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肺与大肠 LPS 信号通路相关性的实验研究
目的：研究肺与大肠LPS信号通路变化的相关性。方法：将实验大鼠随机分为生理组、高氧组、低氧组、限食组和限水组，通过测定肺与大肠中TLR4、MD2和CD14的变化观察肺与大肠LPS信号通路的相关性。结果：高氧组和低氧组中肺部TLR4和MD2增高时，肠部也有所增高（P＜0.05），限食组和限水组中肠部TLR4和MD2增高时，肺部亦有增高（P＜0.05）。结论：可以认为肺与大肠在LPS信号通路TLR4和MD2中有相关的协同识别。
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穿心莲内酯对内毒素诱导急性肺损伤大鼠TLR4、CD14、MD2mRNA表达的影响
目的:探讨穿心莲内酯(andrographolide,AND)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠TLR4(Toll-like receptor 4)、CD14、髓样分化蛋白-2(MD2) mRNA表达的影响.方法:SD大鼠36只,随机分6组:对照组、LPS组;穿心莲内酯组,每组再分为4h、8h两个亚组.向气管内滴注脂多糖(LPS) (10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型,穿心莲内酯组LPS滴注后立即予穿心莲内酯注射液尾静脉注射干预,分别于LPS处理后4h、8h取血和肺组织,测定各组大鼠动脉血氧分压(PaO2),测肺湿干比重(wet weight/dry weight,W/D);测定肺组织TLR4、CD14、MD2 mRNA表达的变化;观察各组大鼠肺组织的病理改变.结果:LPS组大鼠PaO2呈进行性降低;肺体质量指数明显增加;肺组织TLR4、CD14、MD2 mRNA表达明显增加;肺组织病理示肺内中性粒细胞大量浸润,伴出血、透明膜形成;穿心莲内酯组的各项指标均较LPS损伤组减轻.结论:穿心莲内酯能降低LPS诱导急性肺损伤大鼠TLR4、CD14、MD2 mRNA的表达,减轻肺组织的病理损害.
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TLR4 及MD2 反义基因对内毒素诱导的肺泡Ⅱ型细胞活化的影响
目的 观察Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)及myeloid differentiation protein 2(MD2)反义基因对内毒素(lipopolysaccharide,LPS)诱导的肺泡Ⅱ型细胞NF-κB活化的影响. 方法 培养的肺泡Ⅱ型细胞分为:正常细胞(对照)组、LPS组、LPS+转染空载体组、LPS+转染TLR4反义基因组、LPS+转染MD2反义基因组、LPS+转染TLR4-MD2反义基因组(n=8).Northern blot检测转染细胞的TLR4 及MD2 mRNA表达,Western blot检测转染细胞TLR4及MD2蛋白表达,电泳迁移率改变法检测 NF-κΒ的活性,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α和IL-6含量. 结果 与对照组比较,LPS刺激后的细胞TLR4及MD2 mRNA和蛋白表达、NF-κB活性、TNF-α和IL-6的生成均显著增加(P<0.01);而转染反义基因组细胞与其他LPS刺激组比较,TLR4 及MD2 mRNA和蛋白的表达、NF-κB活性及TNF-α和IL-6的含量均明显降低(P＜0.01). 结论 TLR4及MD2反义基因能有效抑制LPS诱导的肺泡Ⅱ型细胞的活化.
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人TLR4及MD2基因反义真核表达载体的构建
目的构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体,为研究其在肺炎症反应中的作用奠定基础.方法通过PCR技术扩增出TLR4及MD2基因片段,然后分别反向插入真核表达载体pEFBOS的多克隆位点,后对产生的重组子进行酶切和测序鉴定.结果扩增出的TLR4目的片段为2.6 kb,MD2为0.5 kb,并成功地连接到pEFBOS载体上,DNA测序结果也显示插入片段为目的片段.结论成功构建人TLR4及MD2基因反义真核表达载体.
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MD2在内毒素激活肺泡Ⅱ型上皮细胞中的表达及作用
目的 探讨髓样分化蛋白(myeloid differentiation protein-2,MD2)在内毒素(LPS)激活肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡcells)中的表达及可能作用机制.方法 通过RT-PCR的方法检测MD2 mRNA在ATⅡcells的表达;电泳迁移率改变法检测LPS刺激后的ATⅡcells NF-κB活性的变化;ELISA检测ATⅡcells培养上清中TNF-α和IL-6的含量变化.结果 正常ATⅡcells表达有MD2 mRNA,LPS刺激后表达增强;其表达在1～103ng/ml LPS范围内呈浓度依赖性增强.LPS刺激后,ATⅡcells NF-κB活性及TNF-α和IL-6的生成均呈浓度依赖性的增强.结论 MD2在LPS激活ATⅡcells中起着重要作用.
