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不同方法制备脂质体125I-IL-8包封率的比较
本文用四种不同的方法制备脂质体,同时包裹125I-IL-8.对不同方法制备的脂质体包裹125I-IL-8的包封率进行对比.结果表明:机械分散法、钙融合法、反相蒸发法制备的脂质体对125I-IL-8的包封率依次增大.而用反相蒸发法和钙融合法联合制备的脂质体对125I-IL-8的包封率为大.
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HIF-1α转染方法的优化及其对间充质干细胞存活及分化功能的影响
目的 探索应用脂质体作为载体将低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染至间充质干细胞(MSCs)的转染方法.方法 应用脂质体作为载体将HIF-1α转染至P3代MSCs,荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,评估转染效率.比较在不同情况下细胞的转染效率.将转染的MSCs、空质粒转染的MSCs和未转染的MSCs置于缺氧环境下(CoCl2模拟缺氧),比较3种细胞HIF-1α mRNA、HIF-1α蛋白的表达.鉴定转染的MSCs向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力,及在缺氧环境中的存活率.结果 应用脂质体法可以成功将pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP转染至MSCs.当细胞汇合度在80％以上,DNA与质粒的比为(g/μL)1∶1.25,且转染时间为4h时转染效率高,为21％.转染HIF-1α的MSCs在缺氧环境中可被成功向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,HIF-1α转染可以提高缺氧时MSCs存活率(P＜0.05).在缺氧条件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬时转染的MSCs较空质粒(pcDNA3.0-eGFP)转染的MSCs和未转染的MSCs能高表达HlF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P＜0.05).结论 应用脂质体作为载体可以将HIF-1α转染至MSCs,HIF-1α转染的MSCs在缺氧时高表达HIF-1αmRNA及蛋白.
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反基因锁核酸体外阻断肝癌细胞系乙肝病毒S基因表达
目的 探讨针对乙肝病毒S基因同聚嘌呤区的锁核酸体外抑制细胞内病毒复制的效果.方法 针对乙肝病毒S基因同聚嘌呤区设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导,体外转染HepG2.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术和时间分辨免疫荧光技术分别监测2、4、6、8和10 d细胞培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg的含量;四甲基偶氮唑蓝法检测锁核酸对细胞代谢的影响.结果 加入锁核酸后,对细胞内HBV DNA复制、HBsAg与HBeAg表达均有较明显的时间和剂量依赖性抑制作用,6d后抑制率分别为52.14％、57.48％和29.63％.锁核酸对细胞代谢无明显影响.结论 针对乙肝病毒S基因同聚嘌呤区的锁核酸,体外能有效抑制乙肝病毒的复制,既为乙肝病毒治疗提供有效靶位,也为反基因治疗提供理论和实验依据.
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反基因锁核酸体外抑制乙肝病毒前S1基因表达
目的 探讨针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的锁核酸体外抑制细胞内病毒复制的作用.方法 针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区,利用RNA structure软件分别设计合成锁核酸、硫代寡核苷酸、未修饰寡核苷酸及无关对照序列,以阳离子脂质体介导转染HepG2.2.15细胞,采用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)、时间分辨免疫荧光技术(TRFIA)和酶联免疫法(ELISA)分别监测1、3、5和7d细胞培养上清液中HBV DNA、HBsAg和前S1抗原的含量；四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测锁核酸对细胞代谢的影响.结果 加入锁核酸后,对HBV DNA复制、HBsAg和前S1抗原表达均显示有较强的抑制作用,且抑制率随时间呈增高趋势,7d后抑制率分别达65.99％、67.49％和63.88％.LNA对细胞代谢无明显影响.结论 针对乙肝病毒前S1基因同聚嘌呤区的反基因锁核酸,体外能有效抑制乙肝病毒的复制,既为乙肝病毒治疗提供有效靶位,也为反基因治疗提供理论和实验依据.
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磁性纳米颗粒与脂质体介导REST-siRNA转染hADSCs的比较
目的 对聚乙烯亚胺包被的磁纳米颗粒(PEI-SPIO)与脂质体(lipofectamineTM 2000)作为基因载体转染人脂肪间充质干细胞(hADSCs)的可行性及转染后细胞的增殖、转染效率及基因瞬时干扰效率进行比较分析.方法 分别将PEI-SPIO和lipofectamineTM 2000作为基因载体连接REST-siRNA体外转染hADSCs,用MTT法检测hADSCs增殖和功能;用荧光显微镜观察转染效率;分别用Real-time PCR和Western blot检测REST的表达.结果 用磁性纳米颗粒和脂质体作为基因载体转染细胞后,细胞成活率分别为99％和79％ (P ＜0.05);磁纳米颗粒和脂质体的转染效率无差异,分别为75％和71％;磁纳米颗粒和脂质体作为基因载体时RNA表达量分别为(0.46±0.04)和(0.53±0.05),蛋白水平表达量分别为(0.501 ±0.006)和(0.523 ±0.004).结论 磁性纳米颗粒因其具有低细胞毒性可代替脂质体作为转染干细胞的基因载体.
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RGD和细胞穿膜肽共修饰脂质体的构建及其体外功能评价
目的 制备RGD和TAT共修饰载紫杉醇(PTX)脂质体(RGD/TAT-LP-PTX),研究其理化性质和体外抗肿瘤作用.方法 薄膜分散法制备RGD/TAT-LP-PTX,研究其理化性质;检测肝癌HepG2细胞对RGD/TAT-LP的摄取效率以及脂质体的摄取机制.共聚焦实验研究肿瘤细胞对脂质体的摄取.MTT检测RGD/TAT-LP-PTX对HepG2细胞的增殖抑制作用.结果 RGD/TAT-LP-PTX的粒径134.5 ±8.4 nm,电位为22.35±2.55 mV,紫杉醇的包封率84.6％.RGD/TAT-LP在4h摄取效率是2h的1.65倍(P＜0.05);HepG2细胞在4h对RGD/TAT-LP的摄取效率分别是TAT-LP、RGD-LP和LP的2.2倍、2.7倍和3.9倍(P＜ 0.01);RGD/TAT-LP-PTX在24 h HepG2细胞的存活率是48 h的1.75倍(P＜0.05);给药48 h后,TAT-LP-PTX、RGD-LP-PTX和LP-PTX的细胞存活率分别是RGD/TAT-LP-PTX组的1.65倍、1.74倍和2.1倍(P＜0.01).结论 RGD和TAT共修饰紫杉醇脂质体是一种潜在高效的肿瘤靶向给药系统.
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磷脂对脂多糖诱导中性粒细胞CD11a表达的影响
本实验主要研究与磷脂作用后脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)生物学活性的变化.用与不同磷脂预孵育后的LPS刺激细胞,检测中性粒细胞的粘附功能及巨噬细胞分泌细胞因子功能的变化.结果发现与磷脂孵育后,LPS可插入磷脂脂质体膜中,使中性粒细胞粘附功能降低,巨噬细胞分泌细胞因子减少.结果提示LPS插入细胞磷脂中可以改变其生物学活性,推测细胞膜磷脂成分降解可能是LPS诱发炎症反应的重要原因.
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壳聚糖脂质体复合载体的核酸递送
目的 构建一种由脂质体Lipofectamine2000、低分子质量壳聚糖、pDNA组成的三元新型复合载体用于核酸递送能力研究.方法 复合物形态采用原子力显微镜轻敲模式下表征、载体与核酸结合能力采用凝胶延滞法表征,Hep-2细胞报告基因表达利用倒置荧光显微镜检测.细胞毒性研究采用3-甲基-2-噻唑硫酮(MTT)法.结果 复合载体与pDNA结合能力强,可完全延滞pDNA.脂质体/壳聚糖/pDNA复合载体形态呈现出未完全压缩的球形,短棒状和不规则的聚集块.新型载体转染Hep-2细胞提高了绿色荧光蛋白报告基因的表达效率.与脂质体对照载体比较,基因转染效率提高了2～4倍,对照壳聚糖载体无明显转染效果.细胞毒性表明壳聚糖降低了脂质体的细胞毒性.结论 基于脂质体的壳聚糖新型复合载体具有核酸递送潜力.
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两种非病毒载体介导microRNA转染的对比
microRNA作为核酸类药物,在细胞和生物体内存在稳定性差,半衰期短,转染效率低,靶向性差[1],故转染过程需要高效、高安全性的载体.Lipofectamine是常用的转染脂质体,可与 DNA形成复合物,有较强的转染能力.聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)属阳离子聚合物,在体内外均有较高的转染效率,不良反应较低[2].选择适合的小分子RNA基因载体对其后续研究至关重要.本研究分别选择了脂质体lipofectamin2000和阳离子聚合物PEI作为microRNA的转染载体,在体外检测其在悬浮细胞THP-1中的转染效率和细胞死亡率,比较两种转染载体的转染特性及作为microRNA基因载体的可行性.
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脂质体介导质粒转染角朊细胞的影响因素
探讨利用脂质体介导真核表达质粒转染体外培养的人角朊细胞的佳转染条件。体外分离培养正常人角朊细胞，培养至60%、70%、80%、90%及100%融合时，应用不同浓度的LipofectAMINE包被真核表达质粒pCMV*SPORT-β-gal，分别转染6、8、10、12及24h。细胞经转染后再培养48h，行β-半乳糖苷酶原位染色，镜下观察并计算阳性转染率。被转染的阳性细胞，可见质粒β-半乳糖苷酶基因的良好表达；当细胞融合率为80%、90%，以12.5μL/100μL的LipofectAMINE包被1.5μg/100μL的pCMV*SPORT-β-gal，转染时间为8 h的转染率高，可分别达到（31.35±1.35）%、（32.32±2.4）%。该实验说明LipofectAMINE可有效地介导真核表达质粒转染培养的人角朊细胞；转染率与细胞生长状态、脂质体包被质粒的浓度比例、及转染时间直接相关。
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磷酯酰丝氨酸脂质体模拟凋亡细胞，通过扩增分泌多反应性IgM 的 B1a 淋巴细胞来减轻动脉粥样硬化
传统的 B2细胞能促进动脉粥样硬化的形成，腹腔 B1 a 细胞则能通过产生天然的 IgM来发挥保护作用。已有研究表明，腹腔注射凋亡细胞能在体诱导分泌 IL-10的调节性 B 细胞的增生，从而抑制自身免疫疾病的发展。在凋亡细胞中，磷酯酰丝氨酸（phosphatidylserine，PS）会暴露于细胞膜的外表面，而已知 B1 a 细胞表达 PS 的受体 TIM-1和 TIM-4。基于此，本文的研究人员提出，凋亡细胞或通过磷酯酰丝氨酸脂质体（phosphatidylserine liposomes，PSLs）模拟凋亡细胞表面的 PS 可能通过 TIM受体信号来激活腹腔 B1 a 细胞，活化的 B1 a 细胞分泌天然 IgM从而能抑制动脉粥样硬化的发展。
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POMC 神经元自噬与脂质体自噬
机体脂肪动员产热，不仅依赖于脂肪酶系统，“脂质体自噬”（lipophagy）亦密切参与其中。机体重要的脂肪酶包括：脂肪甘油三酯脂酶（adipose triglyceride lipase，ATGL）和激素敏感脂肪酶（hormone-sensitive lipase，HSL），二者均可促进“脂滴动员”（lipid droplet mobilization），提高脂质分解代谢水平。近，美国爱因斯坦医学院 Nuria Martinez-Lopez 等研究人员发现：“自噬相关蛋白”介导的脂质体自噬亦参与脂滴动员，而且，该过程受下丘脑代谢神经元的调控。
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探索者的回忆
编者按林克椿教授是一位资深的生物物理学家,他在研究中发现了螺旋脂质体,证明了螺旋是生命物质共同的稳定存在形式,他还应用扫描隧道显微技术在脂多型性问题上进行了一系列开创性工作.林教授服从需要,把毕生精力奉献在生物物理学专业的组建和发展上.他识大体、顾大局的精神值得提倡和学习.
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阿苯达唑新剂型抗包虫病的药效学实验研究
目的观察多种药物载体[大分子物(Macrosol)、脂质前体(Pre-liposome)、脂质体(liposome)]与ABZ结合后,ABZ的生物利用度和抗棘球蚴病的效果.方法选用90只健康长爪沙鼠,随机分为9组,每组10只.腹腔接种泡球蚴组织(E.m),建立动物模型.接种6周后开始给药,治疗组ABZ均按50 mg/kg剂量给药,对照组每只长爪沙鼠经口服或腹腔注射0.2 ml生理盐水.每周一、三、五,连续6周.末次给药后4 h将动物处死,取血、肝、E.m组织.观察指标:1) E.m湿重及减重率;2)E.m组织头节阳性率,再观察病理组织学改变;3)HPLC测定血、肝、囊内的ABZ 及其主要代谢产物ABZSX和ABZSN的浓度.结果新剂型ABZ组(总体)E.m组织的减重率与ABZ片剂粉末组相比,差异有显著性(P＜0.05). 病理切片头节的阳性率与对照组相比差异有显著性.超微结构的改变与其相符合.代谢产物ABZSX和ABZSN的血药浓度分别是:1)ABZSN的药物浓度:L-ABZ口服组:血浆中为(1.014±0.239) μg/g,肝脏中为(0.036±0.007) μg/g,E.m组织中为(0.031±0.009) μg/g;L-ABZ注射组:血浆中为(2.423±1.070) μg/g,肝脏中为(0.688±0.008) μg/g,E.m组织中为( 0.049±0.008) μg/g;P-L-ABZ口服组:血浆中为( 0.778±0.489) μg/g,肝脏中为(0.027±0.003) μg/g,E.m组织中为( 0.036±0.009) μg/g;M-ABZ口服组:血浆中为(2.541±0.287) μg/g,肝脏中为(0.055±0.011) μg/g,E.m组织中为(0.049±0.004) μg/g.较ABZ粉剂组在灌药后4 h的血药(0.297±0.064) μg/g、肝药(0.016±0.002) μg/g及E.m组织内的浓度(0.030±0.008) μg/g,均有明显的提高(P＜0.05).2)ABZSX的药物浓度:L-ABZ口服组: 血浆中为(0.922±0.462) μg/g,肝脏中为(0.044±0.004) μg/g,E.m组织中为( 0.029±0.008) g/g;L-ABZ注射组:血浆中为(1.154±0.624) μg/g,肝脏中为(0.035±0.004) μg/g,E.m组织中为(0.023±0.006) μg/g;P-L-ABZ口服组:血浆中为(0.629±0.259) μg/g,肝脏中为(0.040±0.001) μg/g,E.m组织中为(0.032±0.007) μg/g;M-ABZ口服组:血浆中为(2.552±0.180) μg/g,肝脏中为(0.050±0.005) μg/g,E.m组织中为(0.033±0.007) μg/g.较ABZ粉剂组在灌药后4 h的血药(0.305±0.090) μg/g、肝药(0.026±0.004) μg/g及E.m组织内的浓度(0.024±0.010) μg/g,均有明显的提高(P＜0.05).结论新型药物载体与ABZ相结合,提高了ABZ的主要抗棘球蚴药理成分ABZSX和ABZSN的血、肝及囊内药物浓度,有显著抑制、杀灭头节的作用,抑制病灶的增殖,对棘球蚴病可造成明显的病理性损害,新型药物载体包裹ABZ,可使其抗棘球蚴病的作用大为增强.
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ABZ-CS-MPs治疗泡球蚴小鼠血清Th1/Th2细胞因子的变化及意义
目的 观察阿苯达唑壳聚糖微球(ABZ_CS-MPs)治疗小鼠继发性泡状棘球蚴病的疗效.方法 将继发性泡状棘球蚴病随机分组,其中治疗组分别给予ABZ-CS-MPs和阿苯达唑脂质体(L-ABZ),剂量均为75 mg/(kg·d),模型对照组不作治疗.用小鼠灌胃针经口每周灌胃3次,连续灌胃6周、9周后(期间死亡12只)分批处死各组小鼠,取肝脏作大体形态观察;取泡球蚴组织,囊湿重,计算抑囊率;取泡球蚴组织制片,作病理组织学观察;取小鼠血,分离血清,采用ELISA法检测IL-2、IL-10含量.结果 ABZ-CS-MPs组灌胃6、9周后的抑囊率分别为87.83％和90.21％.病理组织观察ABZ-CS-MPs对泡球蚴组织的损伤较L-ABZ组严重.血清IL2模型对照组接种12周、15周后分别为(18.529士1.496)pg/ml和(19.040±1.439) pg/ml,空白对照组12周、15周后分别为(30.057±3.425) pg/ml和(31.507±3.124)pg/m,差异有统计学意义(P＜0.05);L-ABZ组灌胃6周、9周后分别为(22.153±3.112) pg/ml和(23.373±4.549) pg/ml,ABZ_CS-MPs灌胃6周、9周后分别为(25.871士4.318)pg/ml和(27.154±3.205) pg/ml,与模型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).血清IL-10模型对照组接种12周、15周后分别为(14.841±3.761) pg/ml和(16.728±1.739)pg/ml,空白对照组12周、15周后分别为(8.006±4.531) pg/ml和(7.606±2.863) pg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05);L-ABZ组灌胃6周、9周后为(11.324±2.676) pg/ml和(13.342士2.633)pg/ml,ABZ-CS-MPs组灌胃6周、9周后为(8.057士0.801)pg/ml和(10.519±3.233) pg/ml,与模型对照组差异有统计学意义(P＜0.05).ABZ_CS-MPs组IL-2与L-ABZ组比较差异有统计学意义(P＜0.05),IL-10与L-ABZ组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ABZ-CS-MPs治疗小鼠AE效果优于L-ABZ,并可提高泡球蚴小鼠Th1免疫水平.
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临床分离革兰阴性菌脂多糖脂质体的制备及免疫保护效应研究
目的 制备临床分离的大肠埃希菌,铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌混合脂多糖脂质体并观察其免疫保护作用.方法 采用逆向蒸发法制备细菌LPS脂质体,通过电镜观察其形状,粒径测定仪分析其粒径分布,?试验(LAL)测定其活性.用大肠埃希菌TH1菌株、铜绿假单胞菌P7菌株、肺炎克雷伯菌K11菌株混合脂质体免疫小鼠,以脂多糖(LPS)2倍完全致死量(LD100)和100倍半数致死量(LD50)活菌攻击小鼠,观察各组小鼠的存活情况.结果 细菌LPS脂质体混悬液常温下呈乳白色,透射电镜下可见LPS脂质体颗粒呈规则的球形,粒径分布均匀,为300～464 nm.LAL试验推算包封率为99.0%～99.9%.经TH1、P7、K11混合LPS脂质体免疫的小鼠接受TH1-LPS、P7-LPS、K11-LPS及其活菌攻击后显示具有免疫保护作用,其中TH1-LPS、P7-LPS及活菌攻击组小鼠存活率显著高于对照组(P<0.05).结论 多菌混合脂多糖脂质体对其相应菌种及LPS攻击具有免疫保护作用.
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大肠埃希菌脂多糖脂质体的制备及免疫保护实验
目的 制备临床分离的耐药大肠埃希菌脂多糖(LPS)脂质体并考察其免疫保护作用.方法 采用逆向蒸发法制备大肠埃希菌LPS脂质体,透射电镜观察其形态,激光散射法分析其粒径分布,鲎试验法(LAL)测定其活性;用LPS脂质体免疫小鼠,以LPS 2倍完全致死剂量攻击小鼠,观察并记录结果. 结果 大肠埃希菌LPS脂质体常温下呈乳白色混悬液,透射电镜下呈多层圆形或椭圆形小囊,粒径为(300.195±108.932)nm;LAL法测定E. coli LPS脂质体和E. coli ob55∶b5 LPS脂质体活性,均比未经脂质体包被的LPS降低99.9%;E. coli LPS脂质体和E.coli ob55∶b5 LPS脂质体免疫鼠接受E. coli LPS攻击后72 h的存活率分别为91.67%和75.00%,与对照组存活率16.67%比较,差异均有统计学意义(P=0.000 322和P=0.000 614). 结论 大肠埃希菌LPS脂质体制备方法可行,制备的LPS脂质体对该菌属的LPS攻击均具有一定的免疫保护作用.
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三氮咪脂质体和TRYPAN对人工感染小鼠伊氏锥虫病防治效果的初步观察
伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)是危害家畜较为严重的一种血液原虫.近年来,由于抗药虫株的不断出现,研制新的抗伊氏锥虫药物显得尤为重要.为探讨新的抗锥虫药三氮咪脂质体和TRYPAN对小鼠伊氏锥虫病的治疗和预防效果,进行了本试验研究.
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诱杀NF-κB的寡脱氧核苷酸对多发性骨髓瘤的影响
目的:本研究探讨靶向核因子-κB(nuclear factor of Kappa B,NF-κB)的“诱杀性”寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODN)对小鼠多发性骨髓瘤的影响.方法:给予严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficient,SCID)小鼠皮下注射骨髓瘤细胞,当出现可测量的瘤组织时将成瘤小鼠随机分为3组:即治疗1组,治疗2组,对照组;给予治疗1组5 μg/g脂质体-NF-κB“诱杀性”ODN,给予治疗2组10 μg/g脂质体-NF-κB“诱杀性”ODN,给予对照组10 μg/g脂质体-NF-κB无关的ODN,每周2次,共治疗4周.当小鼠濒死或瘤直径大于2 cm时即将其处死.结果:脂质体-NF-κB诱杀性ODN可以特异性抑制NF-κB结合DNA的活性;治疗组较对照组IL-6表达减少、瘤体积缩小、中位生存时间明显延长.结论:NF-κB诱杀性ODN可能成为治疗多发性骨髓瘤的新方法.
关键词： 核因子-κB诱杀性ODN 脂质体 多发性骨髓瘤 -
周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控
为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白(cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL-60细胞增殖调控的作用,用针对cyclin G1 mRNA 5′端编码区起始密码子(ATG/AUG)的ASON,通过脂质体导入HL-60细胞共培养后,用免疫组织化学法和RT-PCR分别检测cyclin G1和mRNA水平的表达,用电镜、细胞原位凋亡检测法(POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞调亡.结果表明:cyclin G1 ASON组与SON及空白对照组相比,ASON能特异地抑制cyclin G1及mRNA水平的表达,当ASON的浓度达到一定程度时,HL-60细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制,出现细胞凋亡,并且此作用随ASON浓度的升高而增强.结论:cyclin G1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达,对白血病细胞的增殖有抑制作用,并可促使细胞凋亡,且有浓度依赖性.
