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MAGE-A4重组蛋白的原核表达与纯化
目的 构建MAGE-A4的原核表达质粒并表达纯化相应蛋白,为恶性肿瘤的早期诊断和基因治疗疫苗的研制奠定基础.方法 根据目的基因序列合成目的基因并与原核表达载体连接,以构建原核表达质粒pET30a(+)/MAGE-A4,将酶切鉴定及测序正确的重组质粒转入E.coli BL21,经IPTG诱导表达并行可溶性分析,Western Blot鉴定重组蛋白特异性后,通过亲和层析法纯化重组蛋白.结果 成功构建pET30a (+)/MAGE-A4原核表达质粒,诱导表达得到重组蛋白MAGE-A4,主要以可溶性形式表达,纯化后获得纯度较高的蛋白.结论 成功构建pET30a(+)/MAGE-A4原核表达质粒并表达纯化出具有生物学活性的重组蛋白MAGE-A4.
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MAGE-A4在脑胶质瘤中的表达及临床意义
目的 观察MAGE-A4 mRNA在脑胶质瘤中的表达情况,探讨其表达与病理级别、KPS评分等临床参数及总生存期的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MAGE-A4 mRNA在78例脑胶质瘤组织、12例正常脑组织和7例正常睾丸组织中的表达,分析其表达与性别、年龄、KPS评分及病理级别等临床参数及总生存期关系.结果 MAGE-A4 mRNA在正常睾丸组织、正常脑组织及胶质瘤中的表达率分别为100％、0％、47.44％,差异有统计学意义(P＜0.05);MAGE-A4 mRNA表达与病理分级相关(P＜0.05);胶质瘤患者总生存期与病理分级、KPS评分相关(P＜0.05).结论 MAGE-A4在脑胶质瘤组织中有特异性表达,并且与病理级别显著相关,而在正常脑组织中没有表达,故MAGE-A4可以作为脑胶质瘤免疫治疗的理想靶点;胶质瘤患者KPS评分和病理分级,可作为判断患者预后依据.
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人黑素瘤抗原MAGE-A4对p53转录活性的影响
目的:探讨人黑素瘤抗原-A(melanoma antigen-A,MAGE-A)对p53转录活性的影响.方法:选用p53缺失型人肺癌细胞系H1299,采用荧光素酶报告分析法、RT-PCR、Western印迹法、克隆形成实验和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP nick end labeling,TUNEL)等方法研究MAGE-A4对p53转录活性的影响.结果:荧光素酶报告分析结果显示,转染p53基因(25 ng)可以使p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达增加(P＜0.01);共转染恒定量(25 ng)的p53基因和不同量的MAGE-A4基因(100、200和400 ng)后, p21WAF1启动子介导的荧光素酶表达均明显高于单独转染p53基因时的表达量(P＜0.01).RT-PCR和Western印迹法检测结果也显示,转染p53基因可以使p21WAF1mRNA和蛋白表达水平增加(P＜0.01),共转染MAGE-A4基因和p53基因后,p21WAF1mRNA和蛋白表达水平均明显高于单独转染p53基因时的表达水平(P＜0.01).克隆形成实验及TUNEL染色结果显示,转染p53基因可以使H1299细胞克隆形成数减少及凋亡细胞数增加(P＜0.01),共转染MAGE-A4基因和p53基因以后,H1299细胞克隆形成数与单独转染p53基因组相比减少,而凋亡细胞数与单独转染p53基因组比较增加(P＜0.01).结论:MAGE-A4可以增强p53的转录活性及功能发挥.
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肿瘤抗原MAGE-A4在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其作用
目的 检测正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4(melanoma antigen-A4)mRNA的表达,探讨其与乳腺癌临床参数、生物学行为的关系以及对乳腺癌细胞增殖的影响.方法 用RT-PCR方法 检测77例正常乳腺组织及乳腺癌组织中MAGE-A4 mRNA的表达状况,用χ~2检验分析其表达与乳腺癌临床参数及生物学行为的关系;用集落形成实验研究MAGE-A4对乳腺癌细胞增殖的影响.结果 77例正常乳腺组织中没有检测到MAGE-A4 mRNA的表达;77例乳腺癌组织有33例MAGE-A4 mR-NA阳性表达.阳性率为42.9%.60(含60岁)岁以上乳腺癌患者MAGE-A4 mRNA阳性表达率明显高于60岁以下患者(P<0.05);但MAGE-A4 mRNA表达与乳腺肿瘤的大小、临床分期、病理类型、组织学分级、淋巴结转移、有无瘤栓、ER/PR及HER-2状态之间无明显相关性(P>0.05).乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231均不表达MAGE-A4 mRNA,而乳腺癌细胞系MDA-MB-436中MAGE-A4mRNA呈高表达.转染MAGE-A4基因可以抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞克隆的形成(P<0.05).结论 MAGE-A4在正常乳腺组织不表达,在乳腺癌组织中表达卒为42.9%,提示MAGE-A4是一种肿瘤特异性抗原.该基因的表达与乳腺癌患者的年龄有关,与其他临床参数及生物学行为无明显相关性.在MAGE-A4阴性表达的乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中转染MAGE-A4基因可抑制该细胞的克隆形成.
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TrKB及MAGE-A4在三阴性乳腺癌组织中的表达及其临床意义
目的:研究原肌球蛋白受体激酶B(TrKB)和黑素瘤相关抗原(MAGE)-A4在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及其临床意义.方法:收集2012年1月至2015年12月在广西医科大学第一附属医院接受手术治疗的乳腺癌患者200例,其中TNBC 71例,Her-2过表达型61例,Luminal A型33例,Luminal B型35例.采用免疫组化法检测各分子分型乳腺癌组织中TrKB和MAGE-A4的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系.结果:TNBC患者TrKB表达阳性率为46.48％,显著高于其他分子分型乳腺癌(P≥0.05);MAGE-A4在TNBC中的表达阳性率为35.21％,与其他各型乳腺癌比较差异无统计学意义(P＞0.05).TrKB表达与腋窝淋巴结转移及分子分型有关(P≥0.05),但与月经状态、患者年龄、肿瘤大小、临床分期及组织学分级无明显相关(P＞0.05).MAGE-A4与临床分期有关(P≥0.05),但与月经状态、患者年龄、肿瘤大小、淋巴结状态、组织学分级无明显相关(P＞o.05).结论:TrKB在TNBC中呈高表达,可能与肿瘤细胞具有高侵袭性有关,可作为判断TNBC恶性程度的标志及可能的治疗靶点;MAGE-A4可能在肿瘤发展过程中起保护作用.
