流感疫苗佐剂研究进展

接种流感疫苗是预防和防止流感病毒大规模传染的有效的手段,但由于目前疫苗的生产工艺复杂,不能满足实际需要而且当前的佐剂在使用过程中的性能也尚有欠缺,研发性能更好的流感疫苗佐剂十分必要.目前的研究热点为无机纳米佐剂、纳米乳剂和中药佐剂,本文对上述三种流感疫苗佐剂的相关研究成果和研究现状进行了归纳.

蜂胶-银离子复合纳米乳剂杀菌机理的研究

目的 研究蜂胶-银离子复合纳米乳剂杀菌机理.方法 采用悬液定量杀菌试验和透射电镜分析的方法进行了实验室观察.结果 制成的复合纳米乳剂含蜂胶浓度为20 g/L,总黄酮为5.61 g/L,银离子浓度为50μg/L.含体积分数6.7%复合纳米乳剂溶液与大肠杆菌接触作用10 min后,菌体产生融合,胞内容物开始溶解;作用15 min时完全融合,胞内容物完全溶解;作用30 min时融合菌体出现裂解.用上述浓度的复合纳米乳液与金黄色葡萄球菌接触作用10 min后,菌体内含物产生溶解,核质破裂;作用15 min时胞壁出现部分裂解;作用30 min时胞内容物完全溶解,胞壁损坏.结论 蜂胶-银离子复合纳米乳剂通过菌体融合的方式杀灭革兰阴性菌,而对革兰阳性菌则主要使其胞内容物溶解,裂解胞壁的方式致使细菌死亡.

MAGE1纳米蛋白疫苗的研制及其抗肿瘤效应

目的制备纳米乳剂包裹基因工程MAGE1(melanoma antigen 1)抗原,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1抗原的纳米乳剂(NE MAGE1),测量粒径、包裹率、载药量.检测乳剂包裹对小鼠DC摄取抗原能力的影响.用NE MAGE1免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测NE MAGE1激活机体细胞免疫反应的状况,并观察纳米蛋白疫苗对荷瘤小鼠的治疗作用.结果成功制备粒径为(15±5) nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091 g/L,4℃放置6个月后性质稳定.DC摄取NE MAGE1的能力明显强于对游离蛋白抗原的摄取.ELISPOT和细胞毒性杀伤实验显示,NE MAGE1可以诱导机体产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞.荷瘤小鼠的治疗实验显示,NE MAGE1对表达MAGE1的肿瘤有明显疗效,其效果优于单独使用游离MAGE1蛋白.结论纳米乳剂具有较高包裹率和稳定性.纳米乳剂包裹的肿瘤特异性抗原可以有效激活机体产生抗肿瘤免疫效应,是具有临床应用前景的新型抗肿瘤疫苗.

恩替卡韦联合HBsAg纳米乳剂治疗慢性乙型肝炎的疗效研究

目的:观察恩替卡韦联合HBsAg纳米乳剂治疗慢性乙型肝炎(乙肝)的临床疗效.方法:我院2015年9月-2016年4月收治的慢性乙型病毒性肝炎患者60例,随机分为联合治疗组和恩替卡韦治疗组,每组30例.在保肝治疗的基础上,恩替卡韦治疗组单独给予恩替卡韦治疗,联合治疗组给予恩替卡韦联合HBsAg纳米乳剂口服,比较两组HBV DNA转阴率、HBeAg转阴率以及肝功能(丙氨酸转氨酶和总胆红素)的变化.结果:治疗3个月和治疗6个月后,联合治疗组的HBV DNA水平均较恩替卡韦治疗组明显下降(P＜0.05);治疗6个月后,联合治疗组患者的血清病毒转阴率与HBeAg抗原转阴率分别为(90.00％和26.67％)均显著高于恩替卡韦治疗组(46.67％和3.33％),差异均有统计学意义(P＜0.01).治疗后3个月和6个月联合治疗组的丙氨酸转氨酶和总胆红素均明显低于治疗前,也明显低于恩替卡韦治疗组,差异均有统计学意义(P＜0.05).但联合治疗组有1例治疗后肝功能指标恶化.结论:应用恩替卡韦联合HBsAg纳米乳剂治疗慢性乙型肝炎能有效提高血清乙肝病毒转阴率和HBeAg转阴率,改善肝功能,较单用恩替卡韦治疗效果更好;对其安全性还要加强观察.

氟尿嘧啶纳米乳剂的制备与性质

目的研究氟尿嘧啶大豆油纳米乳剂的相图、稳定性、载药量及药物的体外释放特点.方法在三元相图的基础上优选出制备纳米乳剂的佳处方,用透射电子显微镜观测纳米乳剂粒径的大小,HPLC法测定纳米乳剂中氟尿嘧啶的含量及体外释放性能.结果纳米乳剂颗粒为圆形或椭圆形,粒径范围20±10nm,药物包裹率85.06%,体外11h药物释放50%,50h缓释95%.结论本实验制备的纳米乳剂性质稳定,与游离的药物相比有明显的缓释性能.

紫杉醇纳米乳剂的体内外考察

目的考察紫杉醇纳米乳剂的形态、粒径分布及急性过敏反应,研究紫杉醇注射剂及自制紫杉醇纳米乳剂在大鼠体内的药代动力学. 方法用HPLC法测定大鼠体内紫杉醇含量.数据用3P87处理,得到各主要药代动力学参数. 结果纳米乳剂平均粒径为17.2 nm.纳米乳剂急性过敏反应为阴性,而市售紫杉醇注射液急性过敏反应为阳性.血浆中杂质及制剂中辅料不干扰紫杉醇的测定.大鼠iv自制紫杉醇纳米乳剂及紫杉醇注射液后的药-时曲线均符合二室模型.数据用3P87处理,得到各主要药代动力学参数.纳米乳剂及注射液的K10分别为0.57,1.29*h-1,K12分别为1.44,1.27*h-1,K21分别为3.08,0.51*h-1,AUC分别为34.98,21.85 mg*h*L-1.结论紫杉醇纳米乳剂较紫杉醇注射液毒性降低,可在一定程度上延长药物在大鼠体内的循环时间.

比较Gaussian曲线分布与Nicomp多波型分布分析在纳米分散系粒径测定中的应用

目的以异丙酚纳米乳剂为模型药,比较高斯曲线分布与Nicomp多波型分布分析在纳米分散系粒径测定中的应用.方法制备2种处方不同,工艺相同的异丙酚纳米乳剂(分别为Ⅰ及Ⅱ),以激光Nicomp380系统分别测定Gaussian分布与Nicomp多波型分布下相应的动态光散射光谱.结果同一制剂,2个分布有显著差别.纳米乳剂Ⅰ2种图谱示单峰;纳米乳剂Ⅱ2种图谱不同,前者为单峰,而后者为双峰.结论对均匀分散系,2种分析通常产生可靠的结果,而对非均匀分散系,Nicomp分布分析更准确.

齐多夫定棕榈酸酯纳米乳剂的制备及其在小鼠体内药动学与组织分布的研究

目的 制备齐多夫定棕榈酸酯( zidovudine palmitate,AZTP)纳米乳剂并考察其在小鼠体内药动学与组织分布情况.方法 微射流法制备AZTP纳米乳剂,采用高效液相色谱法测定静脉注射后小鼠体内齐多夫定(zidovudine,AZT)的质量浓度;采用DAS2.1.1药动学程序计算药动学参数,并以相对摄取率(re)为指标,评价AZTP纳米乳剂的靶向性.结果 本法制备的AZTP纳米乳剂为乳白色半透明混悬液,无油滴,未分层,平均粒径为(55.3±26.0)nm,包封率为98.4％.小鼠尾静脉分别注射AZTP纳米乳剂和AZT溶液后,体内消除半衰期分别为13.44和23.47min.与AZT溶液相比,纳米乳剂组在血浆、心、肝、脾、肺、肾和脑的re值分别为1.46、1.52、2.75、2.20、1.59、0.76、2.57.结论 采用微射流法制备的AZTP纳米乳剂外观良好,粒径均匀;可延长药物体内消除半衰期,提高其在肝、脑和脾中的靶向性.AZTP纳米乳剂有望成为一种理想的抗艾滋病制剂,值得进一步深入研究.

激光散射法分析异丙酚纳米乳剂的粒径大小与分布

目的制备异丙酚纳米乳剂,以激光散射光谱分析其粒径大小与分布,为微粒分散药物制剂物理稳定性的研究提供简便、快速、有效的方法.方法制备3种处方不同,工艺相同的异丙酚纳米乳剂(分别为Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ),以激光NICOMP380/ZLS系统测得相应动态光散射光谱的体积为权重的重量平均粒径分布、散射强度为权重的重量平均粒径分布.结果 3个制剂动态光散射光谱有显著差别.纳米乳剂Ⅰ,两种图谱示单峰(davg=264.2 nm);纳米乳剂Ⅱ和Ⅲ,两种图谱示双峰,纳米乳剂Ⅱ中大粒子(davg=315.5 nm)占54.3%,而小粒子(davg=73.6 nm)占45.7%;纳米乳剂Ⅲ示小粒子(davg=87.1 nm)占74.9 %,而大粒子(davg=232.7 nm)占25.1%.结论 3种纳米乳剂激光光散射光谱有显著差别,纳米乳剂Ⅰ粒径与Ⅱ、Ⅲ相比虽稍大,但均匀,该处方制得的制剂室温放置3年外观透明,物理稳定性良好.

莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察

目的制备莪术油纳米乳剂,详细评价制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素,并考察纳米乳剂在不同释放介质中的药物释放.方法采用高压乳匀法制备莪术油纳米乳剂;采用单因素和正交设计法考察制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素;采用动力光散射法测定其粒径及粒径分布;采用透射电镜法观察其形态;采用葡聚糖凝胶柱层析法测定包封率.结果所制备的纳米乳剂为类球状,大小均匀.平均粒径为(76.5±10.1)nm,纳米乳剂中吉马酮的质量浓度为(1.76±0.09)g·L-1,吉马酮的包封率为(84.4±1.0)%.结论高压乳匀法可用于莪术油纳米乳剂的制备,通过调节处方工艺可获得满意的粒度分布和包封率.

德国小蠊对敌敌畏纳米乳剂与普通乳剂的抗药性

[目的]了解德国小蠊敏感品系对敌敌畏(DDVP)纳米乳剂与普通乳剂的抗药性并探索两种剂型农药的抗性生化检测参考值.[方法]采用微量点滴法进行点药,选用羽化后的健康成虫70只(每组10只),在每只试虫中胸腹背板上滴药1μL,测得半数致死量(LD50).传代时以适当浓度点药(>LD50),雌雄各半,每组60只.酶活性的测定使用紫外分光光度计.[结果]DDVP纳米乳剂德国小蠊第四代时的抗性系数为1.2645,DDVP普通乳剂德国小蠊第三代时的抗性系数为2.1.德国小蠊对DDVP普通乳剂的抗性系数升高较对DDVP纳米乳剂的快,当抗性系数是2.0时已产生抗药性.点滴DDVP普通乳剂的德国小蠊酸性磷酸酯酶(ApE)以及a-乙酸萘酯(1-NA)酶活性参考值是180.04μmol/(g·min)和486.76μmol/(g·min).初步建立德国小蠊ApE酶活性(y)与DDVP普通乳剂抗性系数(J)的方程:y=0.05500x-7.90235;1-NA酯酶活性(y)与DDVP普通乳剂抗性系数(x)的方程:y=23.82441n(x)-62.02369.[结论]由于德国小蠊对DDVP纳米乳剂尚未产生抗药性,因此尚不能建立DDVP纳米乳剂的抗性酶与抗性系数之间的相关方程.

胃癌特异性纳米疫苗的制备及其生物学活性的研究

目的: 以胃癌特异性多肽抗原MG7为靶点研制胃癌特异性纳米疫苗,并观察其对小鼠的免疫效能.方法: 人工合成胃癌MG7-Ag的模拟表位多肽,用磁力超声法将其包封于纳米乳剂中,通过透析纯化,HPLC检测其包封效率.用包封有MG7抗原肽的纳米疫苗免疫健康Balb/c小鼠,以空白纳米疫苗和PBS作为对照,测定其免疫活性,通过ELISA测定血清中抗MG7抗体的效价;ELISPOT测定小鼠脾CTL活性.同时,用表达MG7-Ag的小鼠艾氏腹水瘤细胞进行肿瘤攻击2周,观察疫苗对小鼠的保护作用.结果: 成功制备了胃癌MG7-Ag的纳米疫苗,并具有较好的包封率和较好的稳定性,小鼠产生MG7抗体, ELISPOT检测包封组与对照组相比分泌IFN-γ的活性淋巴细胞数量明显增高.疫苗免疫组8只小鼠中有2只未见肿瘤形成, 而对照组8只小鼠则全部成瘤.结论: 胃癌MG7-Ag表位纳米疫苗具有免疫原性,可以诱导小鼠产生抗肿瘤免疫.

2种制剂的施药量对德国小蠊抗性相关酶活性的抑制作用

目的 探讨敌敌畏(DDVP)纳米乳剂、普通乳油的施药量对德国小蠊抗性相关酶活性影响的差别.方法 紫外分光光度法、酶标仪法测定相关酶活性,SAS、SPSS软件进行统计分析.结果 两种剂型的浓度与乙酰胆碱酯酶(AchE)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的抑制率均呈正相关(P＜0.05),两种剂型的浓度-酶(AchE、GST)抑制率回归直线之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).当DDVP纳米乳剂施药浓度高于0.002%时,碱性磷酸酯酶(BpE)的活性受到抑制,而DDVP乳油各施药组与对照组相比,BpE活性无显著性改变.结论 相同浓度下DDVP纳米乳剂对德国小蠊AchE、GST和BpE活性的抑制作用比普通乳油要强.

肿瘤特异性抗原纳米乳剂的制备及抗肿瘤免疫效应

目的制备包裹基因工程MAGE1-HSP70的纳米乳剂,研究其生物学特性及抗肿瘤免疫效应.方法采用界面聚合法,制备包裹MAGE1-HSP70的纳米乳剂(NE MAGE1-HSP70),于电镜下观察其形态并测量其粒径,凝胶层析法检测纳米乳剂包裹率、载药量、稳定性及体外释药特性.用NE MAGE1-HSP70免疫小鼠,运用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和细胞毒性杀伤实验(LDH)检测了NE MAGE1-HSP70激活机体细胞免疫反应的状况.结果成功地制备出粒径为(25±10) nm的纳米乳剂,包裹率为91%,载药量0.091 g*L-1,4℃放置6 mon后性质稳定.体外释药特性显示有70 % 的蛋白释放在24 h内完成.ELISPOT和LDH显示NE MAGE1-HSP70可以激活机体免疫反应产生针对MAGE1的CTL,特异性杀伤表达MAGE1的肿瘤细胞.结论 NE MAGE1-HSP70具有良好的包裹率和载药量,性质稳定且具有缓释作用,可以有效激活机体免疫反应产生针对特异性抗原MAGE1的CTL,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.

盐酸特比萘芬纳米乳剂点眼经角膜途径的吸收及分布特征

背景 纳米乳剂(NEs)具有稳定性好、毒性及刺激性小、载药量大及大幅度提高药物生物利用度的优点,是目前眼局部给药领域研究和应用多的纳米给药系统之一,眼局部给药后主要经角膜途径吸收.尽管NEs具有很多物理化学和生理学优点,但其吸收分布受到角膜各层组织结构的影响.目的 观察角膜上皮和基质对眼用盐酸特比萘芬纳米乳剂(TH-NEs)经角膜途径吸收及分布的影响.方法 自乳化法制备TH-NEs,光散射粒度分析仪测定纳米乳滴的粒径及Zeta电位,高效液相色谱法(HPLC)观察TH-NEs的体外释放特征.取新西兰白兔60只,按照随机数字表法分为完整角膜组和去角膜上皮组,每组30只,其中去角膜上皮组左眼去除角膜上皮;2个组实验兔随机平均分配于5个时间点,均以左眼为实验眼.TH-NEs点实验眼,分别于给药后15、30、60、120及240 min处死动物,剖取角膜组织,HPLC法测定角膜组织中TH质量分数.以荧光素二乙酸酯(FDA)对TH-NEs进行荧光标记,取4只C57BL/6小鼠,任意取其中2只小鼠麻醉后去除左眼角膜上皮,均以左眼为实验眼,荧光标记TH-NEs点眼,双光子激光扫描共焦显微镜观察给药后30 min及60 min角膜中荧光标记TH-NEs的分布情况.结果 TH-NEs中乳滴的平均粒径为51.37 nm,Zeta电位为-0.232 7 mV;加药后12h,药物的累积释放量为0.482％;兔眼完整角膜和去上皮角膜中药物质量分数的达峰时间均为15 min,药物的峰质量分数分别为(17.85±2.79)μg/g和(4.40±1.75) μg/g.给药后15、30、60和120 min,完整角膜中药物的平均质量分数均显著高于去上皮角膜,差异均有统计学意义(t=9.998、8.658、6.903、7.576,均P=0.000).给药后30 min和60 min,小鼠完整角膜中荧光标记TH-NEs均分布于角膜上皮,且角膜上皮表层荧光强度明显高于角膜上皮深层,而在去上皮角膜和完整角膜中,角膜基质内均未检测到FDA荧光.结论 TH-NEs点眼后,角膜上皮是TH-NEs经角膜途径吸收和分布的主要部位,而角膜基质层是TH-NEs向眼内扩散的主要屏障.角膜基质层可能是通过尺寸排阻作用阻碍TH-NEs的渗透.

NE(MHS)纳米乳剂疫苗的抗肿瘤免疫学效应研究

目的:制备包裹有MAGE1-Hsp70和SEA的复合抗原的纳米乳剂疫苗NE(MHS)(nanoemulsion-encapsulatedMAGE1-Hsp70/SEA),评价其抗肿瘤免疫学特性.方法:采用磁力超声法制备纳米疫苗NE(MHS),评价其粒径、包裹率及稳定性;NE(MHS)免疫动物,IFN-γ ELISPOT和LDH杀伤实验检测疫苗激活机体特异性细胞免疫反应情况;肿瘤攻击实验检测纳米乳剂疫苗的抗肿瘤效应.结果:(1)成功制备出粒径为(20±5)nm的NE(MHS),其药物包裹率为87%,于4℃放置6个月后或3 000 r/min 10 min离心后无分层;(2)与其他组相比,NE(MHS)组小鼠脾淋巴细胞中分泌IFN-γ的T细胞数量明显增多(P<0.05),CTL对B16-MAGE-1的特异性杀伤作用明显增强;NE(MHS)组B16-MAGE-1肿瘤成瘤时间长、成瘤率低.结论:NE(MHS)纳米乳剂疫苗具有良好的理化性质,能够刺激机体产生强烈的MAGE-1特异性的细胞免疫,能有效预防表达MAGE-1的肿瘤细胞攻击,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.

纳米乳剂的制备及特性鉴定

目的:制备包裹BSA-FITC的纳米乳剂(NEBSA-FITC),研究其特性以及树突状细胞(DC)和巨噬细胞对其摄取的效率.方法: 采用界面聚合法,制备包裹BSA-FITC的纳米乳剂(NEBSA-FITC),于电镜下观察其形态并测量其粒径.用凝胶层析法检测纳米乳剂的包裹率、载药量及稳定性.将小鼠骨髓DC及腹腔巨噬细胞与NEBSA-FITC共育后,用流式细胞仪检测DC及腹腔巨噬细胞摄取NEBSA-FITC的阳性率.用激光共聚焦显微镜观察DC摄取NEBSA-FITC的能力.结果:成功地制备出粒径为(25±10)nm的纳米乳剂, 其包裹率为91%,载药量为0.091 g/L, 于4℃放置6个月后性质稳定.流式细胞仪检测显示, DC和腹腔巨噬细胞摄取NEBSA-FITC的能力明显强于对游离BSA-FITC的摄取.激光共聚焦显微镜下观察到DC可摄取NEBSA-FITC.结论: 纳米乳剂具有良好的包裹率和载药量, 可有效地增强抗原递呈细胞对所载药物的摄取,有望作为肿瘤抗原疫苗的新型载体.

肿瘤基因工程纳米疫苗的药效学研究

目的观察肿瘤基因工程纳米疫苗对荷B16-MAGE-1肿瘤小鼠的疗效,并确定肿瘤抑制率分别为30%和50%的有效剂量和半数有效量(ED50).方法超声乳化法制备包裹基因工程复合抗原(融合蛋白MAGE-1-HSP70与超抗原SEA按摩尔比100:1混合)的纳米乳剂,皮下注入荷B16-MAGE-1肿瘤C57BL/6小鼠体内,设低、中、高(0.32mg,1mg和3.16 mg/kg)3个剂量,并设阴性(生理盐水)、阳性(环磷酰胺)对照组.结果中剂量和高剂量的抑瘤率均大于30%,且和阴性对照组有显著性差异,三组剂量的对数值和肿瘤抑制率的线性关系为:Y=39.795+lgX64.014(P＜0.05),由此得到有效量和半数有效量分别为0.6952mg/kg和1.4607mg/kg.结论该肿瘤基因工程纳米疫苗NE(MAGE-1/HSP70/SEA)能有效地抑制肿瘤生长,是一种很有希望的新型抗肿瘤疫苗.

纳米乳剂的制备及特性鉴定

纳米乳剂在生物恐怖防护中的应用

由于军事环境的改变和生物技术的发展,生物恐怖已成为本世纪极大的威胁.采用新技术防范生物恐怖袭击是生物反恐的重要课题.本文对新型纳米乳剂的概念、特点及在生物恐怖防护中的应用作了概要介绍.