凋亡标志物)的影像学方法,包括分子磁共振成像(molecular magnetic resonance imagming, mMRI)、生物发光显微镜(optical bioluminescence)、荧光显微镜(optical fluorescence)、单光子发射计算机断层成像术(single-photon emission computed tomography,SPECT)和正电子发射断层成像术(positron emission tomography,PET)、靶向超声成像等[1,2].超声分子成像(ultrasound molecular imaging)从广义上讲是指在靶向微泡造影剂的介导下,应用超声成像技术对活体生物化学过程进行细胞和分子水平上的定性和定量研究的分子影像学方法.其总的思路设想是:将靶向配体(蛋白质、抗体、肽类等)连接在微泡造影剂表面,造影剂进入血循环后与靶点部位受体分子选择性结合并积聚,靶区与正常组织间的超声信号对比度升高,实现对靶点(受体表达上调)的选择性成像.这种成像技术将在了解疾病发生的分子机制、指导肿瘤治疗、研发新的治疗靶点和药物等方面发挥重要作用,预计未来的几年内将会有大量这方面的研究,有望十年内可应用于临床.
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肿瘤微环境在肺癌免疫调节中的作用及临床意义
肺癌是我国高发的恶性肿瘤之一,严重威胁人类生命,尽管目前外科手术、放化疗等方法得到很大提高,但其预后依然不容乐观.癌症是一种以DNA基因序列突变以及调节组织稳定性、细胞存活等关键性信号通路变化为特征的隐发性疾病[1].越来越多的证据表明肿瘤的免疫应答是通过自身抗原的识别来对抗肿瘤细胞胞内及表面抗原[2-5].免疫疗法能够通过肿瘤特异性抗原的识别产生特异性的抗肿瘤免疫应答,在微小损伤下促进肿瘤细胞死亡,是一种极具吸引力及应用前景的治疗方法.了解肺癌免疫调节机制及肿瘤微环境在肺癌免疫监视中的作用具有重要的临床意义.
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095 肿瘤特异性抗原基因克隆技术的新进展
肿瘤特异性抗原的获得、鉴别一直是肿瘤免疫研究的热点之一,分子生物学技术的飞速发展,给这一领域带来了勃勃生机.本文综述了应用分子生物学技术分离肿瘤特异性基因,并用免疫学方法鉴定其抗原性,为获取肿瘤特异性抗原开避新途径.
关键词： 肿瘤特异性抗原 肿瘤抗原特异性基因的分离 -
MAGE-A基因亚家族及其在肿瘤临床上的应用前景
黑素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-A基因亚家族属于癌睾丸抗原家族,其定位于X染色体,包括MAGE-Al～ MAGE-Al2共12个成员.对MAGE-A在基因和蛋白水平的研究发现,其在正常组织中几乎不表达,而在多种肿瘤组织中均有较高水平的表达,并且往往表达一种以上的MAGE-A亚型.正常情况下,由于CpG岛高度甲基化,MAGE-A基因沉默表达.受辐射等因素影响时,基因组易发生去甲基化,促使MAGE-A基因表达.组蛋白的乙酰化也与MAGE-A的表达有关.MAGE-A作为肿瘤相关抗原,与肿瘤的发生、发展、耐药及较差的预后密切相关.由于MAGE-A特异性的表达于多种肿瘤,对MAGE-A亚型的检测尤其是多种亚型的联合检测有助于MAGE-A阳性肿瘤的诊断.此外,MAGE-A基因编码的抗原肽由MHC Ⅰ分子提呈至细胞毒性T细胞,从而发挥抗肿瘤活性.应用MAGE-A抗原肽的肿瘤疫苗已经投入临床试验,并取得了良好的治疗效果.
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肿瘤特异性抗原纳米乳剂的制备及抗肿瘤免疫效应
目的制备包裹基因工程MAGE1-HSP70的纳米乳剂,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1-HSP70的纳米乳剂(NE MAGE1-HSP70),于电镜下观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性.用NE MAGE1-HSP70免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NE MAGE1-HSP70激活机体细胞免疫反应的状况.结果成功地制备出粒径为(25±10) nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091 g*L-1,4℃放置6 mon后性质稳定.体外释药特性显示有70 % 的蛋白释放在24 h内完成.ELISPOT和LDH显示NE MAGE1-HSP70可以激活机体免疫反应产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞.结论 NE MAGE1-HSP70具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE1的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.
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黑色素瘤抗原A家族与肿瘤的关系
黑色素瘤抗原A(MAGE-A)基因家族在正常人中除在睾丸和胎盘组织中有表达外,在其他组织中均不表达,而在许多恶性肿瘤组织中却呈高表达状态,被认为是一种肿瘤特异性抗原,在肿瘤免疫治疗中具有重要意义.
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重组减毒单核细胞增多性李斯特菌作为疫苗载体在抗肿瘤中的研究进展
将细菌疫苗用于肿瘤的治疗和预防已取得多方面的进展,单核细胞增多性李斯特菌(LM)能在专职吞噬细胞和非专职吞噬细胞内生存繁殖,可同时引起机体的细胞免疫和体液免疫.将外源性肿瘤特异性抗原导入减毒LM,可以显著诱导抗肿瘤的细胞免疫应答,是非常有效的疫苗载体.文章主要从具有胞内菌特殊优势的单核细胞增多性李斯特菌的生物学特性、做为抗肿瘤疫苗载体的优点等方面的研究进展进行了阐述.
关键词： 重组 减毒 单核细胞增多性李斯特菌 疫苗载体 肿瘤特异性抗原 -
卵巢癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因表达的研究
目的:观察卵巢上皮性癌组织及细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE 基因的表达,以探讨基因表达与诊断、治疗及预后的关系,评价基因产物作为卵巢癌标志物以及卵巢癌免疫治疗靶位的可行性.方法:采用 RT-PCR分析10例正常卵巢、20例卵巢良性肿瘤、47例卵巢上皮性癌组织及3种卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1中MAGE-1、MAGE-3、GAGE-1/2及BAGE基因mRNA水平的表达.结果:正常卵巢组织中MAGE、GAGE、BAGE基因无表达,良性肿瘤中仅有MAGE-1基因表达,阳性率为15%(3/20).卵巢癌组织MAGE-1、MAGE-3的表达率较高,分别为51.1%(25/47)、34%(16/47),GAGE-1/2及BAGE基因在卵巢癌组织中的表达率分别为25.5%(12/47)和14.9%(7/47).卵巢癌转移灶仅有MAGE-1、BAGE基因表达,阳性表达率分别为28.6%(2/7)、14.3%(1/7).浆液性囊腺癌MAGE-1、MAGE-3基因阳性表达率明显高于其它类型卵巢恶性肿瘤(P＜0.05).结论:肿瘤特异性抗原MAGE、GAGE、BAGE基因在卵巢癌中有较高表达,其表达与有无淋巴结转移无关,MAGE-1、MAGE-3基因的阳性表达与肿瘤分化程度及临床分期密切相关,伴有腹水的卵巢癌患者BAGE表达的阳性率较高.卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1的表达谱不尽相同,但至少有一种基因表达,其可作为卵巢癌免疫治疗的特异性靶点.
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肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE在子宫内膜癌组织中表达的研究
目的:研究MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达,并探讨其肿瘤特异性抗原作为子宫内膜癌免疫治疗特异性靶位的可能性.方法:采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)技术,检测35例子宫内膜癌组织和15例正常子宫内膜组织中MAGE-1、MAGE-3、BAGE和GAGE1-2基因的表达情况,以β-actin作内参照.结果:35例子宫内膜癌组织中,MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE1-2表达阳性率分别为46%(16/35)、49%(17/35)、20%(7/35)和26%(9/35),有77%的标本至少表达其中一种基因.15例正常子宫内膜组织中MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE1-2基因表达均为阴性.结论:肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因在子宫内膜癌中有较高的表达,MAGE-1、MAGE-3、BAGE基因的表达与子宫内膜癌的病理分期及分级无相关性,GAGE1-2与子宫内膜癌的分期无关,与分级有关.其可作为子宫内膜癌患者免疫治疗的特异性靶点.
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血清CA199、CA125、CA724、CEA联合检测诊断胃癌的价值
寻找肿瘤特异性抗原一直是胃癌研究的热点,2007年8月～2008年6月,我们联合检测了血清CA199、CA125、CA724、CEA水平,旨在探讨其诊断胃癌的价值.
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5-杂氮脱氧胞嘧啶对卵巢癌细胞株增殖和肿瘤特异性抗原表达的影响
目的 探讨5-杂氮脱氧胞嘧啶(DAC)对卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1增殖和肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE表达的影响.方法 将处于对数生长期的卵巢癌细胞系与5-杂氮脱氧胞嘧啶(DAC)共同培养,观察细胞生长指数并利用流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡情况,应用RT-PCR法检测卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1在DAC作用前后肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE表达的变化.结果 DAC能抑制卵巢癌细胞株的增殖,使大多数细胞阻滞在G0期,并使肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE阳性表达率提高.结论 DAC可以提高卵巢癌细胞株中肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE的阳性表达率,扩大卵巢癌免疫治疗的应用范围.
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急性粒细胞白血病CD33、CD45及MDR表达和靶抗原的筛选
目的:观察急性粒细胞白血病(AML)CD33、CD45及MDR表达和抗原强度的变化,筛选特异的靶抗原,探讨抗体靶向治疗的应用价值.方法:应用间接免疫荧光法检测AML细胞CD33、CD45及MDR的表达和抗原强度的变化.结果:CD33、CD45表达阳性率分别为81.5%、90.6%,CD33抗原表达比CD45强,差异有显著性意义(P<0.05).CD33与MDR在白血病细胞上表达差异无显著性意义.结论:CD33特异性强,抗原性强,适合作靶抗原;MDR也是耐药白血病治疗的较好靶抗原.抗体靶向治疗将是AML治疗的一条新途径.
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表达人乳头瘤病毒16型E7蛋白的实体瘤模型的建立和鉴定
目的 建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E7蛋白的实体瘤模型.方法 携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3.1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定.采用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA,经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆,并用RT-PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA.将转染细胞接种于C57BL/6小鼠,肿瘤形成后,用Western blot分析检测E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达.结果 酶切及测序证实目的 基因DNA序列、插入位点及方向均正确.RT-PCR检测显示HPV 16 E7能在RMA转染细胞中稳定表达.RMA转染细胞可在小鼠体内成瘤,且Western blot分析表明E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达较体外高.结论 2.5 X 104 个RMA-E7细胞可在小鼠体内成瘤,并且体内E7蛋白表达比体外高,可能导致免疫耐受.
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肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用
目的 检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4(melanoma antigen-A4)mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响.方法 用RT-PCR方法 检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ~2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响.结果 77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mR-NA阳性表达.阳性率为42.9%.60(含60岁)岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性(P>0.05).乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4mRNA呈高表达.转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05).结论 MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达卒为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原.该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性.在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成.
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HLA-A*0201限制性GPC3表位肽的初步预测与筛选
目的:筛选HLA-A* 0201限制性GPC3优势表位肽,为肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)特异性的免疫细胞治疗提供新的靶标.方法:通过表位预测网站初步筛选HLA-A * 0201限制性GPC3表位肽,T2细胞结合实验筛选优势表位肽.结果:通过三大常用的表位预测网站,共筛选了13个评分较高的表位肽,化学合成表位肽,采用T2细胞结合实验显示,有4个表位肽与HLA-A2呈现较高亲和力.结论:抗原表位预测网站结合T2细胞结合实验能初步筛选亲和力较高的HLA-A* 0201限制性GPC3表位肽,可能用于HCC特异性CTL治疗的候选标靶.
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重组腺病毒载体pAd-NY-ESO-1-EGFP的构建及鉴定
目的:利用细菌内同源重组法构建含人肿瘤特异性抗原的腺病毒质粒.方法:设计NY-ESO-1 cDNA扩增引物,从pETl5b-NY-ESO-1质粒中扩增NY-ESO-1的DNA序列,与pShuttle-IRES-hrGFP-2进行连接,PCR和EcoRV酶切鉴定重组质粒pShuttle-NY-ESO-1-EGFP,经Pme I酶切线性化后,转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,细菌内同源重组法构建腺病毒质粒pAd-NY-ESO-1-EGFP;质粒经Pac I酶切鉴定,DNA测序.结果:线性化的pShuttle-NY-ESO-1-EGFP转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,重组质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5kb的片段,PCR反应扩增出了340 bp的片段.结论:用细菌内同源重组法成功地构建了含NY-ESO-1的重组腺病毒质粒,为进行表达NY-ESO-1的重组腺病毒的制备及肿瘤特异性抗原NY-ESO-1的核酸疫苗在肿瘤方面的研究奠定了基础.
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肿瘤的免疫诊断与治疗
肿瘤是危害人类健康的主要疾病.虽然常规的肿瘤诊断方法(如病史体检、细胞学、生物化学、核素、内腔镜、影像学)很重要,但随着对肿瘤诊断、治疗和预后的深入研究,免疫学已成为一门对肿瘤诊断和治疗影响很大的全新学科;尤其是多种肿瘤标志物的联合应用可以帮助肿瘤患者作出早期诊断.各种瘤苗、免疫效应物质及细胞因子等对肿瘤的辅助治疗,也已在临床上得到比较广泛的应用.本文就肿瘤的免疫诊断及治疗作一综述.
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肿瘤特异性抗原长循环纳米脂质体的制备及其抗肿瘤免疫效应
目的:制备包裹基因工程MAGE3/HSP70(简称M3H)融合蛋白的长循环纳米脂质体, 研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法:采用薄膜分散-超声法, 制备包裹M3H的长循环纳米脂质体(简称NL M3H), 观察其形态并测量其粒径, 凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性.用NL M3H免疫小鼠, 运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NL M3H激活机体细胞免疫反应的状况.结果:成功地制备出平均粒径<100 nm的长循环纳米脂质体, 包裹率为38%, 载药量0.038 g/L, 4℃放置6月后性质稳定.体外释药特性显示有74%的蛋白释放在24 h内完成.ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示NL M3H可以激活机体免疫反应产生针对MAGE3的CTL, 特异性杀伤表达MAGE3的肿瘤细胞.结论:NL M3H具有良好的包裹率和载药量, 性质稳定且具有缓释作用, 可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE3的CTL, 是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.
