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肝纤维化过程中Toll样受体4在肝脏的表达分布及意义
目的 动态观察大鼠肝纤维化过程中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白在肝脏的表达,探讨TLR4与肝纤维化发生发展的关系. 方法以四氯化碳皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,设立正常对照组和模型1周组、2周组、4周组、6周组.常规HE染色和天狼猩红胶原染色观察肝脏病变;检测肝组织羟脯氨酸和血浆内毒素含量;免疫组化和Western blot检测TLR4在肝组织中的表达, 检测α-SMA观察活化的肝星状细胞(HSCs). 结果与正常对照组比较,CCl4作用2周时,肝组织羟脯氨酸含量开始明显增多(P<0.01);模型组各组血浆内毒素含量呈梯度上升(P<0.01),且与肝组织羟脯氨酸含量呈显著正相关关系(P<0.01);CCl4作用1周后肝组织TLR4的表达即明显增强(P<0.01),4周时和6周时有所下降(与2周组相比,P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.01).TLR4阳性细胞包括枯否细胞、活化的HSCs及少量的肝细胞和内皮细胞.结论 内毒素及其受体TLR4的改变可能在肝纤维化中起重要作用.
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TLR4基因多态性SNP896A》G、SNP1196C》T与冠心病的相关性研究
目的 探讨吉林地区汉族人群TLR4基因多态性与与冠心病的关系.方法 运用单核苷酸多态性分析技术在328例无亲缘关系的吉林地区汉族人群(正常对照人群172 例,冠心病156例)中检测TLR4基因3号外显子的SNP896A>G、SNP1196C>T多态性.结果 吉林地区汉族人群中TLR4基因多态性SNP1196C>T的基因型频率和等位基因频率在冠心病组和正常对照组间的分布存在显著性差异(P<0.05).结论 吉林地区汉族人群TLR4基因多态性位点SNP1196C>T与冠心病有相关性.
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糖尿病大鼠血浆TLR4含量与血管内皮功能相关性研究
目的：观察大鼠TLR4含量与NO、ET-1的关系,了解阿托伐他汀和二甲双胍对血管内皮功能的保护作用。方法分组：空白对照组；实验对照组；阿托伐他汀组；二甲双胍组；联合用药组,5周后测定ET-1、NO、TLR4含量。结果各组大鼠TLR4含量与ET-1成正相关,与NO成负相关。结论阿托伐他汀和二甲双胍可能通过降低TLR4含量保护血管内皮功能。
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丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤时Toll样受体4、NF-κB及血清TNF-α表达的影响
目的 探讨丙泊酚后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响.方法 成年健康Wistar大鼠60只,随机分为5组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(1R组)、丙泊酚1、2、4mg/kg后处理组(P1、P2、P4组).用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肝组织中TLR4 mRNA、NF-κB mRNA的表达,放射免疫法测定血清TNF-a的浓度,光镜观察肝组织形态学变化.结果 与S组比较,各组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达上调,TNF-α升高,差别均有统计学意义 (P＜0.01)；与IR组比较,P1、P2、P4组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA袁达下调,TNF-a降低(P＜0.01)；与P4组比较,P1、P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低(P＜0.01)；与P1组比较,P2组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达下调,TNF-α降低(P＜0.01).病理检查显示P1、P2、P4组肝组织结构损伤明显小于IR组.结论 丙泊酚后处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制可能与下调TLR4、NF-κB的表达.降低肝组织炎症反应有关.
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Toll样受体和核转录因子-κB在子痫前期患者胎盘组织中的表达
目的：探讨子痫前期患者胎盘组织中Toll样受体4（TLR4）以及核转录因子（NF-κB）表达及意义。方法：选取50例子痫前期患者（轻度子痫前期20例，重度子痫前期30例）作为研究对象，以30例正常晚孕妇女作为正常对照，采用免疫组化及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定胎盘组织中TLR4及NF-κB的定位及表达。结果：轻、重度子痫前期患者胎盘组织中TLR4及NF-κB蛋白和mRNA的表达水平均明显高于正常晚孕妇女（P<0.05）。且随着病情加重，两者表达均增强；子痫前期胎盘组织中TLR4和NF-κB的表达呈正相关（P<0.05）。结论：TLR4介导的炎症因子释放可能是导致子痫前期发生的重要原因之一。
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HIF-1α与TLR4在鼻息肉组织中的表达及相互关系
目的:检测HIF-1α、TLR4在鼻息肉组织中的表达及相关性,探讨其在鼻息肉发病机制中可能的作用.方法:选取30例经鼻内镜手术治疗的鼻息肉患者的鼻息肉组织为试验组,及同期30例经鼻中隔偏曲矫正术治疗的患者的下鼻甲黏膜为对照组.采用免疫组织化学染色技术检测两组标本中HIF-1α、TLR4的表达情况.结果:试验组HIF-1α、TLR4表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);经Pearson相关性分析得出,试验组中HIF-1α、TLR4表达呈显著正相关性(r=0.907,P<0.01).结论:HIF-1α、TLR4在鼻息肉组织中表达水平上调并且呈显著正相关性,提示鼻息肉发生过程中组织缺氧、感染存在,HIF-1α、TLR4可能通过某种机制相互促进,共同导致鼻息肉的发生.
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2型糖尿病患者单核细胞TLR4信号通路的研究
目的:探讨单核细胞TLR4/NF-κB信号通路在2型糖尿病(2-DM)患者炎症反应中的作用.方法:以TLR4配体LPS刺激正常人及2-DM患者单核细胞,应用实时定量RT-PCR检测单核细胞TLR4mRNA、A20mRNA的变化,FIISA法检测培养上清TNF-α、IL-10浓度.结果:2-DM患者单核细胞TLR4mRNA、A20mRNA相对表达羹高予正常对照组,LPS刺激后无明显上调.2-DM患者单核细胞在LPS刺激后与对照组单核细胞LPS刺激后相比,TNF-α产生更多,IL-10产生较少.结论:单核细胞TLR4/NF-κB信号通路可能参与了2-DM的炎症反应,TLR4表达上调、A20上调不足与炎症反应有关.TLR4通路的激活可能是2-DM患者易患动脉粥样硬化的原因之一.
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TLR4对MHV-3诱导的C3H/He小鼠病毒性肝炎转归的影响
目的：探讨TLR4对3型鼠肝炎病毒（MHV-3）诱导的C3H/He小鼠肝炎转归的影响。方法观察C3H/HeJ及C3H/HeN小鼠感染MHV-3后的临床症状（皮毛异常、呼吸加快及身体颤抖）并进行评分。记录两亚系小鼠的存活情况并进行比较。所有小鼠观察至感染后40d。结果小鼠品系对临床症状评分不起作用（P=0.718）。临床评分有随时间变化的趋势（P＜0.001），且时间因素的作用随小鼠品系而不同（P=0.004）。C3H/HeJ及C3H/HeN小鼠临床症状评分仅在感染后第5、6、13天出现差异：（13.071±1.184）和（10.933±4.608）（P＜0.001），（8.321±5.048）和（11.304±3.901）（P＜0.001），（13.091±1.578）和（10.846±3.671）（P=0.015）。C3H/HeJ及C3H/HeN小鼠存活率分别为26.7％和23.3％，平均存活时间分别为16.267d和16.433d，无显著差异（P=0.922）。结论 MHV-3诱导的C3H/He小鼠病毒性肝炎转归不依赖于TLR4。
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TLR4、MyD88mRNA在胆脂瘤型中耳炎中的表达
目的 建立一种实时荧光RT-PCR 方法,定量检测中耳胆脂瘤组织中TLR4、MyD88 的表达水平.方法 选取中耳胆脂瘤组织25 份为对照组(其中13 份为炎症组,12 份为非炎症组);10 份正常外耳道皮肤作为正常组.采用实时荧光RT-PCR 与Lightcyeler 荧光PCR 仪定量检测TLR4、MyD88 mRNA 的表达水平;采用2-ΔΔCT 法处理实时荧光定量RT-PCR 数据.结果 炎症组TLR4、MyD88mRNA 表达水平较正常外耳道组分别上升了4 倍和3 倍,且差异有统计学意义(P 值均<0.05);炎症组TLR4、MyD88mRNA 表达水平较非炎症组分别上升了2 倍和1 倍,且差异有统计学意义(P 值均<0.05).结论 中耳胆脂瘤组织中,尤其是炎症反应明显的胆脂瘤组织,TLR4 及其下游信号转导分子的表达量发生改变,提示TLR4-MyD88 信号传导途径可能参与了胆脂瘤型中耳炎的发病.
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阿托伐他汀对糖尿病大鼠胸主动脉TLR4表达影响的实验研究
目的：观察GK大鼠胸主动脉TLR4表达及应用阿托伐他汀其表达水平的变化。探讨TLR4与动脉硬化的关系。方法分组：空白对照组；实验对照组；阿托伐他汀组，5周后应用RT-PCR、Westernblot检测各组大鼠胸主动脉TLR4表达。结果实验对照组较空白对照组TLR4表达显著增高，阿托伐他汀组较实验对照组TLR4表达显著降低。结论阿托伐他汀可能通过降低TLR4表达，防治动脉粥样硬化。
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Toll样受体4基因多态性和内毒素在哮喘发病中的交互作用
哮喘是以树突细胞(DC)介导的Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)优势免疫为特征的慢性气道炎症性疾病[1].全球哮喘和变应性疾病的发病率逐年增高,而发达国家尤为突出.该现象部分归咎于卫生假说,即环境愈干净则生命早期的细菌内毒素的主要活性成分脂多糖(LPS)环境暴露就愈少,而LPS可以驱动宿主免疫应答由Th2向Th1型发生免疫偏移[2].然而,不同个体对环境暴露的反应存在易感性,目前认为这种易感性取决于个体的遗传因素.作为识别LPS的主要受体,Toll样受体4(TLR4)介导天然免疫并连接获得性免疫,与变应性哮喘密切相关[3].本文就TLR4跨膜信号转导、Th2优势免疫以及TLR4基因多态性-免疫-环境交互作用与哮喘发病的关系进行简要综述.
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1,25-(OH)2D3对DSS诱导的慢性结肠炎小鼠炎症反应的影响
目的 探究不同剂量1,25-(OH)2D3对慢性溃疡性结肠炎小鼠炎症反应TLR4信号通路中相关因子的影响.方法 9w龄雌性C57BL/6小鼠50只,适应性喂养1w后,随机分为正常组、模型组、低、中、高剂量干预组.正常组小鼠在整个实验期间自由饮用蒸馏水,其余四组在第1~7 d、15~21 d自由饮3%的DSS溶液,其余时间自由饮用蒸馏水.在实验的第15~28日,低、中、高剂量干预组小鼠每天分别灌胃含10、50、100 ng 1,25-(OH)2D30.1ml的橄榄油,正常组和模型组小鼠则只灌胃0.1ml的橄榄油.于第29日处死全部小鼠.根据小鼠的一般情况,结合结肠大体形态评分以及结肠组织病理学评分对小鼠结肠严重程度进行评估.酶联免疫吸附法检测小鼠血清TNF-α 、IL-10含量,免疫组化法检测小鼠结肠组织中VDR、TLR4、TRAF6及NF-κB1蛋白含量.结果 与模型组小鼠相比,低、中、高剂量1,25-(OH)2D3干预组小鼠结肠大体形态和组织病理学评分均低于模型组,结肠长度均长于模型组.干预后,血清TNF-α含量降低,IL-10含量有所升高,结肠组织TLR4、NF-κB1、TRAF6表达减少,VDR蛋白表达增加.结论 补充1,25-(OH)2D3可降低结肠组织TLR4、TRAF6、NF-κB1的表达,改善慢性溃疡性结肠炎,这可能与TLR4信号通路有关.
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慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞TLR4和NFκB的影响
目的:探讨慢性低O2高CO2对大鼠海马神经细胞TLR4和NFκB的影响及作用.方法:采用慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型,30只大鼠随机分为正常对照组(NC)、低O2高CO22周组(2HH组)和低O2高CO24周组(4HH组),免疫组织化学法检测海马CA1/3区细胞TLR4和NFκB的表达,TUNEL法检测海马细胞凋亡.结果:模型组大鼠海马CA1/3区TLR4蛋白的表达随着时间延长而显著,2HH组(CA1:0.1275±0.0242, CA3: 0.1156±0.0376), 4HH组(CA1:0.1522±0.0187, CA3: 0.1427±0.0453),与NC组比较有显著性差异(P<0.05,P<0.01).NC组大鼠海马CA1/3区可见NFκB/p65少量表达于胞浆,而模型组可见NFκB/p65在细胞核内不同程度表达,2HH组(CA1: 0.1326±0.0324, CA3: 0.1301±0.0112), 4HH组(CA1: 0.1612±0.0428, CA3: 0.1578±0.0365),与NC组比较分别有显著性差异(P<0.05,P<0.01).模型组大鼠海马CA1/3区细胞凋亡明显增多, 与NC组比较分别有显著性差异(P<0.01),以4HH组为著.结论:TLR4和NFκB激活可能在慢性低O2高CO2大鼠海马神经细胞凋亡中有重要作用.
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重症脓毒症患者外周血单核细胞人类白细胞抗原和TLR4的表达与预后关系
目的 观察重症脓毒症患者外周血单核细胞(PBMC)人类白细胞抗原(HLA-DR)、天然免疫的模式识别受体TIR4(toll like receptor 4)在不同预后的表达变化.方法 选取35例符合重症脓毒症患者为重症脓毒症组和15名健康志愿者作为对照组.35例重症脓毒症患者按预后又分为好转组(25例)与死亡组(10例),用流式细胞仪检测PBMC表面HLA-DR、TLR4表达.结果 治疗前重症脓毒症组外周血单核细胞数量[(0.39±0.30)×109/L]及其表面HLA-DR(10.25±5.35)FMI、TLR4(10.93±5.66)FMI表达均低于正常对照[(0.62±0.41)×106/L、(59.28±14.76)FMI、(39.86±8.55)FMI](t=2.423、12.52、14.12,P<0.01或P<0.05).重症脓毒症组经ICU综合治疗后,好转组,随着各项指标好转,单核细胞的数量及其表面HLA-DR、TLR4表达各观察点逐渐呈升高趋势,单核细胞数量[(1.03±0.78)×106/L]、HLA-DR[(25.12±9.29)FMI]及TLR4(36.68±16.61)FMI于第5天恢复正常人水平,与治疗前比较差异均有统计学意义(P<0.01,<0.05).死亡组单核细胞的数量及其表面HLA-DR、TLR4表达各观察点持续在较低水平,各时点比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 重症脓毒症患者外周血单核细胞数量及其表面HLA-DR、TLR4表达可能与患者的免疫状态、预后情况密切相关.
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Toll样受体4的研究进展
天然免疫(innate immunity)是生物体在漫长的生物进化过程中获得的具有普遍性的防御机制,是宿主的第一道防线,在获得性免疫(adaptive immunity)系统被活化前发挥抗感染作用.
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伴有食物不耐受的腹泻型肠易激综合征患者NF-κB和TLR4的表达及健脾法对其表达的影响
目的 观察伴有食物不耐受的腹泻型肠易激综合征(D-IBS)患者十二指肠黏膜中NF-κB和TLR4的表达及健脾法对其表达的影响.方法 选择60例伴有食物不耐受的D-IBS患者,随机分为治疗组30例和对照组30例.治疗组口服健脾为主的中药,每日1剂;对照组口服匹维溴铵片,50mg/次,每日3次,治疗4周后进行疗效评价.治疗前后内镜下取十二指肠黏膜,应用免疫组化方法检测NF-κB和TLR4的表达情况.结果 治疗组总有效率(93%)显著高于对照组(70%)(P<0.01);2组治疗后主要症状评分均显著低于治疗前.治疗前2组NF-κB和TLR4免疫组化染色阳性细胞数无显著性差异,治疗后治疗组NF-κB和TLR4免疫组化染色阳性细胞数显著低于对照组(P均<0.05).结论 NF-κB和TLR4参与伴有食物不耐受的D-IBS患者的发病,健脾法治疗伴有食物不耐受的D-IBS有效,有可能与通过调节NF-κB和TLR4在肠黏膜的表达有关.
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利开灵对脑出血脑水肿大鼠CD14和TLR4蛋白表达的干预作用
目的 探讨以开通玄府、利水解毒法组方的利开灵对脑出血后大鼠出血局部脑组织CD14、TLR4 蛋白表达的影响.方法 采用Rosenberg法改良后建立大鼠脑出血模型,用免疫组化方法观察48 h后不同药物干预下大鼠出血局部脑组织CD14、TLR4蛋白的表达变化,并观察利开灵对出血局部脑组织病理改变的影响.结果 利开灵能有效抑制CD14和TLR4的表达,同清开灵组和安宫牛黄丸组比较,利开灵可明显降低CD14和TLR4的表达,同时可明显改善出血局部脑组织病理形态损伤.结论 CD14/TLR4信号通路可能参与了脑出血后病理损伤过程,利开灵对出血局部脑组织CD14、TLR4蛋白表达有较好的调控作用,这可能是利开灵改善脑出血后脑水肿的作用机制之一.
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TLR4、NF-κB p65、IL-8在溃疡性结肠炎中的表达
目的 探讨溃疡性结肠炎(UC)患者肠黏膜活检组织中Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB p65)、白介素-8(IL-8)的表达及三者在UC发病机制中的作用.方法 内镜活检UC活动期结肠黏膜标本68份(UC组)及30例正常人结肠黏膜标本(健康对照组),采用免疫组化SP方法检测TLR4、NF-κB p65、IL-8的表达水平,并做统计学处理.结果 UC组结肠黏膜表面上皮细胞和固有层TLR4、NF-κB p65、IL-8呈阳性表达,染色为深棕黄色,较健康对照组表达均显著增强,且不同病理分级间比较,III级>II级>I级,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 UC肠黏膜中TLR4、NF-κB p65、IL-8的表达均高度上调,并随UC病理分级的升高而升高.
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芹黄素联合缺血后处理方案保护NRK-52E细胞缺氧/复氧损伤的实验研究
目的 观察芹黄素联合缺血后处理方案对大鼠肾缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞株(NRK-52E)的TLR4/NF-κB表达的影响.方法 2016年7—11月于武汉大学消化系统疾病湖北省重点实验室进行实验.用大鼠NRK-52 E建立肾缺血再灌注损伤模型,分为5组:正常组(N组)、缺氧/复氧组(I/R组)、I/R+芹黄素组(Api组)、缺血后处理组(IPO组)、芹黄素+缺血后处理联合治疗组(Api+IPO组).CCK8染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测SOD和MDA含量,Real time PCR检测TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-1β表达情况,Western blot检测TLR4和NF-κB表达水平.结果 与N组比较,I/R组细胞存活率明显下降(P<0.01).Api组、IPO组和Api+IPO组相对于I/R组细胞存活率显著上升,其中Api+IPO组存活率高.与N组比较,I/R组细胞凋亡率增加(q=15.33,P<0.01);而与I/R组比较,Api组、IPO组和Api+IPO组凋亡率明显下降(q=7.46、8.92、14.06,P<0.01).与N组比较,I/R组SOD含量明显降低(q=7.60,P<0.01),MDA含量明显升高(q=-7.51,P<0.01);与I/R组比较,Api组、IPO组和Api+IPO组SOD含量显著增加(q=-3.49、-2.71、-4.97,P<0.05),MDA含量明显降低(q=2.95、2.29、4.07,P<0.05).与N组比较,I/R组TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达明显上调(q=-7.74、-9.52、-10.88、-10.75,P<0.01);与I/R组比较,Api组、IPO组和Api+IPO组的TLR4、NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达明显下调(q=2.99、3.71、3.98、4.52;2.57、3.03、3.50、3.37;4.47、5.03、5.87、5.56,P<0.05).结论芹黄素和体外缺血后处理均能明显缓解肾缺血再灌注损伤,其中芹黄素和体外缺血后的联合治疗方案效果明显,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关.
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窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响研究
目的 动物实验观察窝洞内内毒素对牙髓组织LPS结合受体TLR4表达的影响,探讨牙髓组织在LPS刺激后的信号转导途径.方法 在8头小型猪磨牙和前磨牙上制备不同深度窝洞,窝洞分为牙釉质深层组、牙本质浅层组、牙本质深层组.封入一定量的内毒素,分另q于术后3天、7天、14天、28天处死动物取牙.采用免疫组织化学染色的方法,观察小型猪磨牙和前磨牙窝洞内封入内毒素后牙髓组织中TLR4的表达和分布.结果 小型猪正常牙髓中未见TLR4阳性细胞.内毒素实验组随着窝洞深度增加,TLR4阳性细胞数增加.在深窝洞组3a窝洞下方牙髓组织中TLR4阳性细胞多为中性粒细胞表达,其他实验组多为单核细胞表达.结论 牙髓组织中TLR4的表达提示内毒素通过牙本质渗透至牙髓,通过LPS信号受体TLR4在牙髓组织的炎症发展过程中发挥作用.
