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结核分支杆菌株水平鉴定技术及其研究进展
结核分支杆菌菌株分型对结核病流行病学调查和监测、传染源的发现、传播途径的阻断以及发病机制的研究都极为重要.结核分支杆菌的分型方法,主要分为非核酸法和核酸法.非核酸分型方法即传统分型方法,多是在细菌表型特征的基础上认识细菌的,包括生化分型法、血清分型法和噬菌体分型法.但由于结核分支杆菌分离株具有高度同源性,通过常规的生化试验和血清学方法是无法鉴别的,所以,对于结核分支杆菌,唯一可用的传统的菌株鉴定方法只有噬菌体分型法.随着分子生物学理论和技术的飞速发展,1980年以后,逐步建立了一些根据核酸序列进行菌株鉴定的高度特异的基因分型方法,即核酸法.主要包括:限制性片段长度多态性(RFLP)、DNA指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)、聚合酶链反应(PCR)酶切分型、随机扩增多态性(RAPD)DNA、DNA序列分析以及基因芯片技术等等.随着上述方法的应用,使结核分支杆菌的菌株分型进入了一个全新的领域,也进而使结核病流行病学的研究取得了很大的进展,现将对上述各分型方法综述如下.
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诱导型一氧化氮合酶基因启动子-969G→C多态性的功能
目的:探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因启动子-969G→C多态性的功能意义.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增已知的iNOS基因启动子-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子DNA序列,再采用基因重组技术将获得的启动子与PGVB-2-E荧光素酶载体质粒连接,构建新的重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,并进行酶切图谱分析和测序分析.然后将重组质粒分别在脂质体的介导下转染HepG2细胞,检测荧光素酶的表达水平,分析不同基因型启动子的活性差异.结果:成功构建iNOS基因-969G→C多态性的GC和GG基因型启动子荧光素酶载体重组质粒pPGV-iNOSmt和pPGV-iNOSwt,发现iNOSmt启动子的活性比对照启动子的活性显著升高,升高132.1%,差异有显著性(P<0.05),iNOSwt启动子的活性比对照启动子的活性升高14.3%,差异无显著性(P>0.05).iNOSmt启动子活性升高的百分率是iNOSwt启动子的9倍.结论:iNOS基因启动子-969G→C的多态性改变导致该启动子的活性增强.
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掌握信息外观鉴定近红外检测——三步法打假模式探讨
目的 探索“三步法”在提高药品快检打假效率中的运用.方法 通过掌握假药信息确定重点检测品种,从药品外包装上识别可疑品种,进而开展药品近红外图谱对比分析,综合判断初筛结论.结果与结论 这种方法能有效提高快检初筛的靶向性,同时适当地排除近红外检测中出现的假阳性,降低误判率.
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超声心动图诊断肺动脉狭窄分型的图谱分析及超声表现
目的 本文通过我院2005年5月至2008年3月共诊断19例肺动脉狭窄的图谱分析,探讨肺动脉狭窄分型的超声表现及临床价值.方法 使用ATL 3500与ATL 5000超声诊断仪,探头频率是2~4MHz,经胸对心脏进行各切面扫查.结果 19例肺动脉狭窄中,主干型:7例;中间型:12例,其中右肺动脉狭窄5例,左肺动脉狭窄4例,左,右肺动脉均狭窄2例,主干合并中间型1 例.按是否合并其它心脏疾病者分:单纯型:5例;合并型14例.结论 超声心动图对肺动脉狭窄分型具有较高的诊断价值,是肺动脉狭窄分型的有效诊断方法.可作为首选诊断方法.
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Lumiata用大数据建医疗图谱
Lumiata是首家提出“医疗图谱(medicalgraph)”的公司,他们把电子病历和病理生理学等数据整合起来,并通过图谱分析的方式去模拟人类的多维推理过程,进而预测出患者会需要什么、以及何时需要。利用这些数据, Lumiata还可以去分析和预测一个人群整体的健康状态。
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心脏术后患者鲍曼不动杆菌感染基因同源性分析
鲍曼不动杆菌(acinetobacter baumannii,aba)是引起医院内感染的重要致病菌,对常用的大多数抗生素耐药.2001年10月至2002年8月,上海市中山医院心脏外科重症监护室(cardiosurgical intensive care unit,CICU)aba感染率异常增高,陆续从患者血或痰标本中分离出aba.为了解CICU内是否发生了aba的交叉传播,我们收集自不同患者分离的aba 28株,作脉冲场凝胶电泳(pursed-field gel electrophoresis,PFGE)全DNA指纹图谱分析,通过对菌株进行基因分型和亲缘关系鉴定,明确这些菌株在流行病学上的相关性.
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血清蛋白电泳的临床应用
随着全自动电泳仪的出现,血清蛋白电泳得以在临床广泛应用.因其检测速度快,图谱清晰,重复性好,电泳仪自动扫描后通过计算软件能较精确地计算出各类蛋白质的百分含量,再乘以总蛋白还可得到各成分的绝对含量及A/G比值(白蛋白与球蛋白的比),现将正常蛋白电泳区带组成及图谱以及常见图谱的分型及其特征介绍如下.
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自身免疫调节因子(AIRE)在免疫调节中的研究现状及进展
正常的免疫反应中存在着耐受性,而如果表现为对自身组织成份的无反应性,就称为自身耐受,自身耐受的产生则包括中枢耐受和外周耐受。正常情况下,动物的免疫系统只对自身以外的异物抗原发生反应,而对自身成分形成耐受,但由于某些原因对自身构成成分引起免疫反应时,则称为自身免疫。自身免疫是在基因和环境因素的共同作用下导致的,对其基因图谱分析显示发病均与多基因突变有关。近年的研究表明,自身免疫调节因子( Autoimmune regulator,AIRE)对于中枢以及外周耐受的发展有着举足轻重的作用。它已被证明参与T细胞在胸腺内的阴性选择,且可能与胸腺髓质上皮细胞(medullary thymic epithelial cell,mTEC)的成熟和凋亡有关,而该因子是否对调节性T细胞( Treg )产生影响目前尚存争议。 AIRE在胸腺外器官及组织中亦被检测到,而其对于外周免疫细胞的功能影响表明或许存在胸腺外的免疫作用。关于该基因突变所引起的自身免疫疾病的研究也获得了诸多成果。
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抗精神病药物配伍联用品种与剂量关系的图谱分析
目的 对抗精病药物配伍联用品种与剂量关系的图谱进行分析评价.为临床合理用药提供参考.方法 回顾350例已出院的精神病患者的用药情况,用图谱进行统计分析.结果 总共涉及的治疗方案有31种.其中,单用1种抗精神病药治疗方案有13种172例(49.15%);联用2种药的方案有19种139例(39.72%);联用3种药的方案有10种38例(10.85%);联用4种药的方案有1种1例(0.28%).抗精神病药物二联用药例数居前5位的为喹硫平56例(34.26%),氯氮平48例(30.80%),利培酮45例(28.47%),奥氮平41例(26.07%),阿立哌唑36例(22.17%).结论 随着联用品种类增加,平均用药剂量成逐步减少,用量少于单用剂量,符合配伍使用基本原则.
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结核分枝杆菌分型鉴定技术及其研究进展
结核分支杆菌的分型鉴定方法,主要分为非核酸法和核酸法.非核酸分型方法即传统分型方法,多是在细菌表型特征的基础上认识细菌的,包括生化分型法、血清分型法和噬菌体分型法.但由于结核分枝杆菌分离株具有高度同源性,通过常规的生化试验和血清学方法是无法鉴别的,所以,对于结核分枝杆菌,唯一可用的传统的菌株鉴定方法只有噬菌体分型法.随着分子生物学理论和技术的飞速发展,1980年以后,逐步建立了一些根据核酸序列进行菌株鉴定的高度特异的基因分型方法,即核酸法.主要包括:限制性片段长度多态性、DNA指纹图谱分析、脉冲场凝胶电泳、PCR酶切分型、随机扩增多态性DNA、DNA序列分析以及基因芯片技术等等.随着上述方法的应用,使结核分枝杆菌的菌株分型进入了一个全新的领域,也进而使结核病流行病学的研究取得了很大的进展.
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酒渣鼻1家系5例
患者男,27岁.鼻部及下颏部红斑,鼻尖及两侧鼻翼可见树枝状毛细血管扩张.自述寒冷及食用刺激食物后加重,无其他遗传性疾病.家族成员8名,散居.三代家人中有5例患者,均为青年男性发病.对患者家系图谱分析,符合遗传学特征.但因家族成员较少,尚难以确定其遗传方式.
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肺癌组织中蛋白质组双向电泳图谱分析方法的建立
目的:建立一套双向凝胶电泳图像的分析方法,为进一步分析和鉴定差异蛋白奠定基础.方法:提取肺癌组织和癌旁组织中的可溶性总蛋白,进行双向凝胶电泳,电泳图片由专用扫描仪获取后,应用图像分析软件(PDQuest 7.1)进行蛋白差异点的表达情况分析.结果:二维电泳图片经过背景消减、点检测、点匹配等一系列分析后,得出了差异点.结论:PDQuest 7.1软件可以用来快速有效地对生物样品之间蛋白质的差异进行分析.
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X-连锁遗传性耳聋
X-连锁遗传性耳聋是指与耳聋表型相关的致病基因位于 X 染色体上,这些基因的遗传方式可以是显性的,也可以是隐性的,此类耳聋表型与性别相关。1930年 Dow 和 Poyner 首次报道了典型的 X-连锁遗传性耳聋,随后发现与常染色体遗传性耳聋相同,X-连锁遗传性耳聋也包括非综合征型耳聋及综合征型耳聋。对于非综合征型 X-连锁遗传性耳聋,听力损失是其唯一临床表现,根据显性及隐性遗传方式的不同,患者的发病年龄、听力损失程度等表型亦各异。综合征型 X-连锁遗传性耳聋,除了耳聋表型外同时伴有其他器官系统功能异常,比如Alport 综合征、Norrie 综合征和伴外淋巴井喷的进行性混合性聋都是 X-连锁遗传病。X-连锁遗传性耳聋较常染色体遗传性耳聋相对罕见,在遗传性耳聋中的发病比例在1%左右,但在临床遗传咨询中,通过家系图谱分析、患者的表型特征及基因检测明确 X-连锁遗传,尤其是要明确家系中女性患者和女性携带者,这对减少家庭中后代耳聋的发生意义重大。
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氮杂噢哢中苯环13C-NMR图谱分析
用合成出的氮杂噢哢所测定的 13C-NMR图谱与对应的噢哢类化合物的相关文献报道、文献报道经验计算结果以及计算机分析软件模拟计算结果相对照,分析比较苯环上对应各碳在图谱中的化学位移,确证化合物结构,研究其 13C-NMR图谱出峰顺序和规律,并丰富相关化合物的波谱数据.
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用琼脂糖凝胶膜片作介质进行非浓缩尿蛋白电泳
目的 探讨尿蛋白电泳技术选用介质的经验体会.方法 利用血清琼脂糖凝胶膜片进行非浓缩尿蛋白电泳,对病理性,生理性尿蛋白进一步鉴定.结果 实验发现尿蛋白电泳测定结果 必须通过将各尿样本的蛋白区带与血清蛋白电泳五条区带位置比较,评价尿标本是蛋白带的分子量范围,然后判定蛋白尿的病理类型.结论 琼脂糖凝胶膜片的尿蛋白电泳在病理性和生理性蛋白尿鉴定中具有较高的特异性和敏感性,应加强其在临床中的应用.
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油脂类药用辅料橄榄油中甾醇谱的研究
目的:分析油脂类辅料橄榄油中甾醇组成及质量分数.方法:首先从橄榄油中提取不皂化物,运用高效液相色谱法从不皂化物中分离并收集甾醇的馏分.液相色谱条件:采用Kromasil 60-5 SIL硅胶柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以异丙醇-正己烷(1:99,v/v)为流动相等度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长210 nm,进样量20 μL.然后对馏分进行衍生化,采用气相色谱法检测各甾醇的组成及百分含量;气相色谱条件:采用DB-5毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm),进样口温度:290℃;进样量:2~3 μL;分流比为25:1;载气:氦气;流速1.8 mL·min-;程序升温:起始柱温260℃,保持50 min,再以5℃·min-的速率升温至290℃,保持5 min.结果:橄榄油中含有多种甾醇,如胆甾醇、菜子甾醇;菜油甾醇、豆甾醇、△7-菜油甾醇、△5,23-豆甾二烯醇、赤桐甾醇、β-谷甾醇、谷甾烷醇、△5-燕麦甾醇、△5,24-豆甾二烯醇、△7-豆甾醇等,其中β-谷甾醇的含量比较高,占总甾醇量的80%以上,其次是菜油甾醇,△5,24-豆甾二烯醇等.结论:本法可以对油脂类辅料橄榄油中的甾醇谱进行分析,为油脂类药用辅料植物油中甾醇谱的研究提供了参考.
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弱精不育患者与正常生育能力者精浆蛋白质的双向电泳图谱分析
目的:探讨2-DE技术在人类正常与弱精不育者精浆全蛋白中筛选差异蛋白的应用.方法:先用IPG-DALT技术对12例弱精不育与5例正常精浆蛋白进行分离,银染后,经PDQUest 2D比较二者间差异蛋白点.结果:在不育精浆中高丰度存在而正常精浆中低表达的有55个蛋白斑点(3个在正常缺失),在正常精浆中存在而在不育精浆中低表达的有43个(3个在不育缺失).结论:成功建立了正常与弱精不育精浆蛋白的2-DE图谱并分析表达差异蛋白,为弱精症精浆差异表达蛋白的质谱鉴定奠定了基础.