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穿心莲内酯对内毒素诱导急性肺损伤大鼠TLR4、CD14、MD2mRNA表达的影响
目的:探讨穿心莲内酯(andrographolide,AND)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠TLR4(Toll-like receptor 4)、CD14、髓样分化蛋白-2(MD2) mRNA表达的影响.方法:SD大鼠36只,随机分6组:对照组、LPS组;穿心莲内酯组,每组再分为4h、8h两个亚组.向气管内滴注脂多糖(LPS) (10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型,穿心莲内酯组LPS滴注后立即予穿心莲内酯注射液尾静脉注射干预,分别于LPS处理后4h、8h取血和肺组织,测定各组大鼠动脉血氧分压(PaO2),测肺湿干比重(wet weight/dry weight,W/D);测定肺组织TLR4、CD14、MD2 mRNA表达的变化;观察各组大鼠肺组织的病理改变.结果:LPS组大鼠PaO2呈进行性降低;肺体质量指数明显增加;肺组织TLR4、CD14、MD2 mRNA表达明显增加;肺组织病理示肺内中性粒细胞大量浸润,伴出血、透明膜形成;穿心莲内酯组的各项指标均较LPS损伤组减轻.结论:穿心莲内酯能降低LPS诱导急性肺损伤大鼠TLR4、CD14、MD2 mRNA的表达,减轻肺组织的病理损害.
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荆防颗粒治疗扁平疣的临床疗效及作用机制研究
目的:评价荆防颗粒内服治疗扁平疣的临床疗效和安全性.方法:110例扁平疣患者随机分为治疗组和对照组.治疗组采用口服荆防汤颗粒剂,2次/d;对照组给予0.1％维A酸乳膏涂抹患处,1次/d,疗程均为8周.观察皮损扁平疣数量、局部不良反应.对治愈病例随访1个月,观察复发情况.采用流式细胞技术检测患者外周血T淋巴细胞亚群,采用ELISA法检测外周血IL-2、IFN-γ和TNF-α含量,采用荧光定量PCR技术检测皮损组织TLR4和COX2相对表达量.结果:治疗组有效率为87.3％,而对照组有效率为61.8％.两组经Ridit分析比较:x2 =8.10.治愈病例随访1个月,对照组15例,复发8例,复发率53.3％;治疗组21例,复发2例,复发率9.5％,复发率低于对照组(P＜0.01).治疗组外周血T淋巴细胞亚群中CD;、CD;、CD;/CD8+和IL-2、IFN-γ含量均较治疗前明显升高,而CD8+和TNF-α则明显降低.同时,治疗组皮损组织较TLR4和COX2相对表达量较治疗前明显降低.两组均未见明显不良反应.结论:荆防颗粒内服治疗扁平疣具有一定的临床疗效和安全性.
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玉女煎对气分证兔舌黏膜CK14、E-Cad、HSP70、PCNA、TLR4表达影响
目的:探讨玉女煎对兔舌象变化的分子机制.方法:玉女煎治疗内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)所造气分证,观察兔舌象变化,免疫组织化学研究舌黏膜CK14、E-Cad、HSP70、PCNA、TLR4表达变化.结果:气分证兔舌黏膜增厚,CK14、HSP70、PCNA、TLR4表达升高,E-Cad表达降低,玉女煎治疗可以逆转舌黏膜相关分子表达水平,使舌黏膜变薄.结论:气分证兔造模前后及用药前后舌黏膜厚度的变化与CK14、E-Cad、HSP70、PC-NA、TLR4表达有密切联系.
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右归胶囊对肾阳虚大鼠TLR4影响的实验研究
目的:通过检测TLR4在肾阳虚大鼠肾内的表达,为探讨右归胶囊在治疗肾阳虚中可能的免疫学机制奠定基础.方法:健康雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,模型组和干预组肌肉注射氢化可的松建立肾阳虚大鼠模型,对照组和模型组给予生理盐水灌胃,干预组给予右归胶囊混悬液灌胃.大鼠肾组织常规切片,免疫组化法检测TLR4的在肾脏的表达,Real-time PCR法测定TLR4mRNA的表达.结果:模型组和干预组TLR4蛋白和基因的表达较对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05);干预组和模型组比较,干预组TLR4的蛋白和基因的表达明显高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);结论:右归胶囊可能通过调节TLR4的表达,影响机体的免疫功能从而发挥改善机体肾阳虚状态的作用.
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富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及TLR4/Myd88/NF-κB信号分子的影响
目的 探讨富氢液(HRS)对脓毒血症大鼠肠黏膜损伤及其对TLR4/Myd88/NF-κB信号通路表达的影响.方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)、脓毒症组(SEP组)和富氢液处理组(C组),每组10只;Sham组仅开腹,暴露盲肠,C组和SEP组行盲肠结扎穿孔术,再分别静脉给予富氢水和等量生理盐水;三组均于模型建立后4h处死大鼠,观察小肠组织病理学结果;ELISA检测血浆中肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)、D-乳酸和炎症因子TNF-α、IL-6、IL-10浓度;Western blot检测肠组织TLR4、Myd88和NF-κB表达.结果 富氢液可以减轻脓毒血症大鼠肠黏膜损伤,降低血浆中I-FABP、D-乳酸含量,降低炎症因子TNF-α、IL-6表达,促进IL-10升高(P＜0.05),抑制肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达(P＜0.05).结论 富氢液对脓毒血症大鼠肠黏膜屏障有保护作用,可能与TLR4/Myd88/NF-κB信号通路有关.
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大黄素对骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性再灌注肾损伤的影响
背景：已有研究表明大黄素通过抑制炎症因子释放对肠缺血再灌注损伤具有保护作用。目的：探讨大黄素对骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性再灌注肾损伤的作用。
方法：40只SD大鼠随机分为5组(n=8)：假手术组、缺血再灌注组、骨髓间充质干细胞组、大黄素低剂量干预组、大黄素高剂量干预组。除假手术组外，其余4组建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型。造模后骨髓间充质干细胞组下腔静脉注射1 mL骨髓间充质干细胞悬液，大黄素低剂量干预组与高剂量干预组术前7 d内每天灌胃大黄素30 mg/kg和60 mg/kg，后续处理与骨髓间充质干细胞组一致。再灌注6 h后，苏木精-伊红染色法检测肾组织病理改变，实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α，白细胞介素6和白细胞介素18以及TLR2和TLR4 mRNA表达水平，免疫印迹法检测COX-2，ICAM-1，iNOS蛋白表达水平。结果与结论：①缺血再灌注后可见大量小管上皮脱落，间质有炎性细胞浸润；骨髓间充质干细胞组可见部分小管上皮细胞脱落，部分间质有炎细胞浸润；药物低剂量干预组与高剂量干预组肾小管管腔几乎完整，少量间质有炎细胞浸润；②与假手术组相比，缺血再灌注组肿瘤坏死因子α，白细胞介素6，白细胞介素18以及TLR2，TLR4 mRNA表达水平显著升高(P<0.05)，COX-2，ICAM-1，iNOS蛋白表达水平也显著升高(P<0.05)；骨髓间充质干细胞组上述各因子表达明显低于缺血再灌注组(P<0.05)；大黄素低剂量干预组与高剂量干预组的降低程度更为显著，且与大黄素剂量相关；③结果表明，大黄素具有促进骨髓间充质干细胞改善大鼠缺血性再灌注肾损伤的作用。 -
舒芬太尼预处理对脊髓损伤模型小鼠的神经保护
背景：舒芬太尼具有组织保护作用，但对神经系统损伤的修复作用及可能机制的报道甚少。
目的：探讨舒芬太尼预处理对脊髓损伤的保护作用及可能机制。
方法：通过脊髓钳夹损伤法建立脊髓损伤模型小鼠，腹腔注射舒芬太尼6，3μg/kg预处理干预。
结果与结论：①Western blot、酶联免疫吸附法、TUNEL检测结果：舒芬太尼6μg/kg预处理可以显著抑制小鼠脊髓组织TLR4、核因子κBp65以及cleaved-caspase-3蛋白的表达(P<0.05)，并显著抑制脊髓组织炎性因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β蛋白的表达(P<0.05)，显著减轻脊髓组织中神经元的凋亡(P<0.05)；②神经功能：舒芬太尼6μg/kg预处理可以显著改善脊髓损伤后第14天的神经功能评分(P<0.05)。③结果证实：舒芬太尼6μg/kg预处理对脊髓损伤小鼠可以发挥显著的神经保护作用，其机制可能与抑制TLR4/核因子κB信号通路相关。 -
双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达的影响
目的 观察双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达的影响,探讨双表法对流感病毒的防治机制.方法 以流感病毒FM1鼠肺适应株滴鼻感染昆明种小鼠,并用解表法(银翘散)、固表法(玉屏风散)、双表法(玉屏风+银翘散)、阳性对照药(利巴韦林)干预相应组别小鼠.在感染病毒后5 d采用SABC免疫组织化学染色法检测肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达情况.结果 正常组和模型组肺组织中均可检测到TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达,但模型组明显高于正常组(P＜0.05).双表法组TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达低,与解表法组、固表法组、利巴韦林组比较有显著性差异(P＜0.05).结论 流感病毒感染小鼠时激活了TLR4-MyD88-NF-κB P65信号通路,双表法能较好的抑制TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达,且优于解表法、固表法及利巴韦林.
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肥胖人群外周血单核细胞TLR4表达变化及他汀干预作用的研究
目的 探讨肥胖人群外周血toll样受体4(RLR4)表达的变化及应用他汀类药物的作用机制是否与抑制toll样受体4(TLR4)有关.方法 57例肥胖者随机分为常规对照组和阿托伐他汀干预组,阿托伐他汀干预组给予阿托伐他汀20 mg/晚,用药前及用药后1个月采血,应用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4蛋白表达；应用ELISA法检测血浆TNF-α浓度.结果 单核细胞TLR4蛋白与体质量及血浆TNF-α正相关.用阿托伐他汀干预1个月后,阿托伐他汀干预组外周血单核细胞TLR4蛋白及血浆TNF- α浓度均较干预前降低(P＜0.05)；阿托伐他汀治疗组单核细胞RLR4蛋白和血浆TNF-α低于常规对照组(P＜0.05).结论 阿托伐他汀能下调肥胖人群单核细胞RLR4表达,降低血浆炎症因子水平.其抗炎作用可能与抑制单核细胞TLR4通路有关.
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阿托伐他汀对2型糖尿病患者外周血单核细胞TLR4表达的影响
目的 探讨阿托伐他汀对2型糖尿病的抗炎作用机制是否与抑制toll样受体4(TLR4)有关.方法 将40例2型糖尿病患者随机分为常规治疗组和阿托伐他汀治疗组.阿托伐他汀治疗组患者在常规治疗基础上给予阿托伐他汀20 mg,1次/d,晚间口服.治疗前及治疗1月后采血,应用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4蛋白表达；应用酶联免疫(ELISA)法检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度.结果 单核细胞TLR4蛋白与血糖,糖化血红蛋白及血浆TNF-α呈正相关.治疗1月后,阿托伐他汀治疗组和常规治疗组血糖、外周血单核细胞TLR4蛋白及血浆TNF-α浓度均较治疗前降低(P＜0.05)；阿托伐他汀治疗组单核细胞TLR4蛋白和血浆TNF-α均低于常规治疗组(P＜0.05).结论 阿托伐他汀能下调2型糖尿病患者的单核细胞TLR4表达,降低血浆炎症因子水平.其抗炎作用可能与抑制单核细胞TLR4通路有关.
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生物活性透明质酸片段治疗慢性咽炎初步探讨
目的 探讨生物活性透明质酸片段短期治疗慢性咽炎的临床效果.方法 将68例慢性咽炎患者按简单随机法分为两组,治疗组48例采用生物活性透明质酸片段在间接喉镜下长针注射器直接喷涂咽部和经鼻喷入咽部治疗,对照组20例采用大分子透明质酸间接喉镜下长针注射器直接喷涂咽部和经鼻喷入咽部治疗,比较两组治疗3～5d后症状和体征改善情况.结果 (1)临床症状改善情况:治疗3d后,治疗组显效32例,有效16例,总有效率100％,对照组有效4例,总有效率20％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01);治疗5d后,治疗组显效48例,总有效率100％,对照组有效12例,总有效率60％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).(2)临床体征改善情况:治疗5d后,治疗组显效36例,有效12例,总有效率100％,对照组有效4例,总有效率20％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 生物活性透明质酸片段能迅速抑制咽喉部炎症,是治疗慢性咽炎的有效制剂.
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TLR4、COX-2在胆囊癌组织中的表达
目的 探讨TLR4、COX-2在胆囊癌组织中的表达及在胆囊癌发展过程中的影响.方法 将20例胆囊癌(A组)、20例慢性胆囊炎(B组)及20例正常胆囊(C组)组织,分别应用免疫组化(ELSA)检测以上60标本中TLR4与COX-2的表达及相关性探讨.结果 3 组患者组织中的TLR4与COX-2的表达水平比较(t=5.21、5.11、6.13,F=4.02,P<0.05,差异具有统计学意义),3组患者组织中的TLR4与COX-2的表达呈正相关(P<0.05).结论 TLR4与COX-2与胆囊癌中发生发展密切相关,两者表达呈正相关.
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血必净对内毒素诱导血管内皮细胞TLR4-NF-kB炎症信号通路表达的影响
目的：探讨血必净对内毒素( LpS)诱导血管内皮细胞TLR4-NF-kB 炎症信号通路表达的影响。方法体外培养血管内皮细胞，将细胞分为3组：正常对照组、 LpS组和血必净组。用Western blot检测TLR4和核转录因子-kB p65( NF-kB p65)蛋白的表达情况；用ELISA方法检测TNF-α含量。结果与对照组相比， LpS组TNF-α浓度明显增加， TLR4和NF-kB p65表达增加；血必净能明显抑制TNF-α浓度以及TLR4和NF-kB p65的表达(P<0.01)。结论血必净可能通过TLR4-NF-kB信号通路，抑制炎症反应，减少TNF-α蛋白含量。
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益气活血复方含药血清对人脐静脉内皮细胞TLR4/NF-KB信号通路及TNF-a ICAM-1 mRNA表达的影响
目的:研究益气活血复方含药血清对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Toll样受体4(TLR4)/NF-KB及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、细胞间黏附分子(ICAM-1)mRNA表达的影响,探讨益气活血复方含药血清防治动脉粥样硬化(As)的机制.方法:(1)选择新西兰大耳白兔20只,随机分为4组,即正常组、中药高浓度组、中药中浓度组、中药低浓度组,每组5只.以上各组白兔分别以生理盐水和高、中、低浓度益气活血复方连续灌胃7天.末次灌胃给药2h后,心脏采血,离心后分离血清.(2)体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激后,分别加入高、中、低浓度益气活血复方含药血清干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的表达.结果:用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLK4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1mRNA的高表达(与空白对照组比较P＜0.01),用益气活血复方含药血清干预以后显著抑制TLR4、NF-KB、TNF-a及ICAM-1 mRNA的高表达(与模型组比较P＜0.01或P＜0.05).结论:益气活血复方可阻断TLK4/NF-KB信号通路的高表达,同时抑制TNF-a及ICAM-1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.
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基于TLRs通路探讨脾胃培源灌肠方对溃疡性结肠炎大鼠干预作用
目的:观察脾胃培源灌肠方对溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠血清CRP含量的影响,通过研究TLR4蛋白在溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中的表达,探讨TLRs信号传导通路在溃疡性结肠炎发病过程中的作用以及脾胃培源灌肠方的治疗机制.方法:选用SD健康雄性大鼠120只,将大鼠随机分为:空白组、模型组、美沙拉嗪组、脾胃培源灌肠方(高、中、低剂量)组,每组20只,采用TNBS/乙醇法复制UC大鼠模型诱导溃疡性结肠炎.造模成功后,空白组和模型组分别予生理盐水3 mL/d灌肠;美沙拉嗪组予美沙拉嗪悬浊液(0.36 g/L)3 mL/d灌肠;脾胃培源灌肠方(高、中、低剂量)组分别按含不同生药浓度(0.56 g/L、0.28 g/L、0.14 g/L)的中药汤剂3mL/d灌肠,持续15 d,末次给药24 h后处死大鼠,取结肠组织.通过HE染色观察大鼠结肠黏膜组织病理学的改变,并采用Elisa法和Western bloting法检测血清CRP含量及TLR4的蛋白表达.结果:模型组血清CRP含量及TLR4蛋白表达较空白组显著升高(P＜0.05);脾胃培源灌肠方(高、中、低)组和美沙拉嗪组血清CRP含量及TLR4蛋白表达较模型组显著降低(P＜0.05),但美沙拉嗪组和脾胃培源灌肠方(高、中、低剂量)组4组间采取两两比较,两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:脾胃培源灌肠方能明显改善模型大鼠的结肠组织损伤及有效抑制结肠组织中TLR4蛋白的表达,说明TLRs信号转导通路参与了UC发病过程,脾胃培源灌肠方治疗UC可能是通过干预该通路的表达而实现.
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热毒平抗中暑内毒素血症信号转导机制研究
目的:探讨中药复方制剂热毒平抗中暑内毒素血症的机制,为该类药物在重症中暑治疗中的运用打下基础.方法:在干球温度(34.5±0.5)℃,相对湿度(60±5)%的条件下建立小鼠中暑内毒素血症模型,将40只小鼠随机分为热毒平组、西黄芪胶组、生理盐水组、高温对照组和正常对照组.提取腹腔巨噬细胞RNA,用KT-PCK的方法检测腹腔巨噬细胞TLR4和NF-KB mRNA的表达情况.结果:热毒平组小鼠TLR4和NF-KB mRNA的表达低于西黄芪胶组、高温对照组、生理盐水组(P<0.05),而与正常对照组相近.结论:下调内毒素信号转导上游和中游关键分子的转录表达,减少细胞因子分泌,是热毒平抗中暑内毒素血症的重要机制之一.
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TLR4在肝癌细胞株HepG-2的表达
Toll样受体(toll-like receptors,TLR)是炎症信号传递的门户蛋白,在免疫防御反应中起重要作用.TLR4(Toll-like receptors 4,TLR4)是第一个发现的哺乳动物的Toll样受体,TLR4主要表达在淋巴样组织(如脾)和外周血白细胞如单核巨噬细胞、树突状细胞、小部分的表皮细胞系以及T、B淋巴细胞系上[1].
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TLR4与脓毒症性急性肾损伤相关性研究
目的:探讨TLR4与脓毒症性急性肾损伤的相关性,科学提出脓毒症患者预后情况.方法:采用回顾性方法分析,选取我院自2010年1月-2013年1月以来收治的60例脓毒症患儿,选择同期的60例健康儿童为对照组,进行TLR4(Asp299Gly、Thr399Ile)基因多态性检测,通过计算多态位点在两组中的分布频率,按照Hardy-Weinberg遗传平衡定律进行检验,从而比较不同组别之间的各个基因频率是否有显著的差异.结果:60例脓毒症患儿中发现TLR4出现突变基因,而60例健康儿童中并没有发现突变基因,具有差异统计学意义(P＞0.05).结论:TLR4(Asp299Gly、Thr399Ile)基因多态性与脓毒症有密切的关系,不同个体对脓毒症的易感性也存在不同的个体差异,在临床上表现以及预后可能都有所不同,需要进行进一步的研究.
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TRAF6在TLR4信号通路介导的2型糖尿病性肾病中的作用
中国2型糖尿病（T2DM）的患病率正在逐年增高，且发病年龄逐渐趋于年轻化，其中糖尿病性肾病（diabetic nephropathy）是糖尿病主要死亡原因之一，并成为末期肾衰竭的主要病因之一。随着炎症因子和通路发病机制的逐渐完善，免疫因素在DN患者的发病过程中被越来越关注。抑制免疫炎症的应答有望成为治疗糖尿病肾病的新手段。研究证实肿瘤坏死因子相关因子6（TNF receptor－associated factor6，TRAF6）参与的TLR4（Toll－like－receptor s 4，TLR4）炎症信号通道在糖尿病肾病的免疫炎症机制及胰岛素抵抗中发挥重要作用，可为糖尿病肾病研究发病机理提供新思路，为寻找治疗或延缓糖尿病肾病药物新靶点奠定基础。
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HBVDNA阳性孕妇TLR4及IL-12、IL-4与HBV宫内感染关系的研究
目的:研究HBVDNA阳性孕妇孕晚期使用HBIG后,HBsAg、HBVDNA、TLR4及IL-12、IL-4的变化与HBV宫内感染的关系,探讨免疫失败的原因,为制定新的治疗模式和(或)研发更高效的疫苗提供理论实验依据.方法:将100例HBVDNA阳性的HBV感染孕妇分为干预组(使用HBIG) 53例和未干预组47例,20例正常妊娠孕妇为对照组.采用荧光定量PCR法检测孕妇和脐血中HBVDNA,流式细胞术检测孕妇外周血单核细胞上TLR4的表达,ELISA法检测孕妇血清中IL-12、IL-4水平.结果:HBVDNA阳性孕妇孕期使用HBIG前后HBsAg、HBVDNA、TLR4及IL-12水平无改变,差异无统计学意义(P＞0.05),与未干预组比较差异无统计学意义(P＞0.05),而IL-4水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,HBVDNA阳性孕妇IL-12水平及TLR4表达水平降低,而IL-4水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);干预组宫内感染率为与未干预组差异无统计学意义(P＞0.05);宫内感染组TLR4表达水平明显低于宫内未感染组,差异无统计学意义(P＜0.01).结论:HBVDNA阳性孕妇产前使用HBIG不能改善Th1/Th2型因子失衡和降低HBVDNA复制及宫内感染率,HBV宫内感染孕妇TLR4表达不足,机体免疫处于抑制状态.
关键词： HBVDNA阳性孕妇 HBV宫内感染 TLR4 IL-12 IL-4
